Untersuchungen zur Kausalität von HPV-DNA-Integration in der Zervixkarzinogenese:
Gespeichert in:
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Jena
[2018]
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Beschreibung: | 135 Seiten Illustrationen 30 cm 1 CD-ROM |
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adam_text | INHALTSVERZEICHNIS 1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 3
ZUSAMMENFASSUNG 4
1 EINLEITUNG 6
1.1 DAS ZERVIXKARZINOM UND SEINE VORSTUFEN
1.2 RISIKOFAKTOREN UND PRAEVENTION DES ZERVIXKARZINOMS
1.3 HUMANE PAPILLOMVIREN
1.3.1 GENOM
1.3.2 NATUERLICHER LEBENSZYKLUS 10
1.3.3 HPV IN DER ZERVIXKARZINOGENESE 12
1.4 HPV-DNA-INTEGRATION 15
1.4.1 HOT SPOTS UND MECHANISMUS 16
1.4.2 AUSWIRKUNGEN AUF ZELLULAERER EBENE 17
1.4.3 AUSWIRKUNGEN AUF VIRALER EBENE 18
1.4.4 ZEITPUNKT DER HPV-DNA-INTEGRATION UND BEZUG ZUR PROGRESSION 19
1.4.5 DETEKTION VON HPV-DNA-INTEGRATEN 19
1.5 INTRATUMORALE HETEROGENITAET UND KLONALITAET 21
1.6 TUMORSPEZIFISCHE NUKLEINSAEUREN 22
1.7 DIGITALE PCR 23
1.8 DAS ZIM-PROJEKT 24
1.9 FRAGESTELLUNG 26
2 MATERIALEN 28
2.1 CHEMIKALIEN 28
2.2 ENZYME 28
2.3 KITS UND FERTIGLOESUNGEN 29
2.4 VERBRAUCHSMATERIALIEN 29
2.5 SOFTWARE 29
2.6 PUFFER 30
2.7 GERAETE 30
2.8 ZELLLINIEN-DNAS 31
2.9 OLIGONUKLEOTIDE 31
2.10 KLINISCHE PROBEN 31
2.10.1 VERGLEICH VON QPCR UND DPCR 31
2.10.2 TUMOR-UND ABSTRICH-DNA VON PATIENTINNEN MIT ZERVIXKARZINOM 32
2.10.3 PROBEN VON CIN-PATIENTINNEN 34
3 METHODEN 36
3.1 PROBENVORBEREITUNG 36
3.1.1 DNA-ISOLATION 36
3.1.2 RNA-ISOLATION 36
3.1.3 CDNA-SYNTHESE 37
3.1.4 KLONIERUNG VON VIRAL-ZELLULAEREN UEBERGANGSSEQUENZEN 37
3.2 PCR 38
3.2.1 VCJ-PCR 38
3.2.2 QUANTITATIVE PCR 38
3.2.3 DIGITALE PCR - RAINDANCE TECHNOLOGIES 39
3.2.4 TAQMAN-PCR 40
3.2.5 DIGITALE PCR - KOOPERATION MIT DEM IPHT JENA 41
3.2.5.1 DIGITALE-PCR 41
SO OO
O S
3.2.5.2 BERECHNUNGEN 42
3.2.6 DUPLEX-NESTED-PCR 42
3.3 IDENTIFIZIERUNG VON VIRAL-ZELLULAEREN UEBERGANGSSEQUENZEN 43
3.3.1 DAS TEN 16-VERFAHREN 43
3.3.2 DER APOT-ASSAY 49
3.4 RNA--S*7N-HYBRIDISIERUNG MITTELS BDNA-TECHNOLOGIE 50
3.5 STATISTISCHE AUSWERTUNG 52
4 ERGEBNISSE 53
4.1 PROJEKTUEBERSICHT UND EINORDNUNG VORANGEGANGENER STUDIEN 53
4.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR DIGITALEN PCR 54
4.2.1 VERGLEICH VON QPCR UND DPCR ANHAND DER QUANTIFIZIERUNG VON
HPV-MRNA 54
4.2.2 QUANTIFIZIERUNG VON VIRAL-ZELLULAEREN UEBERGANGSSEQUENZEN MITTELS
DPCR 57
4.3 BEGLEITUNG DES TEN16-TECHNOLOGIETRANSFERS 59
4.3.1 IDENTIFIZIERUNG GEEIGNETER PROBEN 59
4.3.2 LEISTUNGSBEWERTUNG DES TEN16-VERFAHRENS 60
4.3.2.1 VERGLEICH DER TEN16-LEISTUNG VON DKFZ UND ATLAS BIOLABS GMBH 61
4.3.2.2 VERGLEICH DER TEN16-LEISTUNG MIT DNA AUS TUMORGEWEBE UND DNA AUS
ABSTRICHEN 62
4.3.2.3 IDENTIFIZIERUNG VON VIRAL-ZELLULAEREN UEBERGANGSSEQUENZEN IN DER
KANDIDATENLISTE 63
4.3.2.4 VCJ-PCRS NEUER KANDIDATEN 64
4.4 KAUSALITAET VON HPV-DNA-INTEGRATION 65
4.4.1 INTEGRATIONSHAEUFIGKEIT IN KREBSVORSTUFEN 66
4.4.2 ZEITLICHES AUFKOMMEN UND ZEITLICHE STABILITAET VON
HPV-DNA-INTEGRATEN 67
4.4.3 RAEUMLICHE STABILITAET VON HPV-DNA-INTEGRATEN 69
4.4.3.1 ANALYSE DER VCJ-FRAGMENT-VERTEILUNG MITTELS
IN-STTW-HYBRIDISIERUNG 70
4.4.3.2 ANALYSE DER VCJ-FRAGMENT-VERTEILUNG DURCH MIKRODISSEKTION UND
VCJ-PCR 73
4.4J.3 ANALYSE DER VCJ-FRAGMENT-VERTEILUNG WEITERER PROBEN 75
4.4.4 LOKALISATION UND GENETISCHER KONTEXT DELEKTIERTER
HPV-DNA-INTEGRATE 78
5 DISKUSSION 80
5.1 DIGITALE PCR 80
5.2 BEGLEITUNG DES TEN16-TECHNOLOGIETRANSFERS 85
5.2.1 TEN 16-LEISTUNGSBEWERTUNG ANHAND VON TUMOR-DNA 86
5.2.2 TEN 16-LEISTUNGSBEWERTUNG ANHAND VON ABSTRICH-DNA 87
5.2.3 ARTEFAKTE 88
5.2.4 TEN16-AUSGANGSMATERIAL 90
5.3 KAUSALITAET VON HPV-DNA-INTEGRATION 92
5.3.1 INTEGRATIONSHAEUFIGKEIT IN KREBSVORSTUFEN 93
5.3.2 ZEITLICHES AUFKOMMEN UND ZEITLICHE STABILITAET VON
HPV-DNA-INTEGRATEN 95
5.3.3 RAEUMLICHE STABILITAET VON HPV-DNA-INTEGRATEN 97
5.3.4 LOKALISATION UND GENETISCHER KONTEXT DELEKTIERTER
HPV-DNA-INTEGRATE 100
5.4 SCHLUSSFOLGERUNGEN 103
ANHANG 105
LITERATURVERZEICHNIS 116
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 130
TABELLENVERZEICHNIS 131
DANKSAGUNG 133
EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 135
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