Genetische Ursachen des MRKH-Syndroms und Fusionsanomalien der Müllerschen Gänge:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Münster
2017
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| Beschreibung: | v, 149, XXVI Blätter Diagramme 30 cm |
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
KAPITEL 1
EINLEITUNG...........................................................................................................
1
1.1 WEIBLICHE STERILITAET UND
INFERTILITAET..................................................................................
1
1.2 WEIBLICHE GENITALE
FEHLBILDUNGEN...................................................................................
1
1.3 KLASSIFIKATION DER WEIBLICHEN GENITALEN FEHLBILDUNGEN
..................................................
2
1.4
MAYER-ROKITANSKY-KUESTER-HAUSER-SYNDROM...................................................................4
1.4.1 ASSOZIIERTE
FEHLBILDUNGEN.........................................................................................6
1.5 SYNDROMALE ERKRANKUNGEN, WELCHE MIT MALFORMATIONEN DER
..........................................
7
MUELLERSCHEN GAENGE
EINHERGEHEN.....................................................................................7
1.6 EMBRYOLOGIE UND GENETIK DER GENITALENTWICKLUNG
.........................................................
9
1.7 GENETIK DES MRKH-SYNDROMS UND DER FUSIONSSTOERUNGEN
DER......................................12
MUELLERSCHEN
GAENGE........................................................................................................
12
1.8
ZIELSETZUNG.....................................................................................................................18
KAPITEL 2 MATERIAL UND
METHODEN.......................................................................................
19
2.1
MATERIALIEN...................................................................................................................19
2.1.1
CHEMIKALIEN............................................................................................................
19
2.1.2
ENZYME...................................................................................................................21
2.1.3 READY TO USE
(KITS).................................................................................................21
2.1.4
PRIMER......................................................................................................................22
2.1.5
PATIENTEN..................................................................................................................22
2.1.6 GROESSEN- UND
MOLEKULARGEWICHTSMARKER.................................................................
22
2.1.7
ANTIKOERPER...............................................................................................................23
2.1.8
PLASMIDE..................................................................................................................23
2.1.9
BAKTERIENSTAEMME.....................................................................................................24
2.1.10
ZELLLINIE.................................................................................................................24
2.1.11 MEDIEN UND AGAR-
PLATTEN.....................................................................................24
2.1.12
ZELLKULTUR..............................................................................................................
25
2.1.13
PUFFER....................................................................................................................
25
2.1.14 ONLINE DATENBANKEN UND
PROGRAMME...................................................................
27
2.1.15
GERAETE...................................................................................................................
28
2.2
METHODEN.....................................................................................................................
30
2.2.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN - ARBEITEN MIT DNA
.......................................
30
2.2.1.1 AMPLIFIKATION GENOMISCHER
DNA........................................................................
30
2.2.1.2
DNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG.......................................................................30
2.2.1.3
PRIMERDESIGN.......................................................................................................
31
2.2.1.4 POLYMERASE-KETTENREAKTION (POLYMERASE CHAIN REACTION, PCR)
..........................
32
2.2.1.5
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE..................................................................................33
2.2.1.6 AUFREINIGUNG DER
PCR-PRODUKTE..........................................................................34
2.2.1.7 SEQUENZIERUNG NACH SAENGER
................................................................................
34
2.2.1.8 AUFREINIGUNG DER SEQUENZIERUNGS-PRODUKTE MITTELS
GEL-PERMEATIONS-
...............
35
CHROMATOGRAPHIE
(GPC)......................................................................................35
2.2.1.9 AUFTRENNUNG UND DETEKTION DER SEQUENZEN MITTELS
KAPILLARELEKTROPHORESE
.......
36
2.2.1.10 ANALYSE DER
SEQUENZDATEN.................................................................................
36
2.2.1.11 KLONIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN
....................................................................
37
2.2.1.11.1 RESTRIKTIONSSPALTUNG VON
DNA.......................................................................
37
2.2.1.11.2 AUFREINIGUNG DURCH GEL-EXTRAKTION
................................................................
37
2.2.1.11.3 EIGATION VON
DNA-FRAGMENTEN......................................................................
38
2.2.1.11.4 MUTAGENESE (SITE DIRECTED MUTAGENESIS)
.........................................................
38
2.2.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN - ARBEITEN MIT
RNA.........................................40
2.2.2.1 ISOLIERUNG VON TOTAL-RNA AUS HEK-293
ZELLEN.................................................40
2.2.22 RNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG UND QUALITAETSKONTROLLE MITTELS
..........................
TAPESTATION..........................................................................................................41
2.2.2.3 RNA-PANEL-ANALYSE MITTELS NEXT GENERATION SEQUENCING
..................................
41
2.2.2.3 AUSWERTUNG DER
RNA-PANEL-ANALYSE..................................................................44
2.2.3 MIKROBIOLOGISCHE
METHODEN....................................................................................
45
2.2.3.1 TRANSFORMATION VON KOMPETENTEN BAKTERIEN (E.COLI)
..........................................45
2.2.3.2 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA AUS BAKTERIEN (E.COLI)
...........................................45
2.2.4 ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN........................................................................................
47
2.2.4.1 EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON EUKARYOTISCHEN ZELLEN
...........................................
47
2.2.4.2
ZELLZUCHT.............................................................................................................
47
2.2.4.3 BESTIMMUNG DER
ZELLZAHL.....................................................................................48
2.2.4.4 TRANSIENTE
TRANSAKTION.......................................................................................48
2.2.4.5
ZELLEMTE...............................................................................................................48
2.2.5 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN
..............................................................................
49
2.2.5.1 PROTEINEXTRAKTION AUS
ZELLLYSAT.............................................................................49
2.2.5.2 BESTIMMUNG DER
PROTEINKONZENTRATION................................................................
49
2.2.5.3
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE...............................................................
50
2.2.5.4
WESTEM-BLOT........................................................................................................51
2.2.5.5 IMMUNODETEKTION VON IMMOBILISIERTEN PROTEINEN
................................................
51
2.2.5.6 STATISTISCHE
AUSWEITUNG.....................................................................................
52
KAPITEL 3
ERGEBNISSE..............................................................................................................
53
3.1
SEQUENZANALYSEN..........................................................................................................
53
3.1.1 SEQUENZANALYSE DES GENS
BMPR1B.......................................................................
53
3.1.2 SEQUENZANALYSE DES GENS
GDF6............................................................................
54
3.1.3 SEQUENZANALYSE DES GENS
KIF24............................................................................
55
3.1.4 SEQUENZANALYSE DES GENS
PAX2.............................................................................
58
3.1.5 SEQUENZANALYSE DES GENS
RBM8A..........................................................................
59
3.1.6 SEQUENZANALYSE DES GENS
SNAP29.........................................................................
61
3.1.7 SEQUENZANALYSE DES GENS
TBX6.............................................................................
62
3.1.8 SEQUENZANALYSE DES GENS
WNT9B..........................................................................
64
3.2 FUNKTIONELLE
ANALYSEN.................................................................................................
66
3.2.1 KLONIERUNG DER
LHX1- SOWIE WNT9B-
WILDTYPSEQUENZ........................................67
3.2.2 LHX1 MUTAGENESE AUF DEN PEGFP-N3-L//X7
VEKTOR..............................................68
3.2.3 WNT9B MUTAGENESE AUF DEN PEGFP-N3-W79 VEKTOR
......................................
70
3.2.4 WESTERN-BLOT
ANALYSEN...........................................................................................
71
3.2.4.1 NACHWEIS VON EXPRESSIONSUNTERSCHIEDEN ZWISCHEN DEM WNT9B-WT
..................
UND DEN
WNT9B-MUTANTEN.................................................................................
73
3.2.4.2 AUSWIRKUNG DES WNT9B-WT IM VERGLEICH ZU DEN WNT9B-MUTANTEN
................
AUF DIE EXPRESSION VON WNT4, PAX2 UND PAX8
.............................................
74
3.2.4.3 NACHWEIS VON EXPRESSIONSUNTERSCHIEDEN ZWISCHEN DEM LHX1-WT
......................
UND DEN
LHX1-MUTANTEN.....................................................................................
77
3.2.4.4 AUSWIRKUNG DES LHX1-WT IM VERGLEICH ZU DEN
LHX1-MUTANTEN........................
AUF DIE EXPRESSION VON WNT4, PAX2 UND
PAX8.................................................79
3.3 FOKUSSIERTE
TRANSKRIPTOMANALYSE..............................................................................
81
3.3.1 QUALITAETSKONTROLLE MITTELS TAPESTATION
....................................................................
81
3.3.2 AUSWIRKUNG DES EXOGENEN WNT9B-WT SOWIE DER MUTANTEN AUF
DIE.......................
TRANSKRIPTIONSRATE ASSOZIIERTER GENE
.......................................................................
83
3.3.2 AUSWIRKUNG DES EXOGENEN LHX1-WT SOWIE DER MUTANTEN AUF
DIE...........................
TRANSKRIPTIONSRATE ASSOZIIERTER
GENE.......................................................................
86
KAPITEL 4
DISKUSSION..............................................................................................................
89
4.1
SEQUENZANALYSEN........................................................................................................89
4.1.1 SEQUENZANALYSE DES GENS
BMPR1B.......................................................................
90
4.1.2 SEQUENZANALYSE DES GENS
GDF6............................................................................
91
4.1.3 SEQUENZANALYSE DES GENS
K1F24............................................................................
93
4.1.4 SEQUENZANALYSE DES GENS
PAX2............................................................................
95
4.1.5 SEQUENZANALYSE DES GENS
RBM8A..........................................................................
96
4.1.6 SEQUENZANALYSE DES GENS
SNAP29.........................................................................
97
4.1.7 SEQUENZANALYSE DES GENS
TBX6............................................................................99
4.1.8 SEQUENZANALYSE DES GENS
WNT9B.........................................................................102
4.1.9 ANALYSE DES GESAMTEN KOLLEKTIVS AUF GEN UEBERGREIFENDE ERGEBNISSE
...................
103
4.2 FUNKTIONELLE
ANALYSEN...............................................................................................
105
4.2.1 NACHWEIS VON EXPRESSIONSUNTERSCHIEDEN ZWISCHEN DEM WNT9B-WT
......................
UND DEN
WNT9B-MUTANTEN...................................................................................106
4.2.2 AUSWIRKUNG VON WNT9B-WT IM VERGLEICH ZU DEN
WNT9B-MUTANTEN...................
AUF DIE EXPRESSION VON WNT4, PAX2 UND
PAX8.................................................107
4.2.3 NACHWEIS VON EXPRESSIONSUNTERSCHIEDEN ZWISCHEN DEM LHX1-WT
UND...................
LHX1-MUTANTEN....................................................................................................
108
4.2.4 AUSWIRKUNG VON LHX1- WT IM VERGLEICH ZU DEN LHX1-MUTANTEN
.........................
AUF DIE EXPRESSION VON WNT4, PAX2 UND
PAX8.................................................113
5.3 FOKUSSIERTE TRANSKRIPTOMANALYSE
............................................................................
114
5.3.1 AUSWIRKUNG DES EXOGENEN WNT9B-WT SOWIE DER MUTANTEN AUF DIE
..................
114
TRANSKRIPTIONSRATE ASSOZIIERTER
GENE......................................................................114
5.3.2 AUSWIRKUNG DES EXOGENEN LHX1-WT SOWIE DER MUTANTEN AUF DIE
......................
121
TRANSKRIPTIONSRATE ASSOZIIERTER
GENE......................................................................121
KAPITEL 5
SCHLUSSFOLGERUNG.................................................................................................
125
KAPITEL 6
AUSBLICK...............................................................................................................
127
KAPITEL 7
LITERATURVERZEICHNIS...........................................................................................
128
KAPITEL 8
APPENDIX..................................................................................................................
I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS.........................................................................................................XXI
T ABELLEN
VERZEICHNIS............................................................................................................
XXII
DANKSAGUNG.......................................................................................................................
XXIII
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG...................................................................................................XXIV
LEBENSLAUF..........................................................................................................................
XXV
|
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| author | Tewes, Ann-Christin 1986- |
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| spelling | Tewes, Ann-Christin 1986- Verfasser (DE-588)115241268X aut Genetische Ursachen des MRKH-Syndroms und Fusionsanomalien der Müllerschen Gänge Ann-Christin Tewes Münster 2017 v, 149, XXVI Blätter Diagramme 30 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Dissertation Westfälische Wilhelms-Universität Münster 2017 Beschränkt für den Austausch Müllerscher Gang (DE-588)4604957-5 gnd rswk-swf Genetik (DE-588)4071711-2 gnd rswk-swf Missbildung (DE-588)4039561-3 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Müllerscher Gang (DE-588)4604957-5 s Missbildung (DE-588)4039561-3 s Genetik (DE-588)4071711-2 s DE-604 B:DE-101 application/pdf http://d-nb.info/1150994622/04 Inhaltsverzeichnis DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=030663745&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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