Multiresistenz von Escherichia coli durch vermehrten Efflux bzw. verminderten Influx - Identifizierung und Charakterisierung klinischer Isolate:
Gespeichert in:
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| Veröffentlicht: |
Freiburg im Breisgau
[2018]
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INHALTSVERZEICHNIS________________________________I
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG.........................................................................................................
1
1.1 Z
IELSETZUNG
............................................................................................................
2
1.2 E
SCHERICHIA
COLI
: E
IGENSCHAFTEN
UND
KLINISCHE
R
ELEVANZ
...............................
3
1.3 A
NTIBIOTIKA
UND
IHRE
W
IRKUNGSWEISE
...................................................................5
1.4 R
ESISTENZENTWICKLUNG
UND
-M
ECHANISMEN
..........................................................
6
1.5 E
FFLUXPUMPEN
.........................................................................................................
8
1.5.1 SMR-TRANSPORTER
......................................................................................
10
1.5.2 MFS-TRANSPORTER.
......................................................................................
10
1.5.3 MATE-TRANSPORTER
....................................................................................
10
1.5.4 ABC-TRANSPORTER
.......................................................................................
11
1.5.5 RND-TRANSPORTER
......................................................................................
11
1.5.6 HEMMUNG VON EFFLUXPUMPEN
....................................................................
15
1.6 P
ROTEINE
DER
AEUBEREN
M
EMBRAN
........................................................................
17
1.6.1 REGULATION VON PROTEINEN DER AEUSSEREN MEMBRAN
....................................
18
2 MATERIAL UND
METHODEN...............................................................
19
2.1 B
AKTERIENSTAEMME
UND
L
OESUNGEN
.......................................................................
19
2.1.1
LABORSTAEMME............................................................................................
19
2.1.2 KLINISCHE
ISOLATE........................................................................................
20
2.1.3 NAEHRMEDIEN, PUFFER UND SONSTIGE LOESUNGEN
............................................
22
2.2 M
IKROBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.............................................................................
23
2.
2.1 KULTIVIERUNG UND
LAGERUNG........................................................................24
2.2.2 BESTIMMUNG DER MINIMALEN HEMMKONZENTRATION
.....................................
24
2.2.3
FARBSTOFF-AKKUMULATIONSASSAYS................................................................28
2.3 M
OLEKULARBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
..................................................................... 32
2.
3.1
DNA-ISOLIERUNG..........................................................................................32
2.3.2 GRADIENTEN-POLYMERASE-KETTENREAKTION
...................................................
33
2.3.3
GENEXPRESSIONSANALYSE............................................................................34
2.3.4
PRIMER.......................................................................................................
34
2.3.5
RNA-GEWINNUNG.......................................................................................36
2.3.6
CDNA-SYNTHESE........................................................................................36
2.3.7 DURCHFUEHRUNG DER REAL-TIME-PCR MITHILFE DES LIGHTCYCLER-SYSTEMS
..37
2.3 8 AUSWERTUNG DER LIGHTCYCLER-ERGEBNISSE
...............................................
38
3
ERGEBNISSE.....................................................................................................
41
3.1 MHK-R
ESISTENZPROFIL
........................................................................................
41
3.1.1 MHK-BESTIMMUNGEN UND EPI-WIRKUNGEN MITTELS STANDARD-MHK-PLATTE. 41
3.1.2 DEFINIERUNG DER TEST- UND KONTROLLGRUPPE
................................................
47
3.1.3 WEITERE
MHK-TESTUNGEN...........................................................................
50
3.1.4 STANDARD-MHKS MIT SUBINHIBITORISCHER COLISTIN-KONZENTRATION
.................
51
3.2 E
RGEBNISSE
DER
F
ARBSTOFF
-A
KKUMULATIONSASSAYS
.........................................
53
3.2.1 AUSWAHL GEEIGNETER FLUORESZENZFARBSTOFFE
.....................
53
3.2.2 ERGEBNISSE DER
LABORSTAEMME...........................................................
55
3.2.3 ERGEBNISSE DER KLINISCHEN
ISOLATE..............................................................58
3.2.4 FARBSTOFF- UND
EPI-KORRELATIONEN..............................................................61
3.3 G
ENEXPRESSION
VON
E
FFLUXPUMPEN
UND
P
ROTEINEN
DER
AEUBEREN
M
EMBRAN
. 64
3.3.1 KORRELATIONEN DER EXPRESSIONSERGEBNISSE
...............................................
68
4
DISKUSSION......................................................................................................
69
4.1 MHK-E
RGEBNISSE
..................................................................................................69
4.1.1 DIE WIRKUNG SUBINHIBITORISCHER COLISTIN-KONZENTRATIONEN
.........................
72
4.2 F
ARBSTOFF
-A
KKUMULATIONSASSAYS
.............................................................. 72
4.3 G
ENEXPRESSION
VON
E
FFLUXPUMPEN
UND
P
ROTEINEN
DER
AEUBEREN
M
EMBRAN
. 77
4.3.1 KORRELATIONEN DER GEN-EXPRESSION
...........................................................
81
4.4 F
AZIT
.......................................................................................................................
82
4.5 A
USBLICK
...............................................................................................................
83
5
ZUSAMMENFASSUNG......................................................................................85
6
LITERATURVERZEICHNIS................................................................................86
7
PUBLIKATIONEN...............................................................................................94
8 ANHANG
95
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