Die Rolle der Kinase RIPK1 in der Hepatokarzinogenese:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Aachen
[2018]
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Beschreibung: | V, 128 Seiten Illustrationen 30 cm |
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Datensatz im Suchindex
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adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG............................................................................................
1.1 DIE LEBER IM FOKUS DER
FORSCHUNG................................................
1.1.1 FUNKTIONEN DER LEBER
..............................................................
1.1.2 DER FEINBAU DER LEBER
............................................................
1.1.3 ENTSTEHUNG CHRONISCHER LEBERERKRANKUNGEN
..........................
1.2 DAS HEPATOZELLULAERE KARZINOM (HCC)
...........................................
1.2.1 EPIDEMIOLOGIE
.........................................................................
1.2.2 PROGNOSE UND THERAPIEMOEGLICHKEITEN
....................................
1.2.3 PROBLEME UND ANSAETZE FUER DIE ENTWICKLUNG NEUER THERAPIEN..
1.3 RIPK1 - VERMITTLER ZWISCHEN UEBERLEBEN, INFLAMMATION UND ZELLTOD
1.4 DIE ROLLE VON RIPK1 IM TNF-SIGNALWEG
.......................................
1.4.1 DIE TNF-INDUZIERTE AKTIVIERUNG VON NF-
K
B- UND AP-1
............
1.4.2 DIE EINLEITUNG DER APOPTOSE NACH TNF STIMULATION
................
1.4.3 DIE TNF-INDUZIERTE EINLEITUNG DER NEKROPTOSE
.......................
1.5
ZIELSETZUNG....................................................................................
2 MATERIAL UND METHODEN
.....................................................................
2.1 MATERIAL...............
2.1.1 ARBEITSGERAETE
2.1.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN
.............................................
2.1.3 CHEMIKALIEN UND KOMMERZIELLE KITS
.........................
2.1.4 PUFFER UND LOESUNGEN...............................................
2.1.4.1 PUFFER ZUR GENOTYPISIERUNG DER MAEUSE
..............
2.1.4.2 PUFFER UND LOESUNGEN FUER IMMUNHISTOCHEMIE
.....
2.1.4.3 PUFFER UND LOESUNGEN ZUR WESTERN-BLOT-ANALYSE
2.1.4.4 PUFFER UND LOESUNGEN FUER EMSA
.........................
2.1.4.5 PUFFER UND LOESUNGEN ZUR HEPATOZYTENISOLATION.,
2.1.5 ANTIKOERPER
2.1.5.1 PRIMAERANTIKOERPER FUER WESTERN BLOTS
...........
2.1.5.2 SEKUNDAERANTIKOERPER FUER WESTERN BLOTS
......
2.1.5.3 PRIMAERANTIKOERPER FUER IMMUNHISTOCHEMIE ....
2.1.5.4 SEKUNDAERANTIKOERPER FUER IMMUNHISTOCHEMIE
..
1
..1
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1
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.3
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23
23
24
26
27
28
28
28
29
29
2.15.5 SUPERSHIFT-ANTIKOERPER FUER EMSA
..............................................
29
2.1.6 OLIGONUKLEOTIDE/PRIMER-SEQUENZEN
................................................
30
2.1.6.1 PRIMER ZUR GENOTYPISIERUNG DER MAUSLINIEN MITTELS PCR
.......
30
2.1.6.2 PRIMER FUER REAL-TIME PCR
......................................................
31
2.1.6.3 PRIMER FUER
EMSA......................................................................31
2.1.7 ZYTOKINE UND INHIBITOREN FUER IN-VITRO VERSUCHE
................................
31
2.1.8
MAUSLINIEN.......................................................................................31
2.1.9 SOFTWARE UND INTERNETDIENSTE
..........................................................
35
2.2
METHODEN..............................................................................................
36
2.2.1 GENOTYPISIERUNG DER MAUSLINIEN MITTELS PCR
.................................
36
2.2.2 LPS-INJEKTION IN
MAEUSE....................................................................37
2.2.3 ANALYSE DES MAUSSERUMS
.......
........................................................
37
2.2.4 PARAFFINEINBETTUNG UND GEWEBESCHNITTE
.........................................
37
2.2.5 HAEMATOXYLIN/EOSIN (H/E) FAERBUNG
..................................................
38
2.2.6 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN
..................................................
38
2.2.7 IMMUNZELLFAERBUNGEN FUER 8220, CD3 UND F4/80
...............................
39
2.2.8 IMMUNFAERBUNGEN FUER CL. CASPASE-3, KI67 UND RELA/P65
................
39
2.2.9 IMMUNFAERBUNG FUER KOLLEGEN IV
........................................................
39
2.2.10 QUANTITATIVE IMMUNHISTOCHEMISCHE AUSWERTUNG
............................
40
2.2.10.1 AUSWERTUNG MURINER
IMMUNFAERBUNGEN....................................40
2.2.10.2 AUSWERTUNG HUMANER IMMUNFAERBUNGEN
...................................
40
2.2.11 DURCHFUEHRUNG DER HEPATOZYTENISOLATION UND
STIMULATION................41
2.2.12 RNA-ISOLIERUNG AUS HEPATOZYTEN
....................................................
42
2.2.13 QUANTITATIVE REAL-TIME-PCR (QRT-PCR)
.......................................
43
2.2.14 PROTEINISOLATION
...............................................................................
45
2.2.14.1 ISOLIERUNG DER LOESLICHEN UND UNLOESLICHEN PROTEINFRAKTIONEN
......
45
2.2.14.2 ISOLIERUNG DER KERNPROTEINE
......................................................
46
2.2.15 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG DER PROTEINE
........................................
46
2.2.16
WESTERN-BLOT-ANALYSE.....................................................................46
2.2.16.1
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE...................................46
2.2.16.2 WESTERN-BLOT
............................................................................
47
2.2.16.3 IMMUNDETEKTION DER PROTEINE
...................................................
47
2.2.17 EMSA (ELECTROPHORETIC MOBILITY SHIFT ASSAY)
....................................
48
2.2.18 STATISTISCHE AUSWERTUNG
.................................................................
49
IV
3
ERGEBNISSE.........................................................................................
3.1 MAEUSE MIT KONDITIONELLER DELETION VON RIPKL IN PARENCHYMATOESEN
LEBERZELLEN ZEIGEN KEINEN SPONTANEN LEBERPHAENOTYP
..........................
50
3.2 RIPK1 SCHUETZT DIE LEBER VOR DER ENTSTEHUNG AKUTER APOPTOTISCHER
SCHAEDEN NACH
LPS/TNF-APPLIKATION......................................................53
3.3 DIE ROLLE VON CASPASE-8 UND RIPK3 BEI DER VERMITTLUNG DES AKUTEN
LEBERSCHADENS IN R/P/D-DEFIZIENTEN MAEUSEN NACH LPS-INJEKTION
.........
56
3.4 ANALYSE DER ZUGRUNDELIEGENDEN MOLEKULAREN MECHANISMEN
................
58
3.5 DIE KO-DELETION VON RIPKL UND TRAF2 IN LPC FUEHRT ZUR SPONTANEN
HEPATOZYTENAPOPTOSE UND DEM AUFTRETEN VON LEBERDYSPLASIEN
............
63
3.6 RIPK1 UND TRAF2 VERHINDERN ZUSAMMEN DIE CASPASE-8-ABHAENGIGE
ENTWICKLUNG HEPATOZELLULAERER KARZINOME
...............................................
70
3.7 DIE SYNTHESERATE VON RIPK1 UND TRAF2 IN HUMANEN HCCS
HAT AUSWIRKUNGEN AUF DIE PROGNOSE DER PATIENTEN
................................
77
4
DISKUSSION..................................................................................................
80
4.1 RIPK1 IST NICHT ESSENTIELL FUER DIE AUFRECHTERHALTUNG DER LEBER
HOMOEOSTASE UNTER PHYSIOLOGISCHEN BEDINGUNGEN
.................................
81
4.2 RIPK1 SCHUETZT HEPATOZYTEN VOR DER EINLEITUNG DER APOPTOSE NACH
TNF-STIMULATION DURCH EINEN NF-
K
B UNABHAENGIGEN MECHANISMUS
.......
82
4.3 DIE UNTERSCHIEDLICHE ROLLE DER RIPK1-KINASE-AKTIVITAET UND DER
RIPK1-GERUESTSTRUKTUR BEI DER VERMITTLUNG AKUTER LEBERSCHAEDEN
..........
87
4.4 RIPK1 UND TRAF2 HABEN EINE REDUNDANTE ANTI-KARZINOGENE WIRKUNG
IN DER
LEBER............................................................................................
89
4.5 RIPK1 ALS POTENTIELLES THERAPEUTISCHES
ZIELMOLEKUEL................................94
4.6
AUSBLICK.................................................................................................96
5
REFERENZEN..................................................................................................99
6
ANHANG......................................................................................................
113
7
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS...........................................................................116
8
ABBILDUNGSVERZEICHNIS............................................................................121
9
TABELLENVERZEICHNIS.................................................................................123
10
PUBLIKATIONEN............................................................................................124
11 EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG........................................................................125
12
DANKSAGUNG..............................................................................................127
|
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