Molekulare und funktionelle Charakterisierung von Guanylat-bindenden Proteinen in Arabidopsis thaliana:
Gespeichert in:
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Erlangen ; Nürnberg
[2018]
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1 ZUSAMMENFASSUNG
..............................................................
1
2
SUMMARY.............................................................................................................................3
3
EINLEITUNG.............................................................................................................................5
3.1 GROSSE GUANOSINTRIPHOSPHAT-BINDENDE PROTEINE
.................................................
5
3.2 SUPERFAMILIE DER *DYNAMINE-LIKE
PROTEINS*............................................................5
3.3 GUANYLAT-BINDENDE PROTEINE (GBPS)
.............................................
7
3.4 DAS PFLANZLICHE IMMUNSYSTEM
..............................................................................
10
3.5 PSEUDOMONAS SYRINGAE PATHOVAR TOMATO (P
ST).................................................12
3.6 COLLETOTRICHUM
HIGGINSIANUM.................................................................................12
3.7 DER
ZELLTOD.................................................................................................................13
3.8 DER EINFLUSS VON STRESS UND ROS AUF P C D
........................................................17
3.9 DAS
WURZELAPIKALMERISTEM....................................................................................
18
3.10 ZIELSETZUNG DIESER
ARBEIT.......................................................................................
22
4
ERGEBNISSE.......................................................................................................................
24
4.1 IDENTIFIZIERUNG UND BIOINFORMATISCHE ANALYSE VON ATGBPS
.............................
24
4.2 SUBZELLULAERE LOKALISATION DER ATGBPS
................................................................
29
4.3 GEWEBESPEZIFISCHE EXPRESSIONSANALYSE DER ATGBPS
.....................................
32
4.4 FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG VON
ATGBPB.....................................................35
4.4.1 NACHWEIS DER GTPASE- UND ATPASE-AKTIVITAET
...........................................
35
4.4.2 CHARAKTERISIERUNG DER ATGBPB-KNOCK-DOWN-MUIANIE (GABI-KAT 028F01)
37
4.4.3 INFEKTIONSANALYSEN MIT PSEUDOMONAS SYRINGAE PV. TOMATO
.....................
39
4.4.4 INFEKTIONSANALYSEN MIT COLLETOTRICHUM HIGGINSIANUM
.................................
41
4.4.5 KOMPLEMENTAEREN DER ATGBPB-MUTANTE
.........................................................
43
4.4.6 ANALYSE DES WURZELWACHSTUMS DER ATGBPB-MUTANTE
................................
45
4.4.7 WEITERE CHARAKTERISIERUNG DES WURZELPHAENOTYPS DER ATGBPB-MUTANTE.
46
4.4.6 NAEHERE UNTERSUCHUNG DER TOTEN ZELLEN IN AFGFRPFR-WURZELN
......................
53
4.4.9 VISUALISIERUNG VON F-AKTIN, MIKROTUBULI UND CHROMATIN IN
AFGBPB-WURZELN
56
4.4.10 VERGLEICH DES TRANSKRIPTOMS VON WT-PFLANZEN UND AFGBPB-MUTANTEN
IM
KEIMLINGSSTADIUM AUF DER BASIS VON RNA-SEQUENZIERUNG (RNA-SEQ)
...............
59
4.5 FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG VON ATGBPA UND ATG BPC
.............................
64
4.5.1 CHARAKTERISIERUNG VON A. F/7A//ANA-MUTANTEN FUER
ATGBPA UND ATGBPC. 64
4.5.2 INFEKTIONSANALYSEN MIT P S
T............................................................................
.6 8
4.5.3 INFEKTIONSANALYSEN MIT COLLETOTRICHUM
HIGGINSIANUM..................................70
5
DISKUSSION.........................................................................................................................74
5.1 ALLGEMEINER VERGLEICH DER ATGBPS MIT DEN HSGBPS
......................................
74
5.2 ATGBPS SPIELEN KEINE ROLLE BEI DER PATHOGENABWEHR
.....................................
77
5.3 ATGBPB WEIST EINE GTPASE-AKTIVITAET
AUF............................................................ 80
5.4 EINE REDUKTION DER EXPRESSION VON ATGBPB WIRKT SICH AUF DIE
WURZELENTWICKLUNG A U S
......................................................................................................
82
5.5 ENTWICKLUNGSSPEZIFISCHE DEFEKTE UND EINE DESORGANISATION DER
ZELLSTRUKTUR
IM WURZELMERISTEM VON
ATGBPB............................................................... 84
5.5.1 DER PHAENOTYP DER ATGBPB-MUTANTE ZEIGT EINE AKKUMULATION VON TOTEN
ZELLEN 88
5.6 TRANSKRIPTOM-ANALYSE DURCH RNA-SEQUENZIERUNG WEIST AUF EINE
STRESSINDUZIERTE URSACHE DES WURZELPHAENOTYPS H IN
...................................................89
5.7 DIE ATGBPS ALS MITGLIEDER DER SUPAERFAMILIE DER *DYNAMINE-LIKE
PROTEINS* 101
6 MATERIAL UND
METHODEN.................................................................................................103
6.1 M
ATERIAL...................................................................................................................
103
6.1.1
ORGANISMEN.....................................................................................................
103
6.1.2
VEKTOREN............................................................................................................
104
6.1.3
OLIGONUKLEOTIDE................................................................................................105
6.1.4 LOESUNGEN UND
PUFFER.......................................................................................106
6.1.5 ANZUCHTMEDIEN
.....................
109
6.1.6 CHEMIKALIEN UND ENZYME
6.1.7 VERBRAUCHSMATERIAL
115
6.1.8 GERAETE UND
SOFTWARE........................................................................................116
6.2
METHODEN...................................................................
117
6.2.1
KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN.............................................................................
117
6.2.2 ALLGEMEINE MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN
.............................................
119
6.2.3 METHODEN ZUR ARBEIT MIT BAKTERIEN
............................................................
126
6.2.4 METHODEN ZUR ARBEIT MIT PFLANZEN
...............................................................
130
6.2.5
MIKROSKOPIE-TECHNIKEN..................................................................................142
6.2.6 BIOINFORMATISCHE
ANALYSEN............................................................................
143
7
LITERATURVERZEICHNIS......................................................................................................
146
8
ANHANG..........................................................................................
164
6.1 LOKALISIERUNG UND
GENEXPRESSION.....................................................................
164
6.2 GTPASE-AKTIVITAET.................................................
166
8.3 T U N E L
....................................................................................................................
170
6.4 A. TOA/ZANA-MARKERLINIEN
.......................................................................................
171
8.5
RNA-SEQ..................................................................................................................173
6.6 A.
FHA/ZANA-LNSERTIONSLINIEN..................................................................................174
8.7
INFEKTIONSVERSUCHE...............................................................................................
174
6.8
PLASMIDKARTEN........................................................................................................
175
8.9 PROTEIN-ALIGNMENTS UND PROTEINSEQUENZEN
.....................................................
176
9
LEBENSLAUF......................................................................................................................
164
10
DANKSAGUNG...................................................................................................................165
11
ERKLAERUNG........................................................................................................................
167
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