Funktions- und Inhibitionsuntersuchungen zu den von SLC22A1, SLC22A2 und SLC6A4 kodierten Transportproteinen OCT1, OCT2 und SERT:
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[2018]
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS....................................................................................
VII
1.
ZUSAMMENFASSUNG..........................................................................................1
2.
SUMMARY...........................................................................................................
7
3.
EINLEITUNG........................................................................................................
13
3.1 EINFLUSS VON TRANSPORTPROTEINEN AUF DIE PHARMAKOKINETIK UND WIRKUNG
VON
ARZNEISTOFFEN........................................................................................13
3.2 AUFNAHMETRANSPORTER DER
SOLUTE-CARRIER-SUPERFAMILIE..............................15
3.2.1 DIE ORGANISCHEN KATIONENTRANSPORTER OCT1 UND OCT2
....................
16
3.2.1.1 OCT1 (ORGANISCHER KATIONENTRANSPORTER 1, SLC22A1)
................
17
3.2.1.2 OCT2 (ORGANISCHER KATIONENTRANSPORTER 2, SLC22A2)
................
18
3.2.2 DER SEROTONINTRANSPORTER (SERT, SCL6A4)
........................................
18
3.3 TRANSPORTER-VERMITTELTE, KLINISCH RELEVANTE
ARZNEIMITTELINTERAKTIONEN
.......
20
3.3.1 OCT 1 -VERMITTELTE
ARZNEISTOFFINTERAKTIONEN..........................................21
3.3.2 OCT2-VERMITTELTE
ARZNEISTOFFINTERAKTIONEN..........................................23
3.3.3
EMA/FDA-EMPFEHLUNGEN....................................................................25
3.4 PHARMAKOGENETIK DES SEROTONINTRANSPORTERS UND DIE BEHANDLUNG
PSYCHIATRISCHER
ERKRANKUNGEN...................................................................29
3.4.1 DAS SEROTONERGE
SYSTEM.....................................................................29
3.4.2 DER SEROTONINTRANSPORTER ALS ZIELSTRUKTUR FUER ANTIDEPRESSIVA
.............
31
3.4.3 PHARMAKOGENETIK DES
SEROTONINTRANSPORTERS.....................................33
4. ZIELE DER VORLIEGENDEN
ARBEIT.......................................................................37
5. MATERIAL UND
METHODEN.................................................................................
39
5.1
MATERIAL....................................................................................................39
5.1.1
CHEMIKALIEN.........................................................................................
39
5.1.2
TESTSUBSTANZEN...................................................................................42
5.1.3 [3H]-, [14C]- UND NICHT-MARKIERTE CHEMIKALIEN FUER TRANSPORT
VERSUCHE
.............................................................................................
47
5.1.4 PUFFER UND
LOESUNGEN...........................................................................46
5.1.5 REAKTIONSSYSTEME (KIT SYSTEME)
........................................................
49
5.1.6
ENZYME...............................................................................................
50
5.1.7
ZELLEN....................................................................................................50
5.1.8
ANTIKOERPER..............................................................................................51
5.1.9 SPEZIFISCHE OLIGONUKLEOTIDPRIMER
........................................................
52
5.1.10
PLASMIDE.............................................................................................54
5.1.11
GERAETE.................................................................................................54
5.1.12 SOFTWARE UND DATENBANKEN
...............................................................
58
5.1.13
VERBRAUCHSMATERIALIEN.......................................................................60
5.2 METHODEN ZUR UNTERSUCHUNG DER INTERAKTION VON ARZNEISTOFFEN MIT DEN
OCTS..........................................................................................................63
5.2.1
ZELLKULTIVIERUNG.....................................................................................
63
5.2.2 QUANTIFIZIERUNG DES GESAMTPROTEINGEHALTS
........................................
65
5.2.3
TRANSPORTVERSUCHE...............................................................................66
5.2.3.1
AUFNAHMEVERSUCHE........................................................................66
5.2.3.2
INHIBITIONSVERSUCHE........................................................................68
5.2.4 UEBERPRUEFUNG DER SUBSTRATABHAENGIGKEIT DER INTERAKTION DER
ARZNEISTOFFE MIT DEN OCTS
..................................................................
69
5.2.5 STATISTISCHE
ANALYSE.............................................................................70
5.3 METHODEN ZUR UNTERSUCHUNG DER PHARMAKOGENETIK DES
SEROTONINTRANSPORTERS................................................................................71
5.3.1
ZELLKULTIVIERUNG.....................................................................................
71
5.3.2 AUSWAHL UND BEWERTUNG DER EINZELNUKLEOTID-POLYMORPHISMEN
.......
72
5.3.2.1
DATENBANKEN.................................................................................72
5.3.2.2 VORHERSAGE-PROGRAMME
...............................................................
72
5.3.2.3. IN SILICO MODELLIERUNG VON
SERT..................................................73
5.3.3 ETABLIERUNG DER GENETISCH VERAENDERTEN SLC6A4-EXPRESSIONS
PLASMIDE
..............................................................................................
74
5.3.3.1 UEBERPRUEFUNG UND AMPLIFIKATION DES PCMV6-ENTRY SLC6A4-
EXPRESSIONSPLASMIDS
....................................................................
74
5.3.3.2 MUTAGENESE VON SLC6A4
.............................................................
74
5.3.3.3 HERSTELLUNG DES PCMV6-ENTRY LEERVEKTORS
..................................
76
5.3.3.4 KONZENTRATIONS- UND REINHEITSBESTIMMUNG VON DNA- UND
RNA-LOESUNGEN..............................................................................77
5.3.3.5 DNA-ANALYSE MITTELS AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.........................
77
5.3.4 TRANSFEKTION VON HEK293-ZELLEN FUER DIE TRANSIENTE EXPRESSION VON
SERT...................................................................................................78
5.3.5 METHODEN DER
RNA-ANALYTIK................................................................79
5.3.5.1 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA
.........................................................
79
5.3.5.2 UMSCHREIBUNG DER RNA IN CDNA
.................................................
80
5.3.5.3 QUANTITATIVE REALTIME-PCR
.........................................................
80
5.3.6 METHODEN DER
PROTEINANALYTIK..............................................................63
5.3.6.1 GESAMTPROTEINISOLIERUNG AUS TRANSIENT TRANSFIZIERTEN HEK293-
ZELLEN.............................................................................................83
5.3.6.2 MEMBRANPROTEINISOLIERUNG AUS TRANSIENT TRANSFIZIERTEN
HEK293-ZELLEN..............................................................................
83
5.3.6 3 QUANTIFIZIERUNG DES
GESAMTPROTEINGEHALTS..................................84
5.3.6.4 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON PROTEINEN (SDS-PAGE)
....
64
5.3.6.5
IMMUNBLOTANALYSE.........................................................................85
5.3.6 6 ENTFERNEN VON
ANTIKOERPERN.............................................................87
5.3.6 7 IMMUNFLUORESZENZMIKROSKOPIE
.....................................................
67
5.3.7
TRANSPORTVERSUCHE..............................................................................
90
5.3.7.1 SEROTONIN-AUFNAHMEVERSUCHE
......................................................
90
5.3.7.2
INHIBITIONSVERSUCHE.......................................................................91
5.3.8 STATISTISCHE
ANALYSE............................................................................
92
6.
ERGEBNISSE...................................................................................................
93
6.1 INTERAKTION VON CA. 125 HAEUFIG VERSCHRIEBENEN ARZNEISTOFFEN MIT DEN
HUMANEN ORGANISCHEN KATIONENTRANSPORTERN OCT1 UND OCT2
..............
93
6.1.1 INTERAKTION VON CA. 125 HAEUFIG VERSCHRIEBENEN ARZNEISTOFFEN MIT
DEM ORGANISCHEN KATIONENTRANSPORTER
OCT1.....................................93
6.1.1.1 FUNKTIONELLE ANALYSE VON OCT1
...................................................
93
6.1.1.2 EINFLUSS VON ARZNEISTOFFEN AUF DEN OCT1-VERMITTELTEN MPP+-
TRANSPORT.......................................................................................
94
6.1.1.3 SUBSTRATABHAENGIGKEIT DER INTERAKTION DER ARZNEISTOFFE MIT
OCT1
............................................................................................
97
6.1.1.4 KLINISCHE SIGNIFIKANZ DER
OCT1-INHIBITION....................................98
6.1.2 INTERAKTION VON CA. 125 HAEUFIG VERSCHRIEBENEN ARZNEISTOFFEN MIT
DEM ORGANISCHEN KATIONENTRANSPORTER OCT2
..................................
101
6.1.2.1 FUNKTIONELLE ANALYSE VON OC
T2................................................. 101
6.1.2.2 EINFLUSS VON ARZNEISTOFFEN AUF DEN OCT2-VERMITTELTEN
METFORMIN-T
RANSPORT....................................................................103
6.1.2.3 EINFLUSS VON ARZNEISTOFFEN AUF DEN OCT2-VERMITTELTEN MPP+-
TRANSPORT
.....................................................................................
105
6.1.2.4 SUBSTRATABHAENGIGKEIT DER INTERAKTION DER ARZNEISTOFFE MIT
OCT2............................................................................................107
6.1.2.5 KLINISCHE SIGNIFIKANZ DER OCT2-LNHIBITION
..................................
111
6.1.3 TRANSPORTER-BASIERTE UNTERSCHIEDE BEZUEGLICH DER INTERAKTION MIT
DEN
ARZNEISTOFFEN...............................................................................
113
6.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR PHARMAKOGENETIK DES HUMANEN
SEROTONINTRANSPORTERS..............................................................................
114
6.2.1 IDENTIFIZIERUNG VON EINZELNUKLEOTID-POLYMORPHISMEN MIT
MOEGLICHEM EINFLUSS AUF DIE PROTEINSTRUKTUR UND -FUNKTION VON
SERT
............
.....................................................................................115
6.2.2 UNTERSUCHUNG DER TRANSIENT SERT-WILDTYP ODER SERT-MUTANTEN-
EXPRIMIERENDEN HEK293-ZELLINIEN AUF MRNA-EXPRESSION,
PROTEINEXPRESSION UND
-LOKALISATION..................................................120
6.2.3 UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES NICHT-SYNONYMER EINZELNUKLEOTID-
POLYMORPHISMEN AUF DIE TRANSPORTAKTIVITAET VON SERT
.....................
124
6.2.4 UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES NICHT-SYNONYMER EINZELNUKLEOTID-
POLYMORPHISMEN AUF DIE INHIBITION DES SERT-VERMITTELTEN
SEROTONIN-TRANSPORTS DURCH ANTIDEPRESSIVA
.....................................
127
7.
DISKUSSION.................................................................................................
131
7.1 INTERAKTION HAEUFIG VERSCHRIEBENER ARZNEISTOFFE MIT DEN HUMANEN
ORGANISCHEN KATIONENTRANSPORTERN OCT1 UND OCT2
......
......................
131
7.1.1 INTERAKTION DES HUMANEN ORGANISCHEN KATIONENTRANSPORTERS OCT1
MIT HAEUFIG VERSCHRIEBENEN
ARZNEISTOFFEN...........................................132
7.1.2 INTERAKTION DES HUMANEN ORGANISCHEN KATIONENTRANSPORTERS OCT2
MIT HAEUFIG VERSCHRIEBENEN
ARZNEISTOFFEN...........................................138
7.1.3 KORRELATION DER INTERAKTION DER ARZNEISTOFFE MIT OCT1 UND OCT2...
146
7.2 PHARMAKOGENETIK DES HUMANEN SEROTONINTRANSPORTERS SERT
...........
146
LITERATURVERZEICHNIS.........................................................................................157
TABELLENVERZEICHNIS.........................................................................................181
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
...................................................................................
183
VEROEFFENTLICHUNGEN..........................................................................................185
DANKSAGUNG.....................................................................................................187
|
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