Un canto popular: lugar: Perú, 2011
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| Format: | Elektronisch E-Book |
| Sprache: | Spanish |
| Veröffentlicht: |
[Bogotá]
Friedrich Ebert Stiftung, Centro de Competencia en Comunicación para América Latina
2011
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| Beschreibung: | 1 Online-Ressource (11 Seiten) |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABSTRACT 3
ZUSAMMENFASSUNG 4
1 EINLEITUNG 14
1.1 UEBERBLICK UEBER KNOCHENAUFBAU UND FUNKTION 14
1.1.1 KNOCHENFUNKTION 14
1.1.2 KNOCHENAUFBAU., 14
1.1.3 KNOCHENGRUNDSUBSTANZ 14
1.1.4 RNOCHENZELLEN : 15
1.2 UEBERBLICK UEBER DIE KNOCHENFRAKTUR UND DEN FRAKTURHEILUNGSPROZESS 15
1.2.1 FRAKTURDEFINITION UND MECHANISMEN 16
1.2.2 KLINISCHE SYMPTOME UND DIAGNOSTIK 16
1.2.3 FRAKTURBEHANDLUNG 16
1.2.4 KNOCHENHEILUNGSPROZESS 17
1.2.5 KNOCHENHEILUNGSSTOERUNG 19
1.3 DIE TRANSFORMING GROWTH FACTOR-FAMILIE 19
1.3.1 BOI\E MORPHOGENETIC PROTEINS (BMPS) ; 20
1.3.2 TGF-SS- UND BMP-REZEPTOREN UND SIGNALTRANSDUKTION 21
1.4 REGULATORISCHE PROTEINE IM BMP-SIGNALING 22
1.4.1 BAMBI (BMP AND ACTIVIN BOUND PROTEIN) 22
1.4.2 SMAD 6/7 ,.23
1.4.3 SMURF 112
(SMAD-UBIQUITIN-REGULATORY FACTOR) 23
1.4.4 SARA (SMAD ANCHOR FOR RECEPTOR ACTIVATION) 23
1.4.5 SKI/SNON (SLOAN-KLETTERING RETROVIRUS ONCOGENE HOMOLOGUE/
SKI-RELATED NOVEL
PROTEIN N) 24
1.5 TGF-SS UND BMP-INTERAKTION MIT DEM MAPK-PATHWAY 26
1.6 ZIELSETZUNG 26
* 2 MATERIAL UND METHODEN 27
2.1 KULTURMEDIUM DER OSTEOBLASTEN 27
. 2.1.1 BENOETIGTE MATERIALEN 27
2.1.2 HERSTELLUNG DES KULTURMEDIUMS ". 28
2.2 ISOLIERUNG DER PRIMAEREN HUMANEN OSTEOBLASTEN 28
2.2.1 BENOETIGTE MATERIALEN 28
SEITE 10
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2.2.2 DURCHFUEHRUNG 29
2.3 KULTIVIERUNG DER PRIMAEREN HUMANEN OSTEOBLASTEN 30
2.3.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 30
2.3.2 MEDIUMWECHSEL.: 30
2.3.3 PASSAGIERUNG 30
2.4 ZAEHLUNG UND AUSPLATTIERUNG DER ZELLEN 31
2.4.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 31
2.4.2 DURCHFUEHRUNG 32
2.5 PROTEINMESSUNG MIT LOWRY-TEST 32
2.5.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 32
2.5.2 STANDARDKURVE 33
2.5.3 DURCHFUEHRUNG 33
2.5.4 AUSWERTUNG 33
2.6 PROTEINISOLATION MIT RIPA- (RADIO IMMUNO PRECIPITATION ASSAYS)
BUFFER 34
2.6.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 34
2.6.2 HERSTELLUNG DER RFF A-LOESUNG 35
2.6.3 DURCHFUEHRUNG 35
2.7 INFIZIERUNG DER OSTEOBLASTEN MIT EINEM ADENO-VIRUS 35
2.7.1 BENOETIGTE MATERIALIEN -. -. 35
2.7.2 HERSTELLUNG VON VIRUSPARTIKELN 36
2.7.3 AD 5-BRE-LUC 36
2.7.4 INFIZIERUNG DER OSTEOBLASTEN 36
2.8 LUCIFERASE-ASSAY 37
2.8.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 37
2.8.2 DURCHFUEHRUNG 37
2.9 WESTERN BLOT 38
2.9.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 38
2.9.2' LOESUNGEN 39
2.9.3 -LISTE DER
ANTIKOERPER 41
2.9.4 DURCHFUEHRUNG 42
2.9.5 DENSITOMETRISCHE ANALYSE DER WESTERN BLOT ERGEBNIS 47
2.10 RNA-ISOLATION MIT TRIFAST ^ 47
2.10.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 47
SEITE 11
2.10.2 LOESUNGEN 48
2.10.3 DURCHFUEHRUNG DER RNA-ISOLATION 48
2.11 CDNA SYNTHESE 50
2.11.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 50
2.11.2 DURCHFUEHRUNG 50
2.12 REVERSE-TRANSKRIPTASE-POLYMERASE-KETTENREAKTION (RT-PCR) 52
2.12.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 52
2.12.2 REAKTIONSMECHANISMUS 52
2.12.3 VERWENDETE PRIMER 52
2.12.4 DURCHFUEHRUNG 54
2.12.5 DENSITOMETRISCHE ANALYSE DER PCR GELE 56
2.13 VIABILITAETSMESSUNG MIT ALAMAR-BLUE 56
2.13.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 56
2.13.2 DURCHFUEHRUNG 56
2.13.3 AUSWERTUNG 56
2.14 MESSUNG DER HISTON DEACETYLASE COMPLEX (HDAC)-AKTIVITAET-MESSUNG 56
2.14.1 BENOETIGTE MATERIALIEN 57
2.14.2 LOESUNGEN 57
2.14.3 REAKTIONSMECHANISMUS 58
* 2.14.4 DURCHFUEHRUNG 58
2.14.5 DATENANALYSE 58
2.15 STATISTISCHE AUSWERTUNG 59
3 ERGEBNISSE I 59
3.1 BMP 2 UND BMP 7 AKTIVIEREN DEN SMAD 1/5/8-SIGNALWEG IN HUMANEN
OSTEOBLASTEN
UND DIESER EFFEKT IST BEI BEIDEN PROTEINEN NACH 72 H STATISTISCH
SIGNIFIKANT 59
3.2 PCR-ANALYSE VON MIT BMP 2, BMP 7 UND TGF-SSI STIMULIERTEN ZELLEN 60
3.2.1 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SMAD 1 61
3.2.2 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SMAD 2 62
3.2.3 ERGEBNIS GEN EXPRESSION SMAD 3 63
3.2.4 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SMAD 4 64
3.2.5 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SMAD 5 65
3.2.6 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SMAD 6 66
3.2.7 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SMAD 7 67
3.2.8 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION ALK-1 68
SEITE 12
3.2.9 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION ALK-2 69
3.2.10 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION ALK-3 70
3.2.11 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION ALK-5 71
3.2.12 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION ALK-6 72
3.2.13 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION TGF-SS REZEPTOR II 73
3.2.14 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION BAMBI 74
3.2.15 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SARA 75
3.2.16 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SMURF 1 76
3.2.17 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SMURF 2 77
3.2.18 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SKI 78
3.2.19 ERGEBNIS GEN-EXPRESSION SNON 79
3.3 WESTERN BLOT-ANALYSE DER MIT BMP 2, BMP 7 UND TGF-SSI STIMULIERTEN
ZELLEN 80
3.3.1 ERGEBNIS PROTEINEXPRESSION P-SMAD 1/5/8 (PHOSPHO-SMAD 1/5/8) 81
3.3.2 ERGEBNIS PROTEINEXPRESSION P-P 42/44 (PHOSPHO-P 42/44) 82
3.3.3 ERGEBNIS PROTEINEXPRESSION P-P 38 (PHOSPHO-P 38) 83
3.3.4 ERGEBNIS PROTEINEXPRESSION TGF-SS-R (TGF-SS REZEPTOR) I 84
3.3.5 ERGEBNIS PROTEINEXPRESSION SNON 85
3.4 VALPROINSAEURE IN EINER HOECHSTKONZENTRATION VON 200 |IM ZEIGT KEINE
TOXIZITAET IN
OSTEOBLASTEN. 85
3.5 DIE AKTIVIERUNG DES SMAD 1/5/8 SIGNALINGS WIRD DURCH TGF-SSI
INHIBIERT, ABER DIESER
EFFEKT WIRD VON DER VALPROINSAEURE BESEITIGT 86
3.6 DIE HDAC-AKTIVITAET WIRD DURCH DIE STIMULATION MIT TGF-SSI
HOCHREGULIERT UND DURCH
DIE
VALPROINSAEURE INHIBIERT 88
3.7 WESTERN BLOT-ANALYSE MIT LANGZEITPRAESENZ VON TGF-SSI (4 TAGE, 8 TAGE,
12 TAGE,
16 TAGE) : : 89
4 DISKUSSION 92
5 AUSBLICK 103
6 ABBILDUNGSVERZEICHNIS I 104
7 TABELLENVERZEICHNIS 107
8 LITERATURVERZEICHNIS 108
9 LEBENSLAUF 118
10 DANKSAGUNG 120
SEITE 13 |
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