Griechisches Elementarbuch: Grundzüge des Griechischen zur Einführung in das Verständniss der aus dem Griechischen stammenden Fremdwörter
Gespeichert in:
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| Format: | Elektronisch E-Book |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Berlin ; Boston
De Gruyter Mouton
[2018]
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| Ausgabe: | Reprint 2018 |
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|---|---|
| adam_text | INHALT
1 EINLEITUNG 1
1.1 ENTDECKUNG DES GLYKOPROTEINS CLUSTERIN 1
1.2 STRUKTUR UND
BIOGENESE VON
SEZERNIERTEM CLUSTERIN 1
1.2.1 BIOGENESE VON SEZERNIERTEM CLUSTERIN 2
1.2.2 STRUKTUR VON SEZERNIERTEM CLUSTERIN 3
1.3 EIGENSCHAFTEN DES CLUSTERIN-GENS UND
DER TRANSKRIBIERTEN MRNAS 4
1.3.1 DER CLUSTERIN-GENLOCUS CODIERT FUER MEHRERE MRNA-VARIANTEN 4
1.3.2 VARIANTE 1 5
1.3.3 ALTERNATIVES SPLICING VON VARIANTE 1 7
1.3.4 VARIANTE 2 7
1.3.4.1 EXPRESSION VON
VARIANTE 2 7
1.3.4.2 EXON 1B CODIERT FUER MEHRERE UORFS 8
1.3.5 VARIANTE 3 8
1.4 NICHT-SEZERNIERTE FORMEN VON CLUSTERIN 9
1.4.1 VERSCHIEDENE HYPOTHESEN ZUR BIOGENESE INTRAZELLULAERER
CLUSTERIN-FOERMEN 9
1.4.1.1 ALTERNATIVE TRANSLATIONSSTARTPUNKTE 9
1.4.1.2 EXON-SKIPPING 10
1.4.1.3 RETROTRANSLOKATION VON HYPOGIYKOSYLIERTEM PSCLU 11
1.4.1.4 MISTRANSLOKATION DES SCLU PRAE-PROPROTEINS CLUI^G 12
1.4.2 POSTULIERTE LOKALISATION, STRUKTUR UND FUNKTIONEN
NICHT-SEZERNIERTER CLUSTERIN-FORMEN 12
1.4.2.1 NUKLEARES CLUSTERIN 12
1.4.2.2 MITOCHONDRIAL ASSOZIIERTES CLUSTERIN 13
1.5 REGULATION, FUNKTIONEN UND BINDUNGSPARTNER VON
CLUSTERIN 14
1.5.1 REGULATION DER EXPRESSION VON SEZERNIERTEM CLUSTERIN 14
1.5.2 BEKANNTE BINDUNGSPARTNER VON CLUSTERIN 15
1.5.3 EINFLUESSE VON CLUSTERIN AUF (PATHO-)PHYSIOLOGISCHE PROZESSE 16
1.5.4 CLUSTERIN BEI KREBSKRANKHEITEN: ONKOGEN ODER TUMORSUPPRESSOR?. 17
1.6 FUNKTION VON CLUSTERIN ALS
MOLEKULARES CHAPERON 18
1.6.1 CHAPERONE SIND HITZESCHOCKPROTEINE 18
1.6.2 SEZERNIERTES CLUSTERIN BINDET AN DENATURIERENDE PROTEINE UND
VERHINDERT DEREN AGGREGATION 19
1.6.3 SEZERNIERTES CLUSTERIN FOERDERT DIE AUFNAHME VON FEHLGEFALTETEN
PROTEINEN IN GEWEBSZELLEN 20
1.6.4 WIRKEN NICHT-SEZERNIERTE CLUSTERIN FORMEN ALS CHAPERONE? 21
1.7 ROLLE VON CLUSTERIN
WAEHREND DER APOPTOSE 21
1.7.1 MECHANISMEN DER ZELLULAEREN APOPTOSE 21
1.7.2 POTENTIELLE MODULATION DER INTRINSISCH INDUZIERTEN APOPTOSE DURCH
CLUSTERIN 22
1.8 ROLLE VON CLUSTERIN
IM RAHMEN
DER NF-KB-VERMITTELTEN SIGNALTRANSDUKTION 24
1.8.1 REGULATION DES NF-KB-SIGNALTRANSDUKTIONSWEGS 24
1.8.2 EINFLUSS VON CLU AUF DEN NF-KB-SIGNALTRANSDUKTIONSWEG 25
1.9 ZIELE DER ARBEIT 26
2 MATERIAL 28
2.1 LABORGERAETE 28
2.2 CHEMIKALIEN UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN 29
2.3 BIOLOGISCH AKTIVE SUBSTANZEN 30
III
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2.3.1 ANTIKOERPER. 30
2.3.2 DNA-PRIMER. 31
2.3.3 ENZYME 31
2.3.4 PLASMIDE 31
3 METHODEN 33
3.1 ARBEITEN MIT
ZELLKULTUREN 33
3.1.1 AUSSAAT, KULTUR UND KONSERVIERUNG VON ZELLLINIEN 33
3.1.2 BEHANDLUNG VON ZELLEN MIT MG-132, H2O2 UND ERHOEHTER TEMPERATUR. 35
3.1.3 TRANSIENTE TRANSFEKTION VON ZELLKULTUREN MIT EXPRESSIONSPLASMIDEN
36
3.1.4 SELEKTION EINES SCLU-UEBEREXPRIMIERENDEN EINZELKLONS 37
3.1.5 ERNTEN VON GESAMTZELLLYSATEN UND ZELLKULTURUEBERSTAENDEN 38
3.1.6 BESTIMMUNG DER CASPASE 3/7-AKTIVITAET 39
3.1.7 BESTIMMUNG DER NF-KB-AKTIVITAET 40
3.2 ARBEITEN MIT
BAKTERIEN 41
3.2.1 KULTUR, TRANSFORMATION UND KONSERVIERUNG VON BAKTERIEN 41
3.2.2 PLASMIDPRAEPARATION AUS TRANSFORMIERTEN DH5A BAKTERIEN 42
3.2.3 SELEKTION UND STIMULATION VON
CLU21
-449- UND CLUAMS-UEBEREXPRIMIERENDEN SG13009 BAKTERIEN ..43
3.3 RNA-ANALYTIK 44
3.3.1 RNA-PRAEPARATION 44
3.3.2 QUANTIFIZIERUNG VON RNA-LOESUNGEN 45
3.3.3 ERSTRANGSYNTHESE 45
3.4 DNA-ANALYTIK 46
3.4.1 QUANTIFIZIERUNG VON DNA-LOESUNGEN 46
3.4.2 SEQUENZIERUNG VON DNA-MOLEKUELEN NACH SANGER 46
3.4.3 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 46
3.4.4 RESTRIKTION UND DEPHOSPHORYLIERUNG VON DNA 48
3.4.5 LIGATION KOMPATIBLER DNA-ENDEN 49
3.4.6 POLYMERASE KETTENREAKTION 50
3.4.6.1 PAEPARATIVE PCR 51
3.4.6.2 KOLONIE-PCR 51
3.4.6.3 5 -RAPID AMPLIFICATION OF CDNA-ENDS 52
3.4.6.4 SITE-DIRECTED IN VITRO MUTAGENESE 54
3.4.6.5 SEMI-QUANTITATIVE RT-PCR (SQPCR) 56
3.4.6.6 QUANTITATIVE RT-PCR (QPCR) 57
3.4.7 KLONIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN IN PLASMIDE 59
3.5 PROTEINANALYTIK 60
3.5.1 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION NACH BRADFORD 60
3.5.2 SDS-PAGE. 61
3.5.3 WESTERN-BLOT. 63
3.5.4 KOLLOIDALE COOMASSIE-FAERBUNG 65
3.5.5 FRAKTIONIERUNG VON GESAMTZELLLYSATEN 65
3.5.6 N-DEGLYKOSYIIERUNG VON GESAMTZELLLYSATEN 66
3.5.7 IMMUNCYTOCHEMIE UND LASER SCANNING MIKROSKOPIE 67
3.5.8 NICKEL-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE VIA * FAST PROTEIN LIQUID
CHROMATOGRAPHY 69
IV
3.5.9 UMPUFFERUNG UND RUECKFDLTUNG DER AUFGEREINIGTEN CLU-FORMEN 71
3.5.10 CD-SPEKTROSKOPIE 72
3.5.11 ANALYSE DER CHAPERONAKTIVITAET. 72
4 ERGEBNISSE 75
4.1 NICHT-SEZERNIERTE FORMEN VON
CLUSTERIN SIND ZELLSTRESS ASSOZIIERT 75
4.2 ANALYSE DER ENDOGEN EXPRIMIERTEN CLUSTERIN-MRNA-VARIANTEN 77
4.2.1 ERMITTLUNG DES TRANSKRIPTIONSTARTS VON VARIANTE 1 77
4.2.2 ALTERNATIVES SPLICING VON VARIANTE 1 79
4.2.3 QUANTITATIVE ANALYSE DER VERSCHIEDENEN CLUSTERIN-MRNA-VARIANTEN 80
4.3 EKTOPISCHE EXPRESSION VON CLUSTERIN-CDNAS
IN HEK-293-ZELLEN 83
4.3.1 PROTEINEXPRESSION AUSGEHEND VON DEN VERSCHIEDEN
QUSTERIN DNA-VARIANTEN 83
4.3.2 DIE EXPRESSION VON SEZERNIERTEM CLUSTERIN AUSGEHEND VON VARIANTE 2
UND VARIANTE 3 WIRD DURCH
DISTINKTE UORFS GEHEMMT 84
4.3.3 TRANSLATIONSINITIATION AN ALTERNATIVEN STARTCODONS AUFEXON 1 FUEHRT
ZUR EXPRESSION VON SCLU 85
4.4 CHARAKTERISIERUNG DER BIOGENESE NICHT-SEZERNIERTER
CLUSTERIN-ISOFORMEN 86
4.4.1 NICHT-SEZERNIERTE CLU-ISOFORMEN ENTSTEHEN DURCH ALTERNATIVE
TRANSLATIONSINITIATION AN DREI
VERSCHIEDENEN NUKLEOTID-TRIPLETTS 87
4.4.2 NICHT-SEZERNIERTE CLU-ISOFORMEN SIND IM CYTOSOL LOKALISIERT,
UNGLYKOSYLIERT UND UNTERLIEGEN
TEILWEISE POST-TRANSLATIONALER REGULATION 88
4.4.2.1 FRAKTIONIERUNG VON GESAMTZELLLYSAT 88
4.4.2.2 IMMUNCYTOCHEMIE MITTELS LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE
CLUSTERIN-UEBEREXPRIMIERENDER
ZELLEN 89
4.4.2.3 DEGLYKOSYLIERUNG VON ZELLLYSATEN
CLU-UEBEREXPRIMIERENDER ZELLEN 91
4.4.2.4 POST-TRANSLATIONALE MECHANISMEN TRAGEN ZUR AKKUMULATION VON
DISTINKTEN CLU-ISOFORMEN IN MG-132
BEHANDELTEN ZELLEN BEI 92
4.5 FUNKTIONELLE UNTERSUCHUNG DISTINKTER CLU-ISOFORMEN 93
4.5.1 AUFREINIGUNG VERSCHIEDENER CLU-ISOFORMEN 93
4.5.1.1 AUFREINIGUNG VON SCLU-V5 93
4.5.1.2 AUFREINIGUNG VON CLU21-449-V5 UND CLU34-449-V5 94
4.5.1.3 SEKUNDAERSTRUKTURANALYSEN VON
SCLU-V5 96
4.5.2 EFFEKT DISTINKTER CLU-ISOFORMEN AUF DIE AGGREGATION ENTFALTENDER
PROTEINE 96
4.5.3 EINFLUSS DISTINKTER CLU-ISOFORMEN AUF DIE APOPTOSE 98
4.5.4 EINFLUSS DISTINKTER CLU-ISOFORMEN AUF DEN NF-KB-VERMITTELTEN
SIGNALTRANSDUKTIONSWEG 100
5 DISKUSSION 102
5.1 ZELLSTRESS INDUZIERT DIE EXPRESSION VON CLUSTERIN 102
5.1.1 EXPRESSION VON SEZERNIERTEM CLUSTERIN IN GESTRESSTEN ZELLEN 102
5.1.2 EXPRESSION VON NICHT-SEZERNIERTEN CLUSTERIN-FORMEN IN GESTRESSTEN
ZELLEN 103
5.2 EXPRESSIONSANALYSEN DER EINZELNEN CLUSTERIN-MRNA-VARIANTEN IN
UNGESTRESSTEN UND GESTRESSTEN ZELLLINIEN
104
5.2.1 DIE TRANSKRIPTION VON CLUSTERIN-MRNA VARIANTE 1 STARTET 23NT
DOWNSTREAM DER TATA-BOX 104
5.2.2 VARIANTE 1 IST, GEGENUEBER VARIANTE 2, VARIANTE 3 UND VARIANTE 1
[AEX2], DIE DOMINANT EXPRIMIERTE
CLUSTERIN-MRNA 104
5.2.3 APPLIKATION VON MG-132 RESULTIERT IN EINER HITZESCHOCKANTWORT UND
DER INDUKTION VON CLUSTERIN-
MRNA-VARIANTEN 105
5.3 EKTOPISCHE EXPRESSION DISTINKTER CLUSTERIN-CDNAS UND PROTE
INEXPRESSIONSANALYSEN 107
V
5.3.1 DIE EXPRESSION ALLER EXON 2-ENTHALTENDEN CDNAS FUEHRT HAUPTSAECHLICH
ZUR SYNTHESE VON
SEZERNIERTEM CLUSTERIN 107
5.3.2 DIE PHYSIOLOGISCHE RELEVANZ DER CLUSTERIN-MRNA-VARIANTEN 2 UND 3
IST
FRAGLICH 108
5.3.3 BIOGENESE UND CHARAKTERISTIKEN NICHT-SEZEMIERTER
CLUSTERIN-ISOFORMEN 109
5.3.4 ZELLULAERE LOKALISATION NICHT-SEZEMIERTER CLUSTERIN-ISOFORMEN 111
5.3.5 REGULATION DER EXPRESSION NICHT-SEZERNIERTER CLUSTERIN-ISOFORMEN
113
5.4 FUNKTION NICHT-SEZERNIERTER CLU-ISOFORMEN 115
5.4.1 CHAPERONAKTIVITAET 115
5.4.2 EINFLUSS AUF DIE ZELLULAERE APOPTOSE 116
5.4.3 EINFLUSS AUF DEN NF-
K
B SIGNALTRANSDUKTIONSWEG 117
5.5 PHYSIOLOGISCHE ROLLE EINZELNER CLUSTERIN-ISOFORMEN 118
5.6 AUSBLICK 120
6 ZUSAMMENFASSUNG 122
7 LITERATUR 124
8 ANHANG I
8.1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS I
8.2 TABELLEN IV
8.3 SEQUENZEN DER KLONIERTEN CLU-CDNAS X
8.3.1 CLU-CDNA-VARIANTE 1 IN PCDNA6 X
8.3.2 WEITERE CLU-CDNA-VARIANTEN IN PCDNA6 X
8.3.2.1 VARIANTE 1 [AEX2] X
8.3.2.2 VARIANTE 1 (NM_001831.3) XI
8.3.2.3 VARIANTE 2 XI
8.3.2.4 VARIANTE 3 XI
8.3.3 CLU-CDNA-VARIANTEN IN PQE-30 XII
8.3.3.1 VARIANTE 1 MUT 5 IN
PQE-30 (CODIERT FUER
CLU21
-449) XII
8.3.3.2 VARIANTE 1 MUT
6
IN
PQE-30 (CODIERT FUER
CLU34449)
-XII
8.4 MIKROSKOPISCHE AUFNAHMEN XIII
VEROEFFENTLICHUNGEN XIV
CURRICULUM VITAE XV
VERSICHERUNG XVI
VI
|
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