Untersuchungen zur Immunpathogenese der intestinalen Graft-versus-Host Erkrankung (GVHD):
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Erlangen ; Nürnberg
Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg
2018
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| Beschreibung: | 100 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm |
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1
ZUSAMMENFASSUNG.........................................................................................1
2
ABSTRACT..............................................................................................................
2
3
EINLEITUNG..........................................................................................................3
3.1 HAEMATOPOETISCHE STAMMZELLTRANSPLANTATION
..............................................................................
3
3.1.1 PRINZIP UND ARTEN VON STAMMZELLTRANSPLANTATION
.....................................................................
3
3.1.2 INDIKATIONEN ZUR
STAMMZELLTRANSPLANTATION...............................................................................4
3.1.3 GEWINNUNG VON STAMMZELLEN UND
SPENDERAUSWAHL.................................................................
4
3.1.4 KONDITIONIERUNG UND
TRANSPLANTATIONSABLAUF............................................................................5
3.2 GRAFT-VERSUS-HOST
ERKRANKUNG......................................................................................................
6
3.2.1 PATHOPHYSIOLOGIE DER AKUTEN
GVHD........................................................................................
7
3.2.2 EINTEILUNG, KLINIK UND DIAGNOSTIK DER GVHD
.........................................................................
9
3.2.3 THERAPIE DER AKUTEN
GVHD....................................................................................................
12
3.3
ZIELSETZUNG......................................................................................................................................14
4 MATERIAL UND
METHODEN.........................................................................16
4.1
MATERIAL...........................................................................................................................................
16
4.1.1
VERSUCHSTIERE..........................................................................................................................
16
4.1.2 HUMANE
DARMBIOPSIEN.............................................................................................................17
4.1.3
ANTIKOERPER..............................................................................................................................
17
4.1.4
PCR-PRIMER............................................................................................................................
18
4.1.5 KOMMERZIELLE
KITS..................................................................................................................19
4.1.6 CHEMIKALIEN, MEDIEN,
REAGENZIEN.........................................................................................
20
4.1.7
VERBRAUCHSMATERIALIEN............................................................................................................
21
4.1.8
GERAETE.....................................................................................................................................
22
4.2 LOESUNGEN UND P
UFFER....................................................................................................................23
4.3 IN V/VO-M
ETHODEN..........................................................................................................................27
4.3.1 DEXTRAN-SODIUM-SULFAT (DSS INDUZIERTES MURINES KOLITISMODELL
.........................................
27
4.3.2 MAUS-G VHD-KOL ITISMODEL
1...................................................................................................28
4.3.3 IN
WW ENDOSKOPIE.................................................................................................................
30
4.3.4 IN
V/VTF-BIOLUMINESZENZ-IMAGING...........................................................................................
31
4.4 IN
W/RO-METHODEN..........................................................................................................................32
4.4.1 ORGANENTNAHME UND GEWEBEPRAEPARATION AUS
VERSUCHSTIEREN..................................................32
4.4.2 HAEMATOXY 1 I N-EOSI N-F
AERBUNG...................................................................................................33
4.4.3
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG......................................................................................................36
4.4.4 ZELLISOLATION AUS MURINEM
KOLON...........................................................................................
41
4.4.5 RNA-EXTRAKTION UND MESSUNG DER
RNA-KONZENTRATION........................................................44
4.4.6 UMSCHREIBUNG VON RNA IN
CDNA........................................................................................
46
4.4.7 SEMIQUANTITATIVE POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)................................................................ 47
4.4.8 QUANTITATIVE
REAL-TIME-PCR...................................................................................................49
4.4.9 PROTEINEXTRAKTION UND PROTEINKONZENTRATIONSMESSUNG
............................................................
51
4.4.10 WESTERN
BLOT-ANALYSE............................................................................................................
52
4.5 STATISTISCHE
METHODEN...........................................................................................................55
5
ERGEBNISSE........................................................................................................56
5.1 MAKROSKOPISCHE UND MIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG DER GVHD-KOLITIS
..........................
56
5.1.1 ANALYSE UNBEHANDELTER UND GESUNDER VERSUCHSTIERE SOWIE DER
DSS-INDUZIERTEN KOLITIS
.......
56
5.1.2 DIE GVHD-KOLITIS IM ZEITLICHEN VERLAUF........................ 59
5.2 ANALYSE DER INTESTINALEN IMMUNZELLINFILTRATION IN DER GVHD-KOLITIS
...............................
61
5.2.1 IN V/W BIOLUMINESZENZ-IMAGING VON
T-ZELLEN......................................................................
62
5.2.2 CD8+ UND CD4+
T-ZELLEN.......................................................................................................
63
5.2.3 CD45.1+ UND CD45.2+
IMMUNZELLEN......................................................................................
66
5.3 ANALYSE VON VERSCHIEDENEN ZYTOKINEN IM KOLONGEWEBE VON
GVHD-TIEREN....................69
5.3.1 SCREENING DER ZYTOKINEXPRESSION IN DER GVHD-KOLITIS MITTELS
SEMIQUANTITATIVER PCR
........
69
5.3.2 QUANTITATIVE EXPRESSIONSANALYSE VON IFN-Y, IE-17A UND IL-18 IN
MURINEM KOLONGEWEBE. 71
5.3.3 PROTEINANALYSEN VON IL-18 UND NF
K
B IN DER
GVHD-KOLITIS..................................................73
5.4 VERGLEICH DER IE-18- UND IE-18-REZEPTOR-EXPRESSION IN VERSCHIEDENEN
ORGANSYSTEMEN. 75
5.5 ANALYSE DER IL-18-EXPRESSION IN LAMINA PROPRIA-IMMUNZELLEN UND
INTESTINALEN
EPITHEL ZELLEN DER MURINEN
GVHD-KOLITIS......................................................................................
76
5.5.1 QUANTITATIVE EXPRESSIONSANALYSE VON IL-18 UND
IFN-Y...........................................................76
5.5.2 PROTEINANALYSE VON IL-18 UND NF
K
B IN INTESTINALEN EPITHELZELLEN
........................................
77
5.6 ANALYSE HUMANER
DARMBIOPSIEN...........................................................................................
78
6
DISKUSSION.........................................................................................................80
6.1 DIE ROLLE VON IE-18 IN DER INTESTINALEN
IMMUNHOMOEOSTASE...............................................81
6.2 DIE ROLLE VON IE-18 IN DER PATHOGENESE DER AKUTEN
GVHD...............................................85
7 LITERATURVERZEICHNIS
............................................................................
88
8
ABBILDUNGSVERZEICHNIS.........................................................................
94
9
TABELLENVERZEICHNIS...............................................................................95
10
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS........................................................................
96
11
DANKSAGUNG....................................................................................................
99
12 LEBENSLAUF
100
|
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