Der neuroprotektive und neuroregenerative Effekt von CRMP-5 im experimentellen Glaukom auf retinale Ganglienzellen in vitro:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Giessen
VVB Laufersweiler Verlag
2018
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| Ausgabe: | 1. Auflage |
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Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis V
Abkürzungsverzeichnis IX
Abbildungsverzeichnis X
T abellenverzeichnis XI
1 Einleitung 1
1 1 Aufbau der Retina l
1 2 Glaukom 3
121 Epidemiologie des Glaukoms 4
122 Pathogenese des Glaukoms 4
123 Risikofaktoren des Glaukoms 8
124 Therapie des Glaukoms 11
125 Der pathogenetische Effekt auf retinale Ganglienzellen 13
1 3 Tiermodelle 14
131 Quetschung des Sehnervs in Kombination mit einer Linsenverletzung in
der Ratte 15
132 Inkubation der Organkultur in einer Druckkammer 16
133 Episkleralvenenverödung in der Ratte 17
134 Verschluss des Kammerwinkels durch magnetische Mikrokügelchen 17
135 Limbuskompression durch eine vaskuläre Silikonschlinge 18
1 4 Das Problem der Regenerationsfähigkeit retinaler Ganglienzellen 19
1 5 Collapsin Response Mediator Protein-5: ein spezifisch verändertes Molekül
im experimentellen Glaukom 20
2 Zielsetzung 22
3 Material und Methoden 24
3 1 Verbrauchsmaterialien, Lösungen und Chemikalien 24
3 2 Arzneimittel und Injektionslösungen 27
3 3 Chirurgisches Besteck 28
3 4 Geräte und Software 29
3 5 In vivo 31
351 Versuchstiere 31
352 Eingriffe am Auge 31
v
Inhaltsverzeichnis
3521 Anästhesie 31
3522 Offene Quetschung des Sehnervs 32
3523 Linsenverletzung 33
353 Euthanasie 33
3 6 In vitro 34
361 Vorbereitung der Gewebekultur 34
3611 Neuroprotektion 34
3612 Neuroregeneration 34
362 Explantation der Retina 37
363 Kultivierung 39
3631 Neuroprotektion 39
3632 Neuroregeneration 39
3633 Kulturbedingungen 41
3 7 Ex vivo 41
371 BRN3A-Färbung 41
372 ß-lll-Tubulin-Färbung 42
373 Immunhistochemische Detektion von CRMP-5 und PKB 43
3731 Vorbereitung der retinalen Explantate 43
3732 AK-Inkubation der Proben 44
374 Proteinanalysen mittels Antikörper-Mikroarray 46
3741 Aufbereitung der Ratten Retinae mittels Zelllyse 46
3742 Proteinbestimmung mittels Bicinchoninsäure Assay und
Photometrie 47
3743 Proteinlabeling 47
3744 Herstellung des Antikörper-Mikroarrays 48
4 Ergebnisse 50
4 1 Proteomanalyse glaukomatöser Ratten Retinae 50
4 2 Untersuchung neuroprotektiver Effekte von CRMP-5 51
421 Etablierung einer retinalen Organkultur aus der adulten Sprague
Dawley Ratte 51
422 Immunhistochemische Färbung der retinalen Explantate gegen
Ganglienzell-spezifisches BRN3A 52
423 Neuroprotektive Effekte von CRMP-5 und dessen Interaktion mit PKB 53
VI
Inhaltsverzeichnis
424 Untersuchung der intrazellulären Aufnahme von CRMP-5 und der
Aktivierung von PKB 55
4 3 Untersuchung neuroregenerativer Effekte von CRMP-5 57
431 Etablierung einer neuroregenerationsfördernden retinalen Organkultur
aus der adulten Sprague Dawley Ratte 57
432 Immunhistochemische Färbung gegen Neuronen-spezifisches ß-lll-
Tubulin 58
433 Neuroregenerative Effekte von CRMP-5 60
4331 Entwicklung der Anzahl regenerierender Neunte 60
4332 Entwicklung des Längenwachstums regenerierender Neurite 61
4 4 Untersuchung der intrazellulären Aufnahme/Aktivierung von CRMP-5 bzw
PKB 64
441 Mikroarray-Analyse der Ratten Retinae 64
442 Immunhistochemische Detektion von CRMP-5 und PKB 65
5 Diskussion 67
5 1 Proteomveränderungen glaukomatöser Ratten Retinae 67
5 2 CRMP-5 fördert das Überleben von durch Glaukom-ähnlich geschädigten
RGZs 67
521 Konzentrationsfindung 67
522 Neuroprotektive Effekte von CRMP-5 68
523 Etablierung eines in vitro Glaukommodells aus der adulten Sprague
Dawley Ratte 69
5 3 CRMP-5 fördert den Neuritenauswuchs von im Glaukommodell
geschädigten RGZs 71
531 Neuroregenerative Effekte von CRMP-5 71
532 Etablierung einer neuroregenerationsfördernden retinalen Organkultur
aus der adulten Sprague Dawley Ratte 74
5321 Einfluss der Behandlung in vivo 75
5322 Einfluss der Behandlung in vitro 76
5 4 Die intrazelluläre Aufnahme von CRMP-5 in die RGZs erfolgt durch
Endozytose 77
5 5 CRMP-5 vermittelt neuroprotektive bzw neuroregenerative Effekte über
eine Interaktion mit Proteinkinase B 78
5 6 Schlussfolgerung 81
6 Zusammenfassung 83
VII
Inhaltsverzeichnis
7 Summary 85
8 Literaturverzeichnis X
9 Publikationen und Präsentationen XVII
9 1 Publikationen XVII
9 2 Posterpräsentation XVII
10 Danksagung xvill
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