Untersuchungen zur Regulation der TNF-α-Genexpression in vier humanen Tumorzelllinien:
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Bonn
2017
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.................................................................................................
8
2. EINLEITUNG
.........................................................................
13
2.1
TNF-A-FREISETZUNG......................................................................................................13
2.2 DIE BIOLOGISCHE FUNKTION VON TN
F-A.......................................................................15
2.3
TNF-A-REZEPTOREN......................................................................................................
15
2.4 PATHOPHYSIOLOGISCHE RELEVANZ VON TN
F-A............................................................17
2.4.1 ROLLE VON TNF-A IN DER
ZAHNHEILKUNDE...................................................................18
2.5
TNF-A-ANTAGONISTEN...................................................................................................
20
2.6
LNTERLEUKIN-1SS...............................................................................................................
21
2.7 MITOGEN-AKTIVIERTE PROTEINKINASEN
(MAPK)............................................................23
2.7.1 P44/42 MAPK
(ERK1/2).............................................................................................25
2.7.2 P38
MAPK.....................................................................................................................26
2.6 FRAGESTELLUNG DER
ARBEIT..............................................................................................27
3. MATERIAL UND
METHODEN..............................................................................................
28
3.1
ZELLKULTUREN...................................................................................................................23
3.1.1
HEPG2-ZELLEN...............................................................................................................28
3.1.2
A549-ZELLEN...........................................................................................
28
3.1.3
COLO-678-ZELLEN...........................................................................................................29
3.1.4
SKOV-8-ZELLEN.............................................................................................................29
3.1.5
L-M-ZELLEN.....................................................................................................................29
3.2 VITALITAETS- UND PROLIFERATIONSTEST FUER ZELLKULTUREN
(MTT-TEST)..............................30
3.3 BIOASSAY FUER TNF-A MIT
L-M-ZELLEN.........................................................................
30
3.4
RNA-ISOLATION...............................................................................................................30
3.5 BESTIMMUNG DER RNA-KONZENTRATION
.....................................................................
31
3.6 KONTROLLE DER
RNA-QUALITAET.......................................................................................
32
3.7 NACHWEIS SPEZIFISCHER BOTEN-RNAS
.......................................................................
32
3.7.1 REVERSE TRANSKRIPTION VON MRNA IN
CDNA........................................................... 33
3.7.2 ERFOLGSKONTROLLE DER REVERSEN
TRANSKRIPTION...........................................................33
3.7.3 POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)............................................................................34
3.7.4 QUANTIFIZIERUNG DER TNF-A-MRNA MIT HILFE DER KOMPETITIVEN
POLYMERASEKET
TENREAKTION....................................................................................................................35
3.6 HERSTELLUNG DES TNF-A-KOMPETITORS
........................................................................
36
3.9
3.10
3.10.1
3.10.2
3.11
4.
4.1
4.1.1
4.1.2
4.2
4.2.1
4.2.2
4.2.3
PROTEINBESTIMMUNG.....................................................................................................38
IMMUNOBLOT...................................................................................................................
38
IMMUNOBLOT ZUM NACHWEIS DER AKTIVIERUNG DER P44/42 MARK
........................
40
IMMUNOBLOT ZUM NACHWEIS DER AKTIVIERUNG DER P38 MARK
..............................
40
STATISTISCHE
AUSWERTUNG.............................................................................................41
ERGEBNISSE....................................................................................................................42
TNF-A-EXPRESSION IN
TUMORZELLEN...........................................................................42
TNF-A-EXPRESSION IN TUMORZELLEN NACH
STIMULATION...........................................42
ZEITVERLAUF DER DURCH IL-1SS-INDUZIERTEN EXPRESSION DES TNF-A-GENS UND
DER
TNF-A-SEKRETION VON
TUMORZELLEN..........................................................................
44
DIE INTRAZELLULAERE SIGNALTRANSDUKTION BEI DER EXPRESSION DES
TNF-A-GENS...47
EINSATZ VON KINASEBLOCKERN ZUR HEMMUNG REZEPTORASSOZIIERTER PROTEINKINA
SEN..................................................................................................................................47
BEDEUTUNG DES SECOND MESSENGERS CAMP FUER DIE TNF-A-GENEXPRESSION DER
TUMORZELLLINIEN HEPG2, A549 UND
SKOV-8...........................................................52
DIE BEDEUTUNG VON MAP-KINASEN FUER DIE INDUKTION DER EXPRESSION DES
TNF-A-GENS DURCH IL-1SS BEI DEN TUMORZELLLINIEN HEPG2, A549 UND SKOV-8
.........................................................................................................................................56
4.2.3.1 WIRKUNG EINER HEMMUNG DER MAP-KINASE-KINASE (MEK) DURCH PD
96059. 56
4.2.3.2 DER EINFLUSS VON SERUMFAKTOREN AUF DIE TNF-A-GENEXPRESSION DER
TUMORZELL
LINIEN HEPG2-, A549- UND SKOV-8
.........................................................................
59
4.2.3 3 NACHWEIS DER PHOSPHORYLIERTEN MAP-KINASEN P44 UND P42 (ERK1/2)
IN DEN
TUMORZELLLINIEN HEPG2-, A549- UND SKOV-8
.......................................................
62
4.2.3.4 NACHWEIS DER PHOSPHORYLIERTEN P38 MARK AN DEN TUMORZELLLINIEN
HEPG2-,
A549- UND SKOV-8 UND
SKOV-8.............................................................................
63
5.
DISKUSSION....................................................................................................................
65
6.
ZUSAMMENFASSUNG.....................................................................................................
75
7.
ANHANG..........................................................................................................................
77
7.1
ZELLLINIEN........................................................................................................................
77
7.2 MEDIUM FUER DIE
ZELLKULTUREN.......................................................................................77
7.3 LOESUNGEN FUER ZYTOTOXIZITAETSTEST
................................................................................
76
7.4 PUFFER UND LOESUNGEN ZUR
RNA-EXTRAKTION..............................................................76
7.5 DENATURIERENDE
RNA-GELELEKTROPHORESE...............................................................79
7.6 PUFFER FUER REVERSE TRANSKRIPTION UND
PCR...............................................................79
7.7
IMMUNOBLOT...................................................................................................................80
7.8 ALS TESTSUBSTANZEN VERWENDETE
STOFFE...................................................................
82
8.
LITERATURVERZEICHNIS....................................................................................................
83
9.
DANKSAGUNG.................................................................................................................
97
|
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