Das neuronale Differenzierungspotenzial von caninen mesenchymalen Stammzellen aus dem Fettgewebe:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen, Lahn
VVB Laufersweiler Verlag
2016
|
| Schriftenreihe: | Edition Scientifique
|
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | IV, 126 Seiten 21 cm x 14.6 cm, 154 g |
| ISBN: | 9783835965034 3835965034 |
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I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS...................................................................................................................II
T
ABELLENVERZEICHNIS......................................................................................................................III
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS................................................................................................................
IV
1.
EINLEITUNG................................................................................................................................1
2.
LITERATURUEBERSICHT....................................................................................................................3
2.1
STAMMZELLEN...................................................................................................................3
2.1.1 MESENCHYMALE STAMMZELLEN
.................................................................................
4
2.1.2 KRITERIEN FUER MSCS IN IN VITRO
STUDIEN......................................................................
5
2.1.3 DIFFERENZIERUNG VON STAMMZELLEN IN
VITRO..............................................................5
2.1.3.1 OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG VON
STAMMZELLEN.....................................................6
2.1.3.2 ADIPOGENE DIFFERENZIERUNG VON
STAMMZELLEN......................................................6
2.1.3.3 CHONDROGENE DIFFERENZIERUNG VON STAMMZELLEN
................................................
6
2.1.4 NEURALE
STAMMZELLEN.............................................................................................
7
2.1.5
NEUROGENESE..........................................................................................................
8
2.1.5.1 EMBRYONALE
NEUROGENESE...................................................................................8
2.1.5.2 POSTNATALE UND ADULTE
NEUROGENESE..................................................................9
2.1.6
NEUROTROPHINE.......................................................................................................11
2.1.6.1 NERVE GROWTH FACTOR
(NGF)................................................................................12
2.1.6.2 BRAIN-DERIVED NEUROTROPHIC FACTOR (BDNF)
.......................................................
13
2.1.6.3 GLIAL CELL-DERIVED NEUROTROPHIC FACTOR
(GDNF)..................................................14
2.1.7 NEURONALE UND GLIALE
MARKERGENE.......................................................................
14
2.1.7.1 GLIAL FIBRILLARY ACIDIC PROTEIN
(GFAP)..................................................................15
2.1.7.2 MICROTUBULE ASSOCIATED PROTEIN 2 (MAP2)
........................................................
15
2.1.7.3
NESTIN..................................................................................................................
16
2.1.7.4 NEURON-SPECIFIC DASS III BETA-TUBULIN (SS-LLL-TUBULIN)
.......................................
17
2.2 MESENCHYMALE STAMMZELLEN AUS DEM
FETTGEWEBE.................................................. 18
2.2.1 CANINE MESENCHYMALE STAMMZELLEN AUS DEM FETTGEWEBE
..............................
19
2.3 THERAPEUTISCHE ANWENDUNGSMOEGLICHKEITEN VON STAMMZELLEN IN DER
MEDIZIN
.......
20
2.3.1 THERAPEUTISCHE ANWENDUNG VON CANINEN MSCS IN DER MEDIZIN
.......
...............
21
2.3.2 EINSATZ VON STAMMZELLEN BEI NEUROLOGISCHEN ERKRANKUNGEN
............................
22
2.3.3 EINSATZ VON NEURALEN STAMMZELLEN
....................................................................
23
2.3.4 EINSATZ VON MESENCHYMALEN STAMMZELLEN AUS DEM KNOCHENMARK UND
FETTGEWEBE ZUR NEURONALEN
DIFFERENZIERUNG.....................................................................23
2.4 NEURONALE DIFFERENZIERUNG MESENCHYMALER
STAMMZELLEN...........................................24
2.4.1 NEURONALE DIFFERENZIERUNG CANINER MESENCHYMALER STAMMZELLEN
...................
25
3. MATERIAL UND
METHODEN.......................................................................................................
26
3.1
MATERIAL........................................................................................................................
26
3.1.1 VERWENDETE CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN FUER DIE ZELLKULTUR
.............................
26
3.1.2 VERWENDETE CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN FUER HISTOLOGISCHE FAERBUNGEN
........
27
3.1.3 VERWENDETE REAGENZIEN FUER MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN
...............
28
3.1.4 VERBAUCHSTMATERIALIEN UND GERAETE
.....................................................................
30
3.1.5
SOFTWARE................................................................................................................32
3.1.6
PROBENMATERIAL.....................................................................................................
33
3.2
METHODEN.....................................................................................................................
33
3.2.1
ZELLKULTUR...............................................................................................................34
3.2.1.1 ISOLIERUNG VON MESENCHYMALEN STAMMZELLEN AUS FETTGEWEBE
.....................
34
3.2.1.2 KULTIVIERUNG UND SUBKULTIVIERUNG VON MESENCHYMALEN STAMMZELLEN
...........
34
3.2.1.3 KRYOKONSERVIERUNG VON
MSCS.........................................................................
36
3.2.1.4 AUFTAUEN VON
MSCS.........................................................................................36
3.2.1.5 UNTERSUCHUNG DER MULTIPOTENZ DER CANINEN FETTGEWEBSSTAMMZELLEN
...........
36
3.2.1.5.1 OSTEOGENE
DIFFERENZIERUNG..........................................................................37
3.2.1.5.2 ADIPOGENE
DIFFERENZIERUNG...........................................................................37
3.2.1.5.3 CHONDROGENE DIFFERENZIERUNG
.....................................................................
38
3.2.1.5.3.1 ANLEGEN VON
PELLETKULTUREN..................................................................
38
3.2.1.5.3.2 FIXATION UND VORBEREITUNG DER PELLETS
.................................................
39
3.2.1.6 NEURONALE DIFFERENZIERUNG
..............................................................................
40
3.2.2 IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG FUER
ZELLEN..................................................................41
3.2.3 IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG FUER PARAFFINSCHNITTE
..................................................
42
3.2.4 HISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN.....................................................................................
43
3.2.4.1 ALIZARINROT
S-FAERBUNG.......................................................................................43
3.2.4 2 OIL RED
O-FAERBUNG.................................................................................
44
3.2.4.3
ALCIANBLAU-FAERBUNG..........................................................................................45
3.2.5 MOLEKULARBIOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN...............................................................46
3.2.5.1
RNA-EXTRAKTION................................................................................................
46
3.2.5.2 CDNA-SYNTHESE UND REVERSE
TRANSKRIPTASE...................................................46
3.2.5.3 QUALITATIVE
POLYMERASE-KETTENREAKTION...........................................................
47
3.2.5.4
GELELEKTROPHORESE.............................................................................................
49
3.2.5.5 QUANTITATIVE REALTIME PCR (QRT-PCR)
............................................................
50
3.2.5.5.1 STATISTISCHE AUSWERTUNG
...............................................................................
51
3.3.5 6 WESTERN
BLOT......................................................................................................53
3.3.5.6.1 GIESSEN DER G
ELE...........................................................................................
53
3.3.5.6.2
PROBENVORBEREITUNG......................................................................................54
3.3.5.6.3 AUFTRAEGEN DER
PROBEN............................................................................
54
3.3.5.6.4 SDS-GELELEKTROPHORESE
...............................................................................
55
3.3.5.6.5
BLOTTING...........................................................................................................
55
3.3.5.6.6
ANTIKOERPERINKUBATION.....................................................................................56
3.3.5.6.7 ENTWICKELN DES
BLOTS.....................................................................................58
4.
ERGEBNISSE...........................................................................................................................59
4.1 CHARAKTERISIERUNG DER
CASCS......................................................................................59
4.1.1 KULTIVIERUNG UND MORPHOLOGIE VON UNDIFFERENZIERTEN CASCS
.............................
59
4.1.2 EXPRESSION STAMMZELLSPEZIFISCHER
MARKER..........................................................59
4.1.3 PLURIPOTENZ DER STAMMZELLEN
...............................................................................
61
4.1.3.1 OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG
..............................................................................
61
4.1.3.2 ADIPOGENE
DIFFERENZIERUNG...............................................................................
62
4.1.3.3 CHONDROGENE
DIFFERENZIERUNG..........................................................................63
4.2 NEURONALE DIFFERENZIERUNG DER CASCS
......................................
65
4.2.1 MORPHOLOGIE VON NEURONAL DIFFERENZIERTEN CASCS
..............................................
65
4.2.1.1 MORPHOLOGIE DER CASCS NACH 3 STUNDEN NEURONALER DIFFERENZIERUNG
...........
66
4.2.1.2 MORPHOLOGIE DER CASCS NACH 24 STUNDEN NEURONALER DIFFERENZIERUNG
.........
67
4.2.1.3 MORPHOLOGIE DER CASCS NACH 72 STUNDEN NEURONALER DIFFERENZIERUNG
.........
68
4.2.1.4 MORPHOLOGIE DER CASCS NACH 7 TAGEN NEURONALER DIFFERENZIERUNG
..............
68
4.2.2
IMMUNHISTOCHEMIE...............................................................................................
69
4.2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE
ERGEBNISSE........................................................................72
4.2.3.1 UEBERPRUEFUNG DER PCR-PRODUKTE IN DER GELELEKTROPHORESE
.............................
72
4.2.3.2 EXPRESSION NEURONALER UND GLIALER
MARKER......................................................73
4.2.3.3 EXPRESSION DER
NEUROTROPHINE..........................................................................
75
4.2.3.4 EXPRESSION DER MARKER IM CANINEN
HIRNGEWEBE...............................................77
4.2.3.5 EXPRESSIONSUNTERSCHIEDE ZWISCHEN
SPENDERINDIVIDUEN.................................77
4.2.3.6 ERGEBNISSE DES WESTERN
BLOTS.........................................................................
78
4.3 STATISTISCHE
ERGEBNISSE...............................................................................................
79
4.3.1 EXPRESSIONSMUSTER IM DIFFERENZIERUNGSVERLAUF
..................................................
79
4.3.2 EXPRESSION NEURONALER MARKER IN DIFFERENZIERTEN UND
UNDIFFERENZIERTEN
CASCS...................................................................................................................
81
5.
DISKUSSION...........................................................................................................................
83
5.1 DISKUSSION DER
METHODE..............................................................................................83
5.1.1 ZUSAETZE DES NEURONALEN MEDIUMS
.....................................................................
84
5.1.2 DER HUND ALS
STAMMZELLSPENDER.........................................................................86
5.1.3 EINFLUSS DER SPENDER AUF DAS DIFFERENZIERUNGSPOTENZIAL VON CASCS
...............
87
5.1.4 EINFLUSS DES KULTIVIERUNGSMEDIUMS AUF CASCS
..................................................
87
5.1.5 EINFLUSS DER ZELLPASSAGE AUF CASCS
...................................................................
88
5.2 DISKUSSION DER ERGEBNISSE
.........................................................................................
89
5.2.1 ISOLIERUNG, KULTIVIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER CASCS
...............................
89
5.2.1.1 DIE OSTEOGENE
DIFFERENZIERUNG....................................................................90
5.2.1.2 DIE ADIPOGENE
DIFFERENZIERUNG....................................................................91
5.2.1.3 DIE CHONDROGENE
DIFFERENZIERUNG................................................................92
5.2.2 DIE MORPHOLOGIE NEURONAL DIFFERENZIERTER CASCS
...............................................
92
5.2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE ERGEBNISSE
.......................................................................
93
5.2.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNG.................................................................
97
5.2.5 NEURONALE MARKER IN UNDIFFERENZIERTEN ZELLEN
....................................................
98
5.2.6 EXPRESSION NEURALER MARKER IM HUNDEGEHIRN
....................................................
99
5.3 NEURONALE DIFFERENZIERUNG ODER ARTEFAKT?
...............................................................
100
5.4
AUSBLICK......................................................................................................................
104
6.
ZUSAMMENFASSUNG...............................................................................................................
105
7.
SUMMARY...............................................................................................................................107
8.
ERKLAERUNG...............................................................................................................................106
9.
DANKSAGUNG..........................................................................................................................109
10. LITERATURVERZEICHNIS 110
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| spelling | Blecker, Daniela Verfasser (DE-588)1121513956 aut Das neuronale Differenzierungspotenzial von caninen mesenchymalen Stammzellen aus dem Fettgewebe eingereicht von Daniela Blecker, Offenbach Gießen, Lahn VVB Laufersweiler Verlag 2016 IV, 126 Seiten 21 cm x 14.6 cm, 154 g txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Edition Scientifique Dissertation Justus-Liebig-Universität 2016 differentiation cabt stem cells cabt dogs cabt fat cabt Doktorarbeit Uni Wissenschaft (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content VVB LAUFERSWEILER Verlag (DE-588)1065553803 pbl DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=030305899&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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