Die Rolle der Leukozyteninfiltration im Gehirn für die Entstehung von Anfällen im Theiler Virus-Modell der Temporallappenepilepsie:
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| Language: | German |
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Gießen
DVG Service GmbH
2017
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| Edition: | 1. Auflage |
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1
EINLEITUNG.....................................................................................................................
1
2 STAND DER
FORSCHUNG.................................................................................................3
2.1 DEFINITION EPILEPSIE
...................................
.
..............................................................
3
2.2
AETIOLOGIE.......................................................................................................................4
2.2.1 VIRUS-BEDINGTE EPILEPSIEN
..............................
.........................................................5
2.3
EPILEPTOGENESE...........................................................................................................9
2.4 BEHANDLUNG, PHARMAKORESISTENZ UND PRAEVENTION VON EPILEPSIE
..........
..........
.
9
2.5 ENTZUENDUNG UND
EPILEPSIEN......................................................................................11
2.5.1 MIKROGLIA UND
MONOZYTEN/MAKROPHAGEN...............................................................
16
2.5.2 DIFFERENZIERUNG ZWISCHEN MIKROGLIA UND MAKROPHAGEN SOWIE DEREN
CHARAKTERISIERUNG MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE...................................................18
2.5.3
CX3CR1-REPORTER-MAEUSE...........................................................................................21
2.5.4 BEEINFLUSSUNG VON MIKROGLIA/MAKROPHAGEN
..........................................................
23
2.6 TIERMODELLE IN DER EPILEPSIEFORSCHUNG
..................................................................
24
2.6.1 DAS TMEV-INDUZIERTE
EPILEPSIE-MODELL.................................................................
26
2.6.2 THEILERS MURINES ENZEPHALOMYELITIS
VIRUS.............................................................29
3 ZIELE UND
ARBEITSHYPOTHESEN...................................................................................
31
3.1 STUDIE 1: ETABLIERUNG DES
TMEV-MODELLS..............................................................31
3.2 STUDIE 2: CHARAKTERISIERUNG DER ENTZUENDUNGSANTWORT,
NEURODEGENERATION UND KORRELATION MIT ANFAELLEN
................................................
32
3.3 STUDIE 3: TRANSGENE VERAENDERUNG DER
ENTZUENDUNGSZELLEN.................................33
3.4 STUDIE 4: VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNGEN ZWISCHEN BEAN-1 UND BEAN-2
.....
34
4 MATERIAL UND
METHODEN.............................................................................................
35
4.1
TIERE............................................................................................................
35
4.1.1 TRANSGENE
TIERE........................................................................................................
36
4.2
VIREN............................................................................................................................
37
4.3
INFEKTION.......................................................................................................................39
4.3.1 STEREOTAKTISCHE
INFEKTION..........................................................................................39
4.3.2 FREI-HAND-INFEKTION
........................
42
4.4 KLINISCHE
UNTERSUCHUNG............................................................................................44
4.5 ANFALLSUEBERWACHUNG............................. 45
4.6
EEG-A/IDEO-UEBERWACHUNG............................................................
46
4.6.1 IMPLANTATION DER
EEG-ELEKTRODEN...........................................................................
46
4.6.2
EEG-UEBERWACHUNG...................................................................................................49
4.6.3
EEG-AZIDEOAUSWERTUNG............................................................................................
51
4.7
HISTOLOGIE.....................................................................................................................
53
4.7.1 PERFUSION UND HISTOLOGISCHE
BEARBEITUNG..............................................................53
4.7.2
FAERBUNGEN...................................................................................................................55
4.7.3
IMMUNHISTOCHEMIE....................................................................................................
56
4.7.4
AUSWERTUNG................................................................................................................
57
4.7.4.1
NEURODEGENERATION.....................................................................................................
57
4 7.4.2 CD3 UND C D 45R
........................................................................................................
59
4.7.4.3
MAC3..............................................................................................................................59
47 .4.4
RUECKENMARKSVERAENDERUNGEN..................................................................................
60
4.8
VIRUS-SEQUENZIERUNG.................................................................................................61
4.9 DETEKTION UND QUANTIFIZIERUNG VON
VIRUS-RNA.....................................................61
4.10 DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS)..................................................................................
63
4.10.1 ISOLIERUNG DER
ZELLEN..................................................................................................64
4.10.2
ZELLMESSUNG...............................................................................................................
66
4.10.3 NORMIERUNG UND DARSTELLUNG DER DATEN
.................................................................
68
4.11 STATISTISCHE
AUSWERTUNG...........................................................................................
69
5
ERGEBNISSE..................................................................................................................71
5.1 STUDIE 1: ETABLIERUNG DES
TMEV-MODELLS..............................................................
71
5.1.1
ANFAELLE.........................................................................................................................
71
5.1.1.1
BEAN-1.........................................................................................................................
71
5.1.1.2
BEAN-2.........................................................................................................................
74
5.1.1.3 D A
.................................................................................................................................75
5.1.2 KLINISCHES
BILD............................................................................................................79
5.2 STUDIE 2: CHARAKTERISIERUNG DER ENTZUENDUNGSANTWORT,
NEURODEGENERATION UND KORRELATION MIT ANFAELLEN
................................................
83
5.2.1 HIPPOCAMPALE
NEURODEGENERATION.........................................................................
83
5.2.2
ENTZUENDUNG................................................................................................................
88
5.2.2.1
T-LYMPHOZYTEN............................................................................................................88
5.2.22 B-LYMPHOZYTEN
.................................................
........................................................94
5 2.2.3 AKTIVIERTE MIKROGLIA /
MAKROPHAGEN.........................................................................98
5.2.3 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
UNTERSUCHUNGEN............................................................103
5.2.3.1
B6-WILDTYP-MAEUSE......................................................................................................
103
5.2.3.1.1 CHARAKTERISIERUNG DER CX3CR1
-/LY6C-EXPRESSION...............................................106
5.2.3.1.2 CHARAKTERISIERUNG DER
CD86-/CD206-EXPRESSION.................................................112
5.2.32
CX3CR1-REPORTER-MAEUSE.............................................................................................117
5.2.3.2.1 CHARAKTERISIERUNG DER CX3CR1 -/LY6C-EXPRESSION
.............................................
123
5.2.3.2 2 CHARAKTERISIERUNG DER
CD86-/CD206-EXPRESSION.................................................127
5.2.4 ROC-ANALYSEN: TEST AUF
PRAEDIKTIVITAET......................................................................
131
5.3 STUDIE 3: TRANSGENE VERAENDERUNG DER ENTZUENDUNGSZELLEN
.................................
134
5.3.1
CCR2-KO-MAEUSE.........................................................................................................134
5.3.1.1
ANFAELLE...................................................................................................................
134
5.3.1.2
NEURODEGENERATION......................................................................................................137
5.3.1.3 AKTIVIERTE MAKROPHAGEN/MIKROGLIA
......................
.138
5.3.2
CX3CR/-KO-MAEUSE.......................................................................................................140
5.3.2.1
ANFAELLE...........................................................................................................................140
5.3.2.2
NEURODEGENERATION..................................................................
143
5.3.2.3 AKTIVIERTE MAKROPHAGEN /
MIKROGLIA........................................................................144
5.4 STUDIE 4: VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNGEN ZWISCHEN BEAN-1 UND BEAN-2
......
146
5.4.1
VIRUS-SEQUENZIERUNG.................................................................................................146
5.4.2 DETEKTIERUNG UND QUANTIFIZIERUNG VON VIRUS-RNA
...............................................
148
5.4.3
RUECKENMARKSVERAENDERUNGEN..................................................................................149
6
DISKUSSION....................................................................................................................
153
6.1 STUDIE 1: ETABLIERUNG DES
TMEV-MODELLS..............................................................153
6.1.1 AUSBLEIBENDE ANFAELLE NACH BEAN-1-INFEKTION
.......................................................
153
6.1.2 EINFLUSS VON B6-MAUS-UNTERSTAEMMEN BEI BEAN-1-INFEKTION
.............................
154
6.1.3 UNTERSUCHUNG WEITERER TMEV-(UNTER)STAEMME AUF ANFALLSENTWICKLUNG
.............
156
6.1.4 EINFLUSS VON MAUSUNTERSCHIEDEN BEI BEAN-2- UND
DA-INFEKTION.......................159
6.1.5 EINFLUSS DES
APPLIKATIONSORTES.................................................................................160
6.1.6 KLINISCHE UNTERSCHIEDE ZWISCHEN VIRUSSTAEMMEN
................................
161
6.2 STUDIE 2: CHARAKTERISIERUNG DER ENTZUENDUNGSANTWORT,
NEURODEGENERATION UND KORRELATION MIT ANFAELLEN
................................................
162
6.2.1 UNTERSCHIEDE HIPPOCAMPALER NEURODEGENERATION POST INFECTIONEM
...................
162
6.2.2 VERHALTEN VON ZELLEN DES ERWORBENEN IMMUNSYSTEMS
......................................
165
6.2.3 VERHALTEN VON ZELLEN DES ANGEBORENEN IMMUNSYSTEM
......................................
167
6.2.3.1 DIE ROLLE DES ANGEBORENEN IMMUNSYSTEMS IM TMEV-MODELL
............................
167
6 2.3.2 MIKROGLIA UND MAKROPHAGEN IM TMEV-MODELL
...................
168
6.2.3.2.1 HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN VON MIKROGLIA UND MAKROPHAGEN
NACH
TMEV-INFEKTION.................................................................................................
168
6.2.3.3 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE UNTERSUCHUNGEN UND CHARAKTERISIERUNG VON
MIKROGLIA UND MAKROPHAGEN NACH TMEV-INFEKTION IN B6-WILDTYP-MAEUSEN....
170
6.2.3.3.1 CHARAKTERISIERUNG UEBER CX3CR1 -/LY6C-EXPRESSION
............................................
171
6.2.3.3 2 CHARAKTERISIERUNG UEBER CD86/CD206 (M1/M 2)
.....................................................
171
6.2.3 4 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE UNTERSUCHUNGEN VON MIKROGLIA UND
MAKROPHAGEN
NACH TMEV-INFEKTION IN CX3CR1 -REPORTER-MAEUSEN
.............................................
173
6.2.3.4.1 CHARAKTERISIERUNG UEBER CX3CR1 -/LY6C-EXPRESSION
............................................
174
6.2.3.4.2 CHARAKTERISIERUNG UEBER CD86/CD206 (M 1/M 2)
.....................................................
174
6.2.3.5 DIE ROLLE VON MIKROGLIA UND MAKROPHAGEN IN ANDEREN MODELLEN
.......................
174
6.3 STUDIE 3: TRANSGENE VERAENDERUNG DER ENTZUENDUNGSZELLEN
.................................
177
6.3.1
CCR2-KO-MAEUSE.........................................................................................................177
6.3.2
CX3CR7-KO-MAEUSE.....................................................................................................
181
6.4 STUDIE 4: VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNGEN ZWISCHEN BEAN-1 UND
BEAN-2.......184
7
ZUSAMMENFASSUNG....................................................................................................
189
8
SUMMARY.....................................................................................................................
190
9
LITERATURVERZEICHNIS...................................................................................................
191
10
TABELLENVERZEICHNIS...................................................................................................209
11
ABBILDUNGSVERZEICHNIS..............................................................................................
210
12
ANHANG........................................................................................................................
212
13 DANKSAGUNGEN
.................................................
221
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