Holdings: Untersuchung der Rolle von IgE und Identifikation von Einflussfaktoren in der Pathogenese des Systemischen Lupus Erythematodes (SLE) anhand des Plcγ2Ali5-Mausmodells

Untersuchung der Rolle von IgE und Identifikation von Einflussfaktoren in der Pathogenese des Systemischen Lupus Erythematodes (SLE) anhand des Plcγ2Ali5-Mausmodells:

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Bibliographic Details
Main Author:	Wolf, Carolin (Author)
Format:	Thesis Book
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Published:	Marburg 2017
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS ABKUERZUNGSVERZEICHNIS ...................................................................... . ...................... IV 1. EINLEITUNG.................................................................................................................... 1 1.1 DAS IMMUNSYSTEM..................................................................................................1 1.1.1 DAS ANGEBORENE IMMUNSYSTEM...................................................................... 1 1.1.1.1 T OLL-LIKE-REZEPTOREN ...................................................... 2 1.1.2 DAS ERWORBENE IMMUNSYSTEM........................................................................3 1.1.2.1 B-ZELLEN.................................................................................................... 4 1.1.2.2 IMMUNGLOBULIN E ...................................................................................... 5 1.1.3 AUTOIMMUNITAET................................................................................................. 6 1.2 DER SYSTEMISCHE LUPUS ERYTHEMATODES .............................................................. 6 1.2.1 DAS PLCY2ALI5 - MAUSMODELL.............................................................................7 1.2.2 ZUSAMMENHANG ZWISCHEN SLE UND IGE ....................................................... 8 1.2.3 DAS PLCY2A 5 LGEKI-MAUSMODELL......................................................................9 1.3 FRAGESTELLUNG........................................................................................................11 2. MATERIAL..................................................................................................................... 12 2.1 GERAETE UND WERKZEUG..........................................................................................12 2.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN........................................................................................ 12 2.3 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN............................................................................. 13 2.4 PUFFER UND LOESUNGEN ........................................................................................... 14 2.5 ZELLKULTUR: MEDIEN UND ZUSAETZE........................................................................... 15 2.6 ZELLLINIEN............................................................................................................... 15 2.7 ANTIKOERPER UND PROTEINE....................................................................................... 16 2.8 NUKLEOTIDE............................................................................................................ 17 2.9 K ITS....................................................................................................................... 17 2.10 MAUSSTAEMME......................................................................................................17 3. METHODEN ................. 18 3.1 GENETISCHE TYPISIERUNG DER PLCY2AH5 - MAEUSE DURCH PCR .................................. 18 3.1.1. DNA-AUFBEREITUNG FUER TYPISIERUNGS-PCR ................................................... 18 3.1.2 TYPISIERUNGS-PCR......................................................................................18 3.2 AUFBEREITUNG VON MURINEN ORGANEN, SERUM UND URIN........................................19 3.2.1 SERUMGEWINNUNG .......................................................................................... 19 3.2.2 URINGEWINNUNG UND TESTUNG MITTELS URISTIX TESTSTREIFEN .......................... 19 3.2.3 ORGANAUFBEREITUNG FUER FACS ODER STIMULATIONSEXPERIMENT ....................... 19 3.2.4. ORGANAUFBEREITUNG ZUR ANFERTIGUNG VON NIEREN-GEFRIERSCHNITTEN .............. 20 3.2.5 ORGANAUFBEREITUNG ZUR ANFERTIGUNG VON NIEREN-PARAFFINSCHNITTEN .............. 20 3.2.6 HERSTELLUNG UND IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG VON NIERENGEFRIERSCHNITTEN ....20 3.3 KULTIVIERUNG VON HEP2-ZELLEN.............................................................................21 3.4 EXTRAKTION NUKLEAERER PROTEINE UND KONZENTRATIONSBESTIMMUNG........................21 3.4.1 EXTRAKTION NUKLEAERER PROTEINE......................................................................21 3.4.2 MESSUNG DER PROTEINKONZENTRATION MIT PIERCE* BCA PROTEIN ASSAY KIT....22 3.5 IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG VON HEP2-ZELLEN IM KAMMEROBJEKTTRAEGER ............... 23 3.6 SPEZIFIZIERUNG NUKLEAERER ANTIGENE DURCH DAS CYTOBEADANA-KIT .................... 24 3.7 QUANTITATIVE ANALYSE VON SERUM-AUTOANTIKOERPERN DURCH ELISA ....................... 24 3.7.1 ELISA-ENTWICKLUNG FUER HRP- BZW. POX-MARKIERTE DETEKTIONSANTIKOERPER...25 3.7.2 ELISA-ENTIWCKLUNG FUER AP-GEKOPPELTE DETEKTIONSANTIKOERPER ..................... 25 3.8 FACS-ANALYSE VON ORGANZELLEN ......................................................................... 26 3.9 FACS-ANALYSE ZUM NACHWEIS ENDOGENER RETROVIREN IN BLUTZELLEN .................. 26 3.10 IN-VITRO-STIMULATION VON MILZZELLEN .................................................................... 27 3.11 ZYTOKIN-ELISAS VON STIMULATIONSUEBERSTAENDEN.................................................29 3.11.1 MLL-6-ELISA............................................................................................... 29 3.11.2 MLL-10-ELISA............................................................................................. 29 3.12 SOFTWARE, STATISTIK UND TIERVERSUCHSGENEHMIGUNG..........................................30 4. ERGEBNISSE.................................................................................................... 31 4.1 IMMUNSEROLOGIE................................................................................................... 31 4.1.1 DER HETEROZYGOTE IGE KNOCK-IN (LGEK,/+) ERHOEHT SERUM-ANA IN PI CY 2AI,5/+- MAEUSEN......................................................................................................... 31 4.1.2 DER HOMOZYGOTE IGE-KNOCK-IN ERWEITERT DAS SPEKTRUM DER ANA-SPEZI- FITAET IN PI CY 2AII5/+- MAEUSEN..............................................................................34 4.1.3 DER HOMO- BZW. HETEROZYGOTE IGE-KNOCK-IN INDUZIERT BEI PI CY 2AI,5/+ - MAEUSEN DIE BILDUNG VON ANA VOM LGG3-TYP..............................................38 4.2 PATHOLOGISCHE VERAENDERUNGEN AUF ORGAN- UND ZELLEBENE ................................ 39 4.2.1 HETERO- UND HOMOZYGOTE PLCY2ALI5/+LGEKI/+ - UND PLCV2A,I5/+LGEKI/KI - MAEUSE ZEIGEN KEINE NIERENPATHOLOGIE .................................................................... 39 4.2.2 HETEROZYGOTE PLCV2AI,5/+LGEKL/+ - MAEUSE SIND IN BEZUG AUF B-ZELL-ENTWICK- LUNG UND -DIFFERENZIERUNG PLCY2ALL5/+- MAEUSEN AEHNLICH ................................. 40 4.2.3 UNTERSUCHUNG DER B-ZELL-FUNKTION UND DER INTERLEUKIN-AUSSCHUETTUNG DURCH STIMULATIONSEXPERIMENTE ................................................................... 44 4.2.3.1 PLCV2A,L5/+ - MUTATION WIRKT SICH NICHT AUF DEN B-ZELL-AKTIVIERUNGS- ZUSTAND NACH TLR-STIMULATION AUS.......................................................44 4.2.3.2 DNA IST KEIN STIMULUS FUER DIE B-ZELL-AKTIVIERUNG VON PLCY2ALL5/+ - UND PLCV2AI,5/+LGEKL/+ - MAEUSEN IN DER MILZ....................................................45 4.2.3.3 PI CY 2AII5/+ - UND HETEROZYGOTE PLCV2ALL5/+LGEK,/+ - MAEUSE REAGIEREN AUF TLR9-STIMULATION MIT ABGESCHWAECHTER IL-6-AUSSCHUETTUNG ................. 46 4.2.34 PI CY 2AH5/+- UND PLCY2ALI5/+LGEKI/+- MAEUSE REAGIEREN AUF TLR- STIMULATION MIT ERHOEHTER IL-10-AUSSCHUETTUNG.......................................47 4.2.3.5 DNA ALLEIN STIMULIERT WEDER IL-6- NOCH IL-10-AUSSCHUETTUNG IN PLCY2ALI5/+ - BZW. PLCV2A,I5/+LGEKI/+ - MAEUSEN ............................................ 48 4.2.4 DER HETEROZYGOTE IGE-KNOCK-IN IN PLCV2ALL5/+LGEKI/+ BEEINFLUSST DIE AKTIVIERUNG VON MAKROPHAGEN UND GRANULOZYTEN NICHT .............................. 49 4.3 EINFLUSSFAKTOREN DER AUTOIMMUNPATHOGENESE IM PI CY 2AII5/+ - MODELL ................. 52 4.3.1 ENDOGENE RETROVIREN SPIELEN FUER DAS PLCY2ALL5/+ - MODELL KEINE ROLLE ........ 52 4.3.2 DAS MIKROBIOM ALS TRIGGER VON AUTOIMMUNITAET IM PI CY 2AII5/+ - MODELL ......... 53 4.3.2.1 MUENCHENER FUTTER UND MIKROBIOM BEEINFLUSSEN DIE B-ZELL- POPULATIONEN DER MILZ IN MARBURGER PLCY2ALL5/+ - MAEUSEN NICHT ............. 53 4.3.2.2 ERHOEHUNG VON ENTZUENDUNGSZELLEN IN MILZ UND KNOCHENMARK NACH KONTAKT MIT MUENCHENER MIKROBIOM BZW. FUTTER....................................55 5. DISKUSSION................................................................................................................59 6. AUSBLICK....................................................................................................................70 7. ZUSAMMENFASSUNG ................................. 71 8. SUMMARY...................................................................................................................72 LITERATURVERZEICHNIS......................................................................................................V ABBILDUNGSVERZEICHNIS................................................................................................XI VERZEICHNIS DER AKADEMISCHEN LEHRER................................................................... XIII DANKSAGUNG...............................................................................................................XIV
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