Untersuchung der Biosynthese von aromatischen Monoterpenen in Thymus vulgaris L. und molekulare sowie chemische Charakterisierung verschiedener Thymian-Herkünfte:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Erlangen ; Nürnberg
[2017]
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | VII, 246 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
DANKSAGUNG
1.
EINLEITUNG.....................................................................................................................
1
1.1 DIE GATTUNG THYMUS
L...................................................................................................1
1.1.1
ARTEN...................................................................................................................
1
1.1.2
BOTANIK...............................................................................................................
3
1.1.3 POLYMORPHIE UND
VERERBUNG.............................................................................3
1.1.4 INHALTSSTOFFE UND
CHEMOTYPEN...........................................................................4
1.1.5 MEDIZINISCHE UND BIOLOGISCHE BEDEUTUNG DES THYMIANS UND DESSEN
INHALTSSTOFFE........................................................................................................6
1.2 TERPENBIOSYNTHESE IN THYMUS VULGARIS
L.....................................................................7
1.2.1 GRUNDBAUSTEINE DER BIOSYNTHESE
.......................................................................
7
1.2.2 KOMPARTIMENTIERUNG UND
VORSTUFENBILDUNG.....................................................9
1.2.3
TERPENSYNTHASEN..................................................................................................10
1.2.4
MONOTERPEN-BIOSYNTHESE....................................................................................
11
1.2.4.1 ZYKLISCHE
MONOTERPENE...........................................................................12
1.2.4.2 AZYKLISCHE
MONOTERPENE.........................................................................13
1.2.4.3
THYMOL-BIOSYNTHESE...............................................................................
14
1.2.4.4 ENZYME DER THYMOL-BIOSYNTHESE
..........................................................
16
1.2.4.4.1 MONOTERPENSYNTHASE: Y-TERPINEN SYNTHASE/CYCLASE (GTS)
......
16
1.2.4.4.2 CYTOCHROM P4
5
O-ABHAENGIGE MONOOXYGENASEN/HYDROXYLASEN.... 17
1.3 ZIELSETZUNG DER
ARBEIT..................................................................................................
20
2. MATERIALIEN UND
METHODEN..............................................................................21
2.1
MATERIALIEN...................................................................................................................
21
2.1.1
PFLANZENMATERIAL................................................................................................
21
2.1.2 DEIONISIERTES W
ASSER..........................................................................................
22
2.1.3
CHEMIKALIEN........................................................................................................22
2.1.4
LOESUNGEN............................................................................................................24
2.1.4.1 LOESUNGEN FUER DIE MOLEKULARBIOLOGISCHEN ARBEITEN
...............................
24
2.1.4.2 LOESUNGEN FUER DIE DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
...................................
25
2.1.4.3 LOESUNGEN FUER DIE PROTEINBIOCHEMISCHEN ARBEITEN
................................
25
2.1.4.3.1 LOESUNGEN FUER DEN WESTERN B LO
T.................................................26
2.1.5
PUFFER..................................................................................................................26
2.1.5.1 PUFFER FUER DIE MOLEKULARBIOLOGISCHEN ARBEITEN
.....................................
26
2.1.5.2 PUFFER FUER DIE HIS-TAG
REINIGUNG............................................................ 27
2.1.5.3 PUFFER FUER DIE
PROTEINKRISTALLISIERUNG......................................................27
2.1.5.4 PUFFER FUER DIE
SDS-PAGE.......................................................................27
2.1.5.5 PUFFER FUER DEN WESTERN B LOT
...................................................................
28
2.1.5.6 PUFFER FUER DEN
STANDARD-ENZYMASSAY.....................................................
28
2.1.5.7 PUFFER FUER DIE CALCIUMCHLORID-BEHANDLUNG ZUR GEWINNUNG
KOMPETENTER
E. CO/Z-ZELLEN
......................................................................
28
2.1.6
ANZUCHTMEDIEN..................................................................................................
29
2.1.7 OLIGODESOXYRIBONUKLEOTIDE/PRIMER
...................................................................
29
2.1.8 ESCHERICHIA
CO/Z -STAEMME..................................................................................
34
2.1.9 KLONIERUNGS- UND EXPRESSIONSVEKTOREN
...........................................................
34
2.1.10 ERZEUGTE
VEKTOR-INSERT-KONSTRUKTE..................................................................
35
2.1.11 ENZYME UND K
ITS...............................................................................................
37
2.1.12
ANTIKOERPER...........................................................................................................38
2.1.13 G
ERAETE.................................................................................................................38
2.1.14
VERBRAUCHSMATERIALIEN.......................................................................................41
2.1.15 DNA- UND
PROTEINMARKER..................................................................................41
2.1.16 SOFTWARE UND
PROGRAMME..................................................................................42
2.2
METHODEN....................................................................................................................
44
2.2.1 MIKROSKOPISCHE ANALYSEN VON
DRUESENSCHUPPEN.............................................44
2.2.1.1 FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE
ANALYSE.....................................................44
2.2.1.2 ANALYSE MITTELS KONFOKALER LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE
...................
44
2.2.2 GEWINNUNG VON AETHERISCHEM OEL AUS THYMIANPFLANZEN
...................................
44
2.2.2.1 PROBENAUFARBEITUNG FUER DIE WASSERDAMPFDESTILLATION
...........................
44
2.2.2.2 WASSERDAMPFDESTILLATION
.........................................................................
45
2.2.3 ANALYTISCHE
METHODEN.......................................................................................45
2.2.3.1 DUENSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
(DG)......................................................... 45
2.2.3.2 THERMOMIKRO-ABTRENN-TRANSFER- & AUFTRAGEVERFAHREN NACH STAHL
....
45
2.2.4 GASCHROMATOGRAPHIE MIT MASSENSPEKTROMETRIE-KOPPLUNG (GC-MS)
............
46
2.2.4.1 ANALYSE DER
STANDARD-ENZYMASSAYS.......................................................46
2.2.4.2 ANALYSE VON AETHERISCHEN OELEN
................................................................
47
2.2.5 MOLEKULARE UNTERSCHEIDUNG VON THYMIAN-HERKUENFTEN
..................................
47
2.2.5.1 ISOLIERUNG VON GENOMISCHER DNA (GDNA)
..........................................
47
2.2.5.2 RANDOM AMPLIFIED POLYMORPHIE DNA (RAPD)-PCR
.........................
47
2.2.6 KLONIERUNG UND MUTAGENESE VON CDNA-KODIERTEN GENEN
.............................
48
2.2.6.1 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA
..................................................................
48
2.2.6.2 KONZENTRATIONS- UND REINHEITSBESTIMMUNG VON RNA- UND DNA-
LOESUNGEN..................................................................................................
49
2.2.6.3 UMSCHREIBEN VON MESSENGER RNA (MRNA) IN KOMPLEMENTAERE
DNA
(CDNA)...........................................................................................
49
2.2.6.4 POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)..........................................................49
2.2.6.5 RAPID AMPLIFICATION OF 5*-3* CDNA-ENDS
(RACE)-PCR.......................50
2.2.6.5.1 RAPID AMPLIFICATION OF 5* CDNA-ENDS
(5 -RAGE).....................51
FIRST-STRAND CDNA SYNTHESIS (REVERSE TRANSKRIPTION)
..........
51
REINIGUNG DER CDNA
................................................................
51
POLY(A) TAILING DER FIRST-STRAND CD NA
...................................
51
ERSTE AMPLIFIKATION DER DA-TAILED CD N A
...............................
52
ZWEITE AMPLIFIKATION DER 5*-RACE
........................................
53
2.2.6.5.2 RAPID AMPLIFICATION OF 3* CDNA-ENDS
(3 -RAGE).....................53
FIRST-STRAND CDNA SYNTHESIS (REVERSE TRANSKRIPTION)
........
.53
ERSTE AMPLIFIKATION DER 3*-RACE
...........................................
53
ZWEITE AMPLIFIKATION DER 3 -RAGE
........................................
54
2.2.6.6 THERMAL ASYMMETRIE INTERLACED (TAIL)-PCR
.......................................
54
22.6.1 NACHWEIS VON PCR-PRODUKTEN
................................................................
57
2.2.6.S AUFREINIGUNG UND ISOLIERUNG VON PCR-PRODUKTEN
................................
58
2.2.6.9 ANFUEGEN VON 3*-ADENOSINUEBERHANGEN AN BLUNT-END PCR-PRODUKTE
(A-TAILING)...............................................................................................
58
2.2.6.10 ENTFERNEN VON 3*-
ADENOSINUEBERHANGEN..................................................58
2.2.6.11 SUBKLONIERUNG VON
PCR-PRODUKTEN....................................................... 59
2.2.6.11.1 SUBKLONIERUNG VON TAQ-AMPLIFIZIERTEN
PCR-PRODUKTEN............59
TOPO-TA-CLONING K IT
..........................................................
59
INSTACLONE PCR CLONING K
IT..................................................59
2.2.6.11.2 SUBKLONIERUNG VON PHUSION-AMPLIFIZIERTEN PCR-PRODUKTEN
....
60
ZERO BLUNTTOPOPCR CLONING K IT
.....................................
60
CLONEJET PCR CLONING K
IT.....................................................61
GATEWAY CLONING KIT (PDONR221 - VEKTOR)
...........................
61
GATEWAY CLONING KIT (PENTR/D-TOPO)
...............................
63
2.2.6.12 HERSTELLUNG CHEMISCH KOMPETENTER
E. CO/Z-ZELLEN
.................................
63
2.2.6.13 TRANSFORMATION VON CHEMISCH KOMPETENTEN E.
CO/Z-ZELLEN...................64
2.2.6.14
COLONY-PCR.............................................................................................
64
2.2.6.15 PLASMID-DNA ISOLIERUNG
.........................................................................
65
2.2.6.16 DNA-SEQUENZIERUNG UND SEQUENZANALYSE
.............................................
65
2.2.6.17 KLADISTISCHE
ANALYSE................................................................................65
2.2.6.18 LANGZEITLAGERUNG VON
BAKTERIENKULTUREN................................................65
2.2.6.19 SITE-DIRECTED MUTAGENESIS
(SDM)-PCR.................................................66
2.2.6.20 /?!-VERDAU VON METHYLIERTER PLASMID-DNA
.......................................
66
2.2.6.21 LIGATION VON 5*-PHOSPHORYHERTEN
ENDEN...............................................66
2.2.7 HETEROLOGE PROTEINEXPRESSION IN E.
COLI........................................................... 67
2.2.7.1 HERSTELLUNG VON EXPRESSIONSKONSTRUKTEN
..............................................
67
2.2.7.2 HETEROLOGE EXPRESSION VON REKOMBINANTEN Y-TERPINEN SYNTHASEN
AUS VERSCHIEDENEN THYMIANARTEN/HERKUENFTEN
........................................
67
2.2.13 ZELLLYSE UND NATIVE HIS-TAG
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE........................68
2.2.7.3.1
AEKTAPURIFIER................................................................................68
2.2.13.2 NI-NTA
SAEULEN.............................................................................68
2.2.8 PROTEINBIOCHEMISCHE UND IMMUNOLOGISCHE METHODEN
....................................
68
2.2.8.1 UMPUFFEM VON PROTEINEN
........................................................................
68
2.2.5.2 EINKONZENTRIEREN VON
PROTEINEN..............................................................
69
2.2.8.3 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG NACH BRADFORD
............................................
69
2.2.5.4 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE)
.............................
69
2.2.5.5 PROTEINFARBUNG MIT SENSITIVER COOMASSIE-LOESUNG
.................................
70
2.2.8.6 SILBERFARBUNG VON PROTEINEN
...................................................................
70
2.2.8.7 WESTERN
BLOT............................................................................................
70
2.23.1.1 DETEKTION DER SIGNALE AUF EINEM ROENTGENFILM
............................
71
2.23.1.2 DETEKTION DER SIGNALE MIT EINEM CHEMILUMINESZENZ
WESTERN BLOT SCANNER
...................................................................
71
2.2.8.8 STANDARD-ENZYMASSAY FUER REKOMBINANTE Y-TERPINEN SYNTHASEN
...........
72
2.2.8.9 KRISTALLISATION DER REKOMBINANTEN Y-TERPINEN SYNTHASE AUS THYMUS
VULGARIS
OBI..............................................................................................
72
3.
ERGEBNISSE...................................................................................................................
73
3.1 KORRELATIONSANALYSE DER DRUESENSCHUPPENDICHTE UND DES AETHERISCHEN
OELGEHALTS DER
THYMIANZUECHTUNGEN DES
KOOPERATIONSPARTNERS..........................................................
73
3.1.1 FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE ANALYSE VON DRUESENSCHUPPEN
............................
73
3.1.2 WASSERDAMPFDESTILLATION ZUR ISOLIERUNG DES AETHERISCHEN OE LS
..........................
77
3.1.3 DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHISCHE ANALYSE DES AETHERISCHEN OE
LS......................79
3.1.4 GASCHROMATOGRAPHISCHE ANALYSE DES AETHERISCHEN OE LS
....................................
80
3.2 AETHERISCHE OEL-ANALYSE DIVERSER
THYMIANARTEN...........................................................
83
3.2.1 DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHISCHE
ANALYSE........................................................ 83
3.2.2 GASCHROMATOGRAPHISCHE ANALYSE
......................................................................
84
3.3 MOLEKULARE UNTERSCHEIDUNG VON THYMUS SPECIES DURCH RAPD-PCR
.......................
88
3.3.1 GENOMISCHE
DNA-ISOLIERUNG.............................................................................88
3.3.2
RAPD-PCR.........................................................................................................89
3.3.2.1 RAPD-ANALYSE DER ERSTEN PFLANZENLIEFERUNG VOM
10.07.2012.............89
3.3.2.2 RAPD-ANALYSE DER ZWEITEN PFLANZENLIEFERUNG VOM 31.01.2014
.........
91
3.3.3 TAS-VERFAHREN ZUR SCHNELLBESTIMMUNG DER CHEMOTYPEN
..............................
92
3.3.4 SEQUENCED CHARACTERIZED AMPLIFIED REGION
(SCAR)-ANALYSE......................93
3.3.4.1 ISOLIERUNG UND SUBKLONIERUNG DER MARKERBANDEN
..................................
93
3.3.4.2
NUKLEOTIDSEQUENZEN.................................................................................94
3.3.43 PCR MIT
SCAR-PRIMEM.........................................................................96
3.4 ISOLIERUNG UND KLONIERUNG VON GENEN AUS THYMUS
SPECIES.......................................97
3.4.1 ISOLIERUNG UND KLONIERUNG PUTATIVER Y-TERPINEN SYNTHASEGENE (GTS)
AUS
THYMUS
SPECIES..................................................................................................
98
3.4.1.1
STANDARD-PCR..........................................................................................
98
3.4.1.2 SUBKLONIERUNG.............................................
...........................................
99
3.4.1.3
NUKLEOTIDSEQUENZ....................................................................................99
3.4.1.4
AMINOSAEURESEQUENZ................................................................................
100
3.4.1.5 AMINOSAEURESEQUENZVERGLEICH DER HERKUENFTE DES
KOOPERATIONSPARTNERS...............................................................................
100
3.4.1.6 AMINOSAEURESEQUENZVERGLEICH DER VERSCHIEDENEN THYMIANARTEN
..........
102
3.4.1.7 ZUSAMMENFASSENDE KLADISTISCHE
ANALYSE.............................................. 102
3.4.2 ISOLIERUNG UND KLONIERUNG PUTATIVER PROGESTERON 5SS-REDUKTASE-
/ISOPRENOIDSYNTHASEGENE (PRISE) AUS THYMUS
SPECIES....................................103
3.4.2.1
STANDARD-PCR...........................................................................................104
3.4.2.2
SUBKLONIERUNG..........................................................................................
104
3.4.2.3
NUKLEOTIDSEQUENZ....................................................................................
105
3.4.2.4
AMINOSAEURESEQUENZ................................................................................
106
3.4.2.5 AMINOSAEURESEQUENZVERGLEICH DER HERKUENFTE DES
KOOPERATIONSPARTNERS..............................................................................
106
3.4.2.6 AMINOSAEURESEQUENZVERGLEICH DER VERSCHIEDENEN THYMIANARTEN
..........
107
3.4.2.7 ZUSAMMENFASSENDE KLADISTISCHE ANALYSE
..............................................
108
3.4.3 ISOLIERUNG UND KLONIERUNG PUTATIVER LIMONEN-6-HYDROXYLASEGENE
(L6H)
UND LIMONEN-3-HYDROXYLASEGENE (L3H) AUS THYMUS VULGARIS U N
I..............109
3.4.3.1 ISOLIERUNG UND KLONIERUNG EINES PUTATIVEN
LIMONEN-6-HYDROXYLASEGENS
(L6H) AUS THYMUS VULGARIS U N I
.............................................................
109
3.4.3.1.1 VERVOLLSTAENDIGUNG DER NUKELOTIDSEQUENZ DURCH 3*-RACE-PCR. 111
3.4.3.1.2 VERVOLLSTAENDIGUNG DER NUKELOTIDSEQUENZ DURCH 5*-TAIL-PCR.. 112
3.4.3.1.3 ISOLIERUNG UND KLONIERUNG EINES KOMPLETTEN PUTATIVEN
LIMONEN-6-HYDROXYLASGENS (L6H) AUS THYMUS VULGARIS U NI
....
114
3.4.3.2 ISOLIERUNG UND KLONIERUNG EINES ZWEITEN PUTATIVEN LIMONEN-6-
HYDROXYLASEGENS (L6H2) AUS THYMUS VULGARIS U N I
..............................
116
3.4.3.2.1 VERVOLLSTAENDIGUNG DER NUKELOTIDSEQUENZ DURCH 5*-TAIL-PCR ..118
3.4.3.2.2 ISOLIERUNG UND KLONIERUNG EINES KOMPLETTEN ZWEITEN PUTATIVEN
LIMONEN-6-HYDROXYLASGENS (L6H2) AUS THYMUS VULGARIS UNI... 120
3.5 FUNKTIONELLE EXPRESSION DER CDNA-KODIERTEN GENE AUS THYMUS
SPECIES................123
3.5.1 FUNKTIONELLE EXPRESSION VON Y-TERPINEN SYNTHASEN AUS THYMUS
SPECIES IN
E.
COLI..................................................................................................................
123
3.5.1.1 ERSTELLUNG DER
EXPRESSIONSKONSTRUKTE....................................................
124
3.5.1.2 HETEROLOGE
EXPRESSION............................................................................127
3.5.1.2.1 NATIVE HIS-TAG REINIGUNG UND EXPRESSIONSNACHWEIS DURCH
SDS-PAGE UND WESTERN B LO T
.......................................................
127
3.5.1.3
TRANSITPEPTID-VORHERSAGE........................................................................128
3.5.1.3.1 DELETION DER SIGNALSEQUENZ
............................................................
129
3.5.1.4 EXPRESSIONSNACHWEIS DER N-TERMINALEN EINKUERZUNGSMUTEINE DURCH
SDS-PAGE UND WESTERN
BLOT..................................................................131
3.5.1.4.1 7V
M
_GTSL_OBI_PTS46 UND 7VM_GTSL_OBI_PTS54
..................
131
3.5.1.4.2 THYMUS SPECIES & HERKUENFTE DES
KOOPERATIONSPARTNERS..............131
3.5.1.5 KRISTALLISATIONSVERSUCHE DER REKOMBINANTEN
G T S 1P T S 54G 356D A 565T AUS THYMUS VULGARIS O B I
.....................
133
3.5.1.5.1 NATIVE HIS-TAG REINIGUNG
.............................................................
133
3.5.2 HETEROLOGE UEBEREXPRESSION DER PUTATIVEN LIMONEN-6-HYDROXYLASE BZW.
LIMONEN-6-HYDROXYLASE 2 AUS THYMUS VULGARIS UNI IN S. CEREVISIAE
..........
134
3.5.2.1 ERSTELLUNG DER VEKTORKONSTRUKTE
............................................................
135
3.5.2.2 HETEROLOGE EXPRESSION DER REKOMBINANTEN HYDROXYLASEN
....................
137
3.6 BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER Y-TERPINEN SYNTHASE AUS THYMUS
SPECIES
.....
137
3.6.1 NACHWEIS DER KATALYTISCHEN AKTIVITAET DER R7V_GTS_BIO 1P T S 4 6
................137
3.6.2 ETABLIERUNG EINES GEEIGNETEN
ENZYMASSAYS..................................................... 138
3.6.2.1
PUFFERSYSTEM.............................................................................................138
3.6.2.2
PH-OPTIMUM.............................................................................................138
3.6.2.3
COFAKTOR.....................................................................................................139
3.6.2.4 MAGNESIUMCHLORIDKONZENTRATION
(COFAKTOR)..........................................139
3.6.2.5 GERANYLDIPHOSPHATKONZENTRATION
(SUBSTRAT)...........................................140
3.6.2.6
ENZYMKONZENTRATION................................................................................
140
3.6.2.7
TEMPERATUROPTIMUM................................................................................
140
3.6.2.8
ASSAYDAUER...............................................................................................141
3.6.2.9
SCHUETTELDREHZAHL.......................................................................................141
3.6.2.10 OPTIMIERTER
ENZYMASSAY.......................................................................142
3.6.3
AKTIVITAETSVERGLEICH.............................................................................................142
3.6.4 VERGLEICH DES NEBENPRODUKTSPEKTRUMS
............................................................
142
3.6.5 AKTIVITAETSUNTERSCHIEDE DER EINKUERZUNGSMUTANTEN DER TVWGTSLOBI
........
143
3.6.6
SUBSTRATSPEZIFITAET.................................................................................................144
3.7 HOMOLOGIE-MODELLIERUNG DER Y-TERPINEN SYNTHASE AUS THYMUS VULGARIS
OBI UND
DEREN
VALIDIERUNG..........................................................................................................
144
3.8 ORTSGERICHTETE MUTAGENESE (SDM) DER REKOMBINANTEN Y-TERPINEN
SYNTHASE AUS
THYMUS
SPECIES..............................................................................................................
147
3.8.1 MUTAGENESE ZUR AENDERUNG DES NEBENPRODUKTSPEKTRUMS DER
REKOMBINANTEN Y-TERPINEN SYNTHASE AUS THYMUS VULGARIS B IO L
.....................
147
3.8.1.1 MUTANTEN I342A UND
I342N.....................................................................147
3.8.2 MUTAGENESE ZUR AENDERUNG DER KATALYTISCHEN AKTIVITAET DER
REKOMBINANTEN
Y-TERPINEN SYNTHASE AUS THYMUS VULGARIS O BI
................................................
150
3.8.2.1 MUTANTE A565T
........................................................................................
150
3.8.2.2 MUTANTE G356D
........................................................................................
151
3.8.2.3 DOPPELMUTANTE G 356D A 565T
..............................................................
152
3.9 INHIBITIONSANALYSE DER Y-TERPINEN SYNTHASE AUS THYMUS VULGARIS B IO
L
....................
153
4.
DISKUSSION......................................................................................................................
155
4.1 KORRELATIONSANALYSE ZWISCHEN DRUESENSCHUPPENDICHTE UND DEM
AETHERISCHEN
OELGEHALT.........................................................................................................................
155
4.2 AETHERISCHE OEL-ZUSAMMENSETZUNG VERSCHIEDENER THYMIANARTEN
................................
159
4.3 RAPD-UND SC
AR-ANALYSEN.......................................................................................
163
4.4 KLONIERUNG UND SEQUENZANALYSE VON ORTHOLOGEN GENEN AUS THYMIAN
......................
168
4.4.1 Y-TERPINEN SYNTHASE
(GTS)................................................................................168
4.4.2 PROGESTERON 5SS-REDUKTASE/ IRIDOID SYNTHASE (PRISE)
....................................
171
4.5 CHARAKTERISIERUNG VON THYMOL-BIOSYNTHESEGENEN
.....................................................
174
4.5.1 Y-TERPINEN SYNTHASE
{GTS)................................................................................
175
4.5.1.1
MUTAGENESE-EXPERIMENTE.........................................................................178
4.5.1.1.1
7VW_GTS_BIOL_PTS46...................................................................179
4.5.1.1.2
7VW_GTSL_OBI_PTS54..................................................................183
4.5.1.2 KRISTALLISATION DER GTS AUS THYMUS VULGARIS OBI
..................................
183
4.5.1.3 INHIBITION DER G T S
...................................................................................
186
4.5.2 LIMONEN-6-HYDROXYLASEN (L6H/L6H2)
...........................................................
187
5.
ZUSAMMENFASSUNG....................................................................................................193
6.
SUMMARY.........................................................................................................................
195
7.
LITERATURVERZEICHNIS..........................................................................................
197
8.
ANLAGEN..........................................................................................................................
220
8.1 SEQUENZDATEN DER GENE AUS DEN KOMMERZIELL ERWORBENEN THYMIANPFLANZEN
..........
220
8.1.1
PRISE-SEQUENZEN..............................................................................................
220
8.1.2
GTS-SEQUENZEN.................................................................................................
224
8.1.3
AKTIN-SEQUENZ...................................................................................................
230
8.2 SEQUENZDATEN DER GENE AUS DEN THYMUS VW/GARAE-HERKUENFTEN DES
KOOPERATIONSPARTNERS....................................................................................................
230
8.2.1
PRISE-SEQUENZEN..............................................................................................
230
8.2.2
GTS-SEQUENZEN.................................................................................................
232
8.3 GASCHROMATOGRAPHISCHE ANALYSEN DES AETHERISCHEN OELS DER THYMUS
SPECIES
...........
235
8.3.1 GC-CHROMATOGRAMME DES AETHERISCHEN OELS DER KOMMERZIELL ERWORBENEN
THYMIANPFLANZEN...............................................................................................
235
8.3.2 GC-CHROMATOGRAMME DES AETHERISCHEN OELS DER THYMUS VW/GAM-HERKUENFTE
DES
KOOPERATIONSPARTNERS..................................................................................238
8.4 BILDER DER THYMUS VW/GARAE-HERKUENFTE DES KOOPERATIONSPARTNERS
.............................
239
8.5
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS................................................................................................
241
8.6
LEBENSLAUF.....................................................................................................................
245
8.7
PUBLIKATIONSLISTE............................................................................................................246
8.8 WISSENSCHAFTLICHE
KONGRESSE.......................................................................................
246
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