Holdings: Differentielle Evaluierung des IFN-α- und IFN-γ-dominierten Tumormikromilieus und dessen Einfluss auf die Prognose im Kolonkarzinom

Differentielle Evaluierung des IFN-α- und IFN-γ-dominierten Tumormikromilieus und dessen Einfluss auf die Prognose im Kolonkarzinom:

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Bibliographic Details
Main Author:	Grenz, Sandra (Author)
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Published:	Erlangen ; Nürnberg [2017]
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1 ZUSAMMENFASSUNG..................................................................................1 SUMMARY....................................................................................................... 2 2 EINLEITUNG.....................................................................................................3 2.1 DAS KOLOREKTALE KARZINOM .............................................................................. 3 2.1.1 FUNKTION UND AUFBAU DES DICKDARMS ........................................................... 3 2.1.2 EPIDEMIOLOGIE UND AETIOLOGIE DES KOLOREKTALEN KARZINOMS ........................ 4 2.1.3 KOLOREKTALE KARZINOGENESE............................................................................5 2.2 SCHLUESSELMERKMALE VON TUMOREN UND DAS TUMORMIKROMILIEU .................. 6 2.3 DIE FAMILIE DER INTERFERONE............................................................................. 8 2.3.1 SIGNALWEGE UND MODULATORISCHE EIGENSCHAFTEN VON IFN-OC ...................... 9 2.3.2 SIGNALWEGE UND MODULATORISCHE EIGENSCHAFTEN VON IFN-Y ..................... 11 2.4 INTERFERON-STIMULIERTE G EN E.......................................................................... 13 2.4.1 MYXOVIRUS-RESISTENZGEN-1...........................................................................14 2.4.2 GUANYLATBINDUNGSPROTEIN-1..........................................................................15 2.5 ZIELSETZUNG......................................................................................................16 3 MATERIAL UND METHODEN .................................................................... 17 3.1 MATERIAL.............................................................................................................17 3.1.1 SPEZIELLE CHEMIKALIEN...................................................................................17 3.1.2 SPEZIELLE VERBRAUCHSMITTEL ............................................................................ 18 3.1.3 KOMMERZIELLE REAGENZIENSAETZE....................................................................19 3.1.4 GERAETE UND APPARATUREN................................................................................19 3.1.5 ENZYME...........................................................................................................20 3.1.6 PRIMAERANTIKOERPER.............................................................................................. 20 3.1.7 SEKUNDAERANTIKOERPER ...................................................... 21 3.1.6 PLASMIDE.......................................................................................................... 21 3.1.9 OLIGONUKLEOTIDE (PRIM ER)..............................................................................22 3.1.9.1 SEQUENZIER -PRIMER ................................................................................. 22 3.1.9.2 QRT-PCR -PRIMER.....................................................................................22 3.1.10 BIOLOGISCHES MATERIAL ................................................................................... 22 3.1.10.1 PROKARYOTISCHE ZELLEN............................................................................22 I 3.1.10.2 EUKARYOTISCHE ZELLLINIEN 3.1.10.3 PRIMAERE EUKARYOTISCHE ZELLEN...............................................................23 3.1.10.4 HUMANE GEWEBEPROBEN........................................................................ 23 3.1.10.5 TISSUE-MICROARRAY.................................................................................. 24 3.1.11 MEDIEN, LOESUNGEN UND PUFFER......................................................................25 3.1.12 COMPUTERPROGRAMME.................................................................................... 28 3.2 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN ............................................................................ 28 3.2.1 KULTIVIERUNG EUKARYOTISCHER ZELLEN..............................................................26 3.2.2 STIMULIERUNG EUKARYOTISCHER ZELLEN MIT ZYTOKINEN....................................29 3.2.3 TRANSFEKTION EUKARYOTISCHER ZELLEN.............................................................30 3.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN .................................................................. 30 3.3.1 PRAEPARATION VON RNA UND DNA ................................................................... 30 3.3.1.1 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA AUS EUKARYOTISCHEN ZELLEN ................... 30 3.3.1.2 ISOLIERUNG PROKARYOTISCHER PLASMID-DNA.............................................31 3.3.2 BESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREKONZENTRATIONEN ....................................... 31 3.3.3 SPALTUNG VON DNA-MOLEKUELEN MIT RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN ............. 31 3.3.4 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE.........................................................................32 3.3.5 ISOLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGELEN ............................... 32 3.3.6 DEPHOSPHORYLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN..............................................32 3.3.7 LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN .................................................................... 33 3.3.6 TRANSFORMATION KOMPETENTER PROKARYOTISCHER ZELLEN ................................ 33 3.3.8.1 ELEKTROPORATION........................................................................................33 3.3.62 HITZESCHOCKTRANSFORMATION.....................................................................33 3.3.9 DNA-SEQUENZIERUNG ..................................................................................... 34 3.3.10 POLYMERASE-KETTENREAKTION.......................................................................... 34 3.3.11 QUANTITATIVE REVERSE-TRANSKRIPTION-POLYMERASEKETTENREAKTION ............ 35 3.3.12 RNA-/A7 SITU-HYBRIDISIERUNG ...................................... 36 3.3.12.1 HERSTELLUNG DER IN SITU-HYBRIDISIERUNGSSONDEN ................................. 36 3.3.12.2 VORBEREITUNG VON ZELLEN FUER IN SITU-HYBRIDISIERUNG...........................37 3.3.12.3 RNA -IN S/FIV-HYBRIDISIERUNG VON ZELLEN UND GEWEBESCHNITTEN ....... 36 3.4 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN..................................................................41 3.4.1 HERSTELLUNG VON GESAMTPROTEINZELLEXTRAKTEN ............................................ 41 3.4.2 BESTIMMUNG DER GESAMTPROTEINKONZENTRATION ......................................... 41 3.4.3 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE ..................................................... 41 3.4.4 ELEKTROTRANSFER VON PROTEINEN ...................................................................... 42 3.4.5 WESTERN-BLOT-ANALYSE...................................................................................42 3.4.6 IMMUNZYTOCHEMISCHE FAERBUNG...................................................................43 3.4.7 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG..................................................................43 3.4.8 IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNG ........................................................................ 45 3.5 STATISTISCHE AUSWERTUNG............................................................................... 45 4 ERGEBNISSE................................................................................................. 47 4.1 DIE INTERFERON-INDUZIERTE EXPRESSION VON MXA UND G B P -1....................47 4.1.1 IFN-A INDUZIERT PRAEFERENTIELL DIE EXPRESSION VON MXA IN ZELLEN DES KOLOREKTALEN KARZINOMS................................................................................ 47 4.1.2 IFN-Y INDUZIERT PRAEFERENTIELL DIE EXPRESSION VON GBP-1 IN ZELLEN DES KOLOREKTALEN KARZINOMS................................................................................ 49 4.2 MXA WIRD IM GEWEBE DES KOLOREKTALEN KARZINOMS EXPRIMIERT ............... 50 4.2.1 MXA WIRD IN TUMOR- UND STROMAZELLEN DES KOLOREKTALEN KARZINOMS EXPRIMIERT........................................................................................................ 50 4.2.2 DIE MX1-EXPRESSION AUF RNA-EBENE KORRELIERT MIT DER PROTEINEXPRESSION VON MXA IM GEWEBE DES KOLOREKTALEN KARZINOMS..54 4.3 EIN IFN-A-DOMINIERTES TUMORMIKROMILIEU VERBESSERT DIE PROGNOSE VON PATIENTEN MIT KOLONKARZINOM ....................................................................... 58 4.3.1 IFN-A INDUZIERTES MXA WIRD VON DER HAELFTE DER PATIENTEN MIT KOLONKARZINOM EXPRIMIERT............................................................................. 56 4.3.2 DIE PATIENTENKOHORTE DES TMA IST FUER PATIENTEN MIT KOLONKARZINOM REPRAESENTATIV.................................................................................................. 60 4.3.3 DIE MXA-EXPRESSION IST NICHT MIT KLASSISCHEN PATHOKLINISCHEN MERKMALEN VON PATIENTEN MIT KOLONKARZINOM ASSOZIIERT ........................ 63 4.3.4 DIE EXPRESSION VON MXA IN DEN TUMORZELLEN IST NICHT MIT EINER VERBESSERTEN PROGNOSE VON PATIENTEN MIT KOLONKARZINOM ASSOZIIERT...64 4.3.5 DIE EXPRESSION VON MXA IN DEN STROMAZELLEN DES DESMOPLASTISCHEN STROMAS IST STATISTISCH SIGNIFIKANT MIT EINER VERBESSERTEN PROGNOSE VON PATIENTEN MIT KOLONKARZINOM ASSOZIIERT.................................................... 65 4.4 IFN-A-INDUZIERTES MXA UND IFN-Y-INDUZIERTES GBP-1 SIND IM GEWEBE DES KOLOREKTALEN KARZINOMS KOEXPRIMIERT ................................................. 66 4.5 DIE PROGNOSE VON PATIENTEN MIT KOLONKARZINOM WIRD DURCH EIN IFN-Y- DOMINIERTES TUMORMIKROMILIEU STAERKER BEEINFLUSST ALS DURCH EIN IFN-OT- DOMINIERTES TUMORMIKROMILIEU................................................................... 68 4.5.1 DIE EXPRESSION VON GBP-1 IN DEN STROMAZELLEN IST MIT EINER STATISTISCH HOCH SIGNIFIKANT VERBESSERTEN PROGNOSE FUER PATIENTEN MIT KOLONKARZINOM ASSOZIIERT ............................................................................. 68 4.5.2 DIE EXPRESSION VON MXA UND GBP-1 IN DEN STROMAZELLEN IST KEIN UNABHAENGIGER FAKTOR FUER DIE PROGNOSE DES KOLONKARZINOMS..................70 4.5.3 EIN IFN-Y-DOMINIERTES TUMORMIKROMILIEU ZEIGT IM GEGENSATZ ZU EINEM IFH!--DOMINIERTEN TUMORMIKROMILIEU EINE SIGNIFIKANT VERBESSERTE PROGNOSE VON PATIENTEN MIT KOLONKARZINOM..............................................71 5 DISKUSSION..................................................................................................73 5.1 IFN-CT UND IFN-Y STIMULIEREN DIE EXPRESSION VON MXA UND GBP-1 IN ZELLEN DES KOLOREKTALEN KARZINOMS............................................................74 5.2 5.3 6 7 6 EIN IFN-Y-DOMINIERTES TUMORMIKROMILIEU IST IM GEGENSATZ ZU EINEM IFN-A-DOMINIERTEN TUMORMIKROMILIEU MIT EINER SIGNIFIKANT VERBESSERTEN PROGNOSE VON PATIENTEN MIT KOLONKARZINOM ASSOZIIERT ............................ 76 DIE GLEICHZEITIGE ANWESENHEIT VON IFN-A UND IFN-Y IM TUMORMIKROMILIEU ZEIGT KEINEN SYNERGISTISCHEN EFFEKT AUF DIE PROGNOSE IM KOLONKARZINOM........................................................................................... 77 SCHLUSSFOLGERUNG..............................................................................80 LITERATURVERZEICHNIS.........................................................................81 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS ................................................................... 92
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