Die Wirkung von microRNA-132 und microRNA-212 auf Zielgene an der Blut-Hirn-Schranke bei Glucose- und Sauerstoffentzug: = The effect of microRNA-132 and microRNA-212 on target genes of the blood-brain-barrier during oxygen-glucose-deprivation
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Würzburg
Dezember 2016
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| Beschreibung: | VIII, 82 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS..............................................................................................................
IV
1
EINLEITUNG...................................................................................................................................1
1.1
BLUT-HIRN-SCHRANKE......................................................................................................
1
1.2 ISCHAEMISCHER
SCHLAGANFALL...........................................................................................3
1.3
MICRORNA.....................................................................................................................5
1.3.1 BIOGENESE VON
MICRORNA.....................................................................................6
1.3.2 INTERAKTION ZWISCHEN MICRORNA UND MRNA
......................................................
7
1.3.3 MIMICS (IMITATOREN) UND INHIBITOREN VON MIRNAS ZUR ANALYSE DER
REGUALTION
DES
ZIELGENS....................................................................................................................9
1.3.4 MICORNA-212 UND
MICRORNA-132.....................................................................
12
1.4
ZIELSETZUNG.................................................................................................................13
2 MATERIAL UND
METHODEN..........................................................................................................14
2.1
MATERIAL..................................................................................................................
14
2.1.1
ZELLKULTUR.............................................................................................................14
2.1.2
ENDOTHELZELLPRAEPARATION.....................................................................................15
2.1.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN......................................................................
15
2.1.3.1
RNA-ISOLATION..............................................................................................15
2.1.3.2
CDNA-SYNTHESE...........................................................................................16
2.1.3.3
QPCR.............................................................................................................16
2.1.4 BIOCHEMISCHE
METHODEN...................................................................................17
2.1.4.1 ZELLLYSAT FUER WESTERN
BLOT..........................................................................
17
2.1.4.2
PROTEINBESTIMMUNG....................................................................................17
2.1.4.3 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (PAGE) UND WESTERN BLOT
..........
18
2.1.4.4
TRANSFEKTION................................................................................................21
2.1.4.5
TEER............................................................................................................
22
2.1.4.6 PERMEABILITAETSMESSUNG
(FAM)..................................................................22
2.2 METHODEN
23
2.2.1
ZELLKULTUR.............................................................................................................
23
2.2.1.1 PRAEPARATION UND KULTIVIERUNG DER VERSCHIEDENEN ZELLLINIEN
....................
23
2.2.1.2
KULTURMEDIEN..............................................................................................
25
2.2.1.3
VERSUCHSAUFBAU..........................................................................................
26
2.2.2 BIOCHEMISCHE M
ETHODE.....................................................................................
30
2.2.2.1
PROTEINPRAEPARATION.....................................................................................
30
2.2.2.2 PROTEINBESTIMMUNG BICINCHONINSAEURE (BCA)-METHODE
..........................
30
2.2.2.3 NATRIUMLAURYLSULFAT-POLYACRYLAMID-GEL-ELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE).... 31
2.2.2.4 WESTERN
BLOT...............................................................................................
33
2.2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE M ETHODE
........................................................................
35
2.2.3.1 RIBONUKLEINSAEURE-ISOLATION
........................................................................
35
2.2.3.2 REVERSE TRANSKRIPTION - CDNA-SYNTHESE
..................................................
36
2.2.3.3 QUANTITATIVE REAL TIME POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (QPCR)
.................
37
2.2.4
TRANSFEKTION........................................................................................................38
2.2.4.1 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG FUER OPTIMALE TRANSFEKTIONSBEDINGUNGEN..
39
2.2.4.2 BEOBACHTUNG TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ MITTELS MIKROSKOPIE
......................
40
2.2.5 BIOELEKTRISCHE UND PERMEABILITAETS-MESSUNG
...................................................
41
2.2.6 STATISTISCHE
AUSWERTUNG.....................................................................................42
3
ERGEBNISSE..............................................................................................................................
43
3.1 ETABLIERUNG DER OGD-BEDINGUNGEN: EINFLUSS VON
ASTROZYTEN-(C6-)KONDITIONIERTEM
MEDIUM AUF DIE EXPRESSION VON DIVERSEN BLUT-HIRN-SCHRANKE-ASSOZIIERTEN
GENEN... 43
3.2 MICRORNA-132/212 INDUZIERTE REGULATION DER ZIELGENE IN MURINEN
CEND-2-ZELLEN
49
3.2.1 ETABLIERUNG DER TRANSFEKTIONSBEDINGUNGEN: BESTIMMUNG DER
KONZENTRATION
DES TRANSFEKTIONSREAGENZES UND DER MIRNA-LMITATOREN UND
-INHIBITOREN............49
3.2.2 BESTIMMUNG DER TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ IN DEN CEND-2-ZELLEN
..................
51
3.2.3 EINFLUSS VON MIRNA-132 UND MIRNA-212 AUF AUSGEWAEHLTE ZIELGENE IN
CEND-2
52
3.2.3.1 REGULATION DES ZIELGENS CLAUDINL DURCH MIRNA-132/212
......................
53
3.2.3.2 REGULATION DES ZIELGENS TJAPL DURCH MIRNA-132/212
............................
56
3.2.3.3 REGULATION DES ZIELGENS JAM3 DURCH MIRNA-132/212
............................
58
3.2.3.4 REGULATION DES ZIELGENS MMP9 DURCH MIRNA-132/212
..........................
61
3.2.4 EINFLUSS VON MIRNA-132/212 AUF DEN WIDERSTAND UND DIE
PERMEABILITAET BEI
CEND-2-ZELLEN...............................................................................................................62
4
DISKUSSION..................................................................................................................................63
4.1 OGD INDUZIERTE VERAENDERUNGEN DER GENEXPRESSION VERSCHIEDENER BHS
ASSOZIIERTER PROTEINE IN
CEND-2......................................................................................64
4.2 EFFEKT VON ASTROZYTEN-(C6-)KONDITIONIERTEM MEDIUM AUF DIE EXPRESSION
DER BHS-
ASSOZIIERTEN PROTEINE NACH DER OGD-INDUZIERTEN FUNKTIONSSTOERUNG DER BHS
...........
65
4.3 EFFEKT VON MIRNA-132/212 AUF DIE GENEXPRESSION VON BHS-KOMPONENTEN
IN
MURINEN
HIRNENDOTHELZELLEN...........................................................................................67
4.4 EINFLUSS VON MIRNA-132/212 AUF DIE DICHTIGKEIT DER CEND-2-ZELLEN
.....................
69
5
ZUSAMMENFASSUNG...................................................................................................................
70
6
ABBILDUNGSVERZEICHNIS............................................................................................................72
7
TABELLENVERZEICHNIS.................................................................................................................74
8
LITERATURVERZEICHNIS.................................................................................................................75
9
DANKSAGUNG...............................................................................................................................
81
10
LEBENSLAUF...............................................................................................................................
82
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| title_sub | = The effect of microRNA-132 and microRNA-212 on target genes of the blood-brain-barrier during oxygen-glucose-deprivation |
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