Interleukin-2 (IL-2) - Stimulation und Kryopreservation kaniner Lymphozyten von gesunden und an Mammatumoren erkrankten Hundenzur adoptiven Tumorimmuntherapie beim Hund:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen, Lahn
VVB Laufersweiler Verlag
2017
|
| Schriftenreihe: | Edition Scientifique
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | VIII, 126 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm x 14.6 cm, 227 g |
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS..................................................................................................IV
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS........................................................................................
VIII
1
EINLEITUNG.....................................................................................................
1
2
LITERATUR........................................................................................................2
2.1 ADOPTIVE
TUMORIMMUNTHERAPIE......................................................................2
2.1.1 THERAPIE MIT NK-ZELLEN UND/ODER IL-2 BEI
MENSCHEN......................................4
2.1.2 THERAPIE MIT NK-ZELLEN UND/ODER IL-2 BEI
SAEUGETIEREN...................................5
2.2 NATUERLICHE KILLERZELLEN DES
HUNDES................................................................7
2.2.1 AUSSEHEN,
CHARAKTERISTIKA.............................................................................7
2.2.2
ISOLIERUNG.......................................................................................................9
2.2.3
KULTIVIERUNG..................................................................................................
11
2.2.4
STIMULATION...................................................................................................
11
2.2.5 MESSUNG DER ZYTOTOXISCHEN
AKTIVITAET............................................................ 12
2.3 KRYOKONSERVIERUNG VON
LYMPHOZYTEN.......................................................... 15
2.4 VERWENDETE
ZELLLINIEN..................................................................................
19
2.4.1
CTAC...........................................................................................................
19
2.4.2 BHK21 KLON
A5...........................................................................................
19
2.5 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE BESTIMMUNG DER OBERFLAECHENANTIGENE VON
LYMPHOZYTEN...............................................................................................20
3 MATERIAL UND
METHODEN.............................................................................22
3.1 ALLGEMEINE
ZELLKULTURARBEITEN......................................................................22
3.1.1
MEDIEN.........................................................................................................22
3.1.2
ZELLLINIEN.......................................................................................................23
3.1.2.1 ZELLLINIE CTAC (ZIELZELLEN FUER ZYTOTOXIZITAETSTEST)
..........................................
23
3.1.2.2 ZELLLINIE BHK 21 (NICHT TRANSFIZIERTE KONTROLLZELLEN)
......................................
23
3.1.2.3 ZELLLINIE BHK 21 KLON A5 (TRANSFIZIERT, KANINES IL-2
PRODUZIEREND)
..............
23
3.1.3
MEDIENWECHSEL............................................................................................23
3.1.4 PASSAGE
3.1.5 KRYOKONSERVIERUNG
......................................................................................
24
3.1.6 AUFTAUEN VON KRYOKONSERVIERTEN
ZELLKULTUREN..............................................26
3.1.7
ZELLZAEHLUNG.................................................................................................
26
3.2 PROBENGEWINNUNG
.......................................................................................
27
3.3 BLUTBILD MIT HAEMATOLOGIE MESSSYSTEM CELL-DYN
3500.................................27
3.4 ISOLIERUNG DER NK-ZELLREICHEN
LYMPHOZYTENFRAKTION....................................28
3.5 ZYTOZENTRIFUGENPRAEPARATE / MANUELLE
DIFFERENZIERUNG.................................29
3.6 ZYTOTOXISCHER
TEST.......................................................................................30
3.6.1 VORBEREITUNG DER
ZIELZELLEN..........................................................................30
3.6.2 VORBEREITUNG DER
EFFEKTORZELLEN...................................................................30
3.6.3 DURCHFUEHRUNG DES
ZYTOTOXIZITAETSTESTS...........................................................30
3.6.4
AUSWERTUNG.................................................................................................
32
3.7 VERGLEICHENDE STIMULATION MIT RHLL-2 UND
RCLL-2.........................................32
3.8 KRYOKONSERVIERUNG MIT ANSCHLIESSENDEM
ZYTOTOXIZITAETSTEST..........................34
3.9 MESSUNGEN IM
DURCHFLUSSZYTOMETER............................................................34
3.9.1 PROBENENTNAHME
........................................................................................
36
3.9.2 VERWENDETE ANTIKOERPER
...............................................................................
37
3.9.3 VORBEREITUNG DER NK-ZELL-REICHEN
LYMPHOZYTENISOLATE...............................37
3.9.4 DURCHFUEHRUNG DER MESSUNG
........................................................................
36
3.10 STATISTISCHE AUSWERTUNG
.............................................................................
39
3.11 GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN
.............................................................
40
3.11.1 BEZUGSQUELLEN FUER CHEMIKALIEN
..................................................................
40
3.11.2 BEZUGSQUELLEN FUER GERAETE
...........................................................................
41
3.11.3 BEZUGSQUELLEN FUER
EINMALARTIKEL...................................................................43
4
ERGEBNISSE..................................................................................................
44
4.1 WACHSTUM DER EINGESETZTEN
URSPRUNGSZELLEN..............................................44
4.2 VERGLEICH DER DIFFERENTIALBLUTBILDER ZWISCHEN GESUNDEN UND AN MAMMA
TUMOREN ERKRANKTEN
HUNDEN.......................................................................45
4.3 VERGLEICHENDE BETRACHTUNG DER PROZENTUALEN ANTEILE DER JEWEILIGEN
LEUKOZYTENPOPULATIONEN DIREKT NACH BLUTENTNAHME, PERCOLL-LSOLIERUNG UND
NACH EINTAEGIGER
INKUBATION..........................................................................47
4.3.1 PROZENTUALE VERTEILUNG DER NEUTROPHILE
GRANULOZYTEN.................................47
4.3.2 PROZENTUALE VERTEILUNG DER
LYMPHOZYTEN....................................................49
4.3.3 PROZENTUALE VERTEILUNG DER
MONOZYTEN........................................................50
4.3.4 PROZENTUALE VERTEILUNG DER EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN
..............................
51
4.3.5 PROZENTUALE VERTEILUNG DER BASOPHILEN
GRANULOZYTEN.................................52
4.4 VERGLEICH DER INKUBATION MIT
IL-2.................................................................53
4.4.1 VERGLEICH DER ZELLZAHLEN NACH 7-TAEGIER INKUBATION MIT IL-2
.........................
53
4.4.2 VERGLEICH DER ZYTOTOXIZITAET NACH 7-TAEGIER INKUBATION MIT IL-2
.......................
54
4.5
KRYOKONSERVIERUNG.......................................................................................58
4.5.1 VERGLEICH DER ZYTOTOXIZITAET VON LAK VOR UND NACH KRYOKONSERVIERUNG
.......
58
4.5.2 LEBENSFAEHIGKEIT DER LYMPHOZYTEN NACH KRYOKONSERVIERUNG UND
EINTAEGIGER
INKUBATION....................................................................................................60
4.6 VERGLEICH DER CD-OBERFLAECHENANTIGENE KANINER LYMPHOZYTEN NACH
STIMULATION MIT RHLL-2 ODER
RCLL-2................................................................61
4.6.1 VERGLEICH DER CD5 /
CD4-OBERFLAECHENANTIGENE...........................................65
4.6.1.1 VERGLEICH DER GESAMTZAHLEN
......................................................................
65
4.6.1.2 VERGLEICH DER PROZENTUALEN VERTEILUNGEN
....................................................
66
4.6.2 VERGLEICH DER CD5 /
CD8-OBERFLAECHENANTIGENE...........................................68
4.6.2.1 VERGLEICH DER GESAMTZAHLEN
......................................................................
66
4.6.2.2 VERGLEICH DER PROZENTUALEN
VERTEILUNGEN.....................................................69
4.6.3 VERGLEICH DER CD5 / CD21 -OBERFLAECHENANTIGENE
.......................................
71
4.6.3.1 VERGLEICH DER GESAMTZAHLEN
......................................................................
71
4.6.3.2 VERGLEICH DER PROZENTUALEN VERTEILUNGEN
....................................................
72
5
DISKUSSION.................................................................................................74
5.1 DISKUSSION DER
FRAGESTELLUNG......................................................................74
5.2 DISKUSSION DER METHODE
.............................................................................
75
5.2.1 BLUTENTNAHME,
DIFFERENTIALBLUTBILD................................................................75
5.2.2 ISOLIERUNG DER
NK-ZELLEN..............................................................................76
5.2.3 IL-2 STIMULATION DER NK-ZELLEN
....................................................................
77
5.2.4 ZYTOTOXISCHER
TEST.......................................................................................78
5.2.5 KRYOKONSERVIERUNG KANINER
LYMPHOZYTEN....................................................79
5.2.6
FACS-ANALYSE............................................................................................
80
5.3 DISKUSSION DER ERGEBNISSE
..........................................................................
80
5.3.1
BLUTBILD........................................................................................................
60
5.3.2 ISOLIERUNG DER NK-ZELLEN
.............................................................................
61
5.3.3 STIMULATION MIT RHLL-2 UND RCLL-2
.................................................................
82
5.3.4 KRYOKONSERVIERUNG KANINER
LYMPHOZYTEN....................................................64
5.3.5
FACS-ANALYSE...........................................................................................
65
5.4
AUSBLICK.......................................................................................................
87
6 ZUSAMMENFASSUNG
..................................................................................
88
7
SUMMARY...................................................................................................
90
8 LITERATURVERZEICHNIS
.................................................................................
92
ABBILDUNGSVERZEICHNIS..........................................................................................109
TABELLENVERZEICHNIS
..............................................................................................
112
ANHANG
.................................................................................................................
114
DANKSAGUNG...........................................................................................................
126
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