Holdings: Die Bedeutung der Aktin-bindenden Proteine ADF, n-Cofilin und CAP2 für die synaptische Aktin-Dynamik und Transmitterfreisetzung

Die Bedeutung der Aktin-bindenden Proteine ADF, n-Cofilin und CAP2 für die synaptische Aktin-Dynamik und Transmitterfreisetzung:

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Bibliographic Details
Main Author:	Wolf, Michael 1984- (Author)
Format:	Thesis Book
Language:	German
Published:	Berlin Mensch und Buch Verlag 2017
Subjects:	Actin-bindende Proteine Neurotransmitter Actin-Filament Hochschulschrift
Online Access:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Physical Description:	IV, 126 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm
ISBN:	9783863878238

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS............................................................................................................I ZUSAMMENFASSUNG....................................................................................................... IV 1 EINLEITUNG.......................................................................................................................1 1.1 ROLLE DES AKTIN-ZYTOSKELETTS FUER STRUKTUR UND FUNKTION DER SYNAPSE .................. 1 1.1.1 AKTIN IN DER PRAESYNAPTISCHEN ENDIGUNG .......................................................... 1 1.1.2 AKTIN IN DER POSTSYNAPSE ................................................................................. 3 1.1.3 AKTIN UND SYNAPTISCHE PLASTIZITAET.....................................................................5 1.2 DER AKTIN-TRETMUEHLENMECHANISMUS UND SEINE MODULATION ........... . ..................... 6 1.3 REGULATORISCHE PROTEINE DER AKTIN-DYNAMIK UND IHRE FUNKTION IN DER SYNAPSE.................................................................................................................. 9 1.3.1 PROTEINE DER ADF/COFILIN-FAMILIE.....................................................................9 1.3.2 FAMILIE DER CYCLASE-ASSOZIIERTEN PROTEINE (CAP) ....................................... 10 1.4 ZIELSETZUNG DER ARBEIT........................................................................................... 12 2 MATERIAL UND METHODEN............................................................................................. 14 2.1 CHEMIKALIEN........................................................................................................... 14 2.2 PRIMAERE ANTIKOERPER.................................................................................................16 2.3 SEKUNDAERE ANTIKOERPER........................................................................................... 17 2.4 FLUORESZENZFARBSTOFFE........................................................................................... 18 2.5 PUFFER UND LOESUNGEN............................................................................................. 19 2.5.1 SDS-PAGE UND WESTERN B LOT....................................................................... 19 2.5.2 CO-IMMUNPRAEZIPITATION .................................................................................. 20 2.5.3 PRAEPARATIVE METHODEN ................................................................................... 20 2.5.4 PUFFER FUER IMMUNHISTOCHEMIE UND IMMUNZYTOCHEMIE ................................. 22 2.5.5 MEDIEN UND PUFFER FUER PRIMAERE ZELLKULTUR......................................................23 2.6 VERSUCHSTIERE.........................................................................................................24 2.7 HISTOLOGIE............................................................................................................... 26 2.7.1 TRANSKARDIALE PERFUSION VON MAEUSEN........................................................... 26 2.7.2 ANFERTIGUNG VON HIRNSCHNITTEN.......................................................................26 2.7.3 X-GAL-FAERBUNG............................................................................................... 27 2.7.4 IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG............................................................................. 28 2.8 PRIMAERE HIPPOCAMPALE KULTUREN DER MAUS 2.6.1 VORBEREITUNG DER DECKGLAESER......................................................................... 28 2.6.2 PRAEPARATION DER HIPPOCAMPALEN NEURONE.....................................................29 2.8.3 IMMUNZYTOCHEMISCHE FAERBUNG PRIMAERER HIPPOCAMPALER KULTUREN ............ 30 2.9 MIKROSKOPIE.............................................................................................................31 2.9.1 HELLFELD- UND EPIFLUORESZENZ-MIKROSKOPIE.................................................... 31 2.9.2 KONFOKALE LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE....................................................... 32 2.9.3 BEARBEITUNG UND AUSWERTUNG DER KONFOKALEN AUFNAHMEN ......................... 33 2.10 PRAEPARATIVE METHODEN......................................................................................... 33 2.10.1 SUBZELLULAERE FRAKTIONIERUNG NACH GUILLEMIN...............................................33 2.10.2 ISOLIERUNG VON SYNAPTOSOMEN..................................................................... 35 2.10.3 SUBSYNAPTISCHE FRAKTIONIERUNG NACH PHILLIPS.............................................39 2.11 BIOCHEMISCHE METHODEN..................................................................................... 40 2.11.1 ARBEITEN MIT PROTEINEN..................................................................................40 2.11.2 QUANTIFIZIERUNG VON PROTEINEN.....................................................................40 2.11.3 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON PROTEINEN ......................................... 40 2.11.4 ANALYSE DES F-/G-AKTIN-VERHAELTNISSES IN SYNAPTOSOMEN ......................... 42 2.11.5 BEHANDLUNG VON SYNAPTOSOMEN MIT AKTIN-MODIFIZIERENDEN TOXINEN ...... 43 2.11.6 BESTIMMUNG DES V-SNARE/T-SNARE-VERHAELTNISSES IN SYNAPTOSOMEN...44 2.12 PHYSIOLOGISCHE METHODEN...................................................................................46 2.12.1 ANALYSE DER GLUTAMATFREISETZUNG AUS SYNAPTOSOMEN .............................. 46 2.12.2 BESTIMMUNG DER GROESSE DES RRP................................................................50 2.13 AUSWERTUNG UND STATISTIK....................................................................................51 3 ERGEBNISSE................................................................................................................ 52 3.1 ZELLULAERE UND SYNAPTISCHE EXPRESSION VON ADF..................................................52 3.2 ERHOEHTE N-COFILIN-EXPRESSION IN SYNAPTISCHEN STRUKTUREN VON ADFV-TIEREN....55 3.3 ANALYSE DER CAMKIIA-CRE-EXPRESSION.................................................................57 3.4 BEDEUTUNG DER DELETION VON ADF & N-COFILIN FUER DIE ZELLULAERE UND SYNAPTISCHE AKTIN-EXPRESSION..............................................................................63 3.5 BEDEUTUNG DER DELETION VON ADF & N-COFILIN FUER DIE SYNAPTISCHE AKTIN-DYNAMIK....................................................................................................... 64 3.5.1 GESTOERTE DEPOLARISATIONSINDUZIERTE AKTIN-DYNAMIK DURCH DELETION VON ADF & N-COFILIN ............................................... 65 3.5.2 REDUZIERTE INTRINSISCHE AKTIN-DYNAMIK IN ACC-SYNAPTOSOMEN .................. 69 3.6 BEDEUTUNG DER DELETION VON ADF & N-COFILIN FUER DIE EXPRESSION WICHTIGER SYNAPTISCHER PROTEINE.......................................................................................... 73 3.7 BEDEUTUNG DER DELETION VON ADF & N-COFILIN FUER DIE RATE GEDOCKTER VESIKEL IN ACC-MUTANTEN................................................................................................. 75 3.6 BEDEUTUNG DER DELETION VON ADF & N-COFILIN FUER DIE SYNAPTOSOMALE GLUTAMATFREISETZUNG............................................................................................. 76 3.8.1 EXTRASYNAPTOSOMALES GLUTAMAT UND SPONTANE GLUTAMATFREISETZUNG ......... 76 3.8.2 CA2+-ABHAENGIGE GLUTAMATFREISETZUNG NACH DEPOLARISATION ........................ 76 3.6.3 ERHOEHTER GESAMT-GLUTAMATGEHALT IN ACC-SYNAPTOSOMEN ......................... 80 3.8.4 ROLLE DER VESIKEL-POOLS BEI DER UNTERSCHIEDLICHEN GLUTAMATFREISETZUNG IN WT- UND ACC-SYNAPTOSOMEN..................................................................62 3.9 NEURONALE EXPRESSION DES AKTIN-BINDENDEN PROTEINS CAP2 ............................. 84 4 DISKUSSION.................................................................................................................. 88 4.1 SYNAPTISCHE EXPRESSION UND BEDEUTUNG VON ADF FUER DIE ZELLULAERE UND SYNAPTISCHE AKTIN-EXPRESSION............................................................................. 69 4.2 UNTERSUCHUNG DES DELETIONSMUSTERS VON N-COFILIN IN DER NCOFLX/LX,CAMKIICRE- MAUS UND IMPLIKATIONEN FUER DIE HYPERAKTIVITAET DER ACC-MAUS ......................... 90 4.3 ROLLE VON ADF UND N-COFILIN FUER DIE ZELLULAERE UND SYNAPTISCHE AKTIN-DYNAMIK.......................................................................................................92 4.4 ROLLE VON ADF UND N-COFILIN FUER DIE SYNAPTISCHE TRANSMITTER- FREISETZUNG ...... 95 4.5 DIE NEURONALE EXPRESSION UND FUNKTION VON CAP2 ......................................... 101 5 LITERATUR ............................................................... 105 ABBILDUNGSVERZEICHNIS.............................................................................................. 122 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS ............................................ 123 LEBENSLAUF....................................................................................................................125
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