Verfügbarkeit: Autodisplay eines vollständigen IgG-Antikörpers

Autodisplay eines vollständigen IgG-Antikörpers:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Weckenbrock, Wilhelmine 1988- (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Münster 2015
Schlagworte:	Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	Zusammenfassung in deutscher und englischer Sprache
Beschreibung:	120 Seiten Illustrationen, Diagramme 21 cm

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adam_text	INHALT ZUSAMMENFASSUNG..........................................................................................................1 SUMMARY......................................................................................................................... 2 I. EINLEITUNG..............................................................................................................3 1. ANTIKOERPER: AUFBAU, EINTEILUNG UND FUNKTIONEN............................................................3 2. GEWINNUNG VON A NTIKOERPERN............................................................................................ 6 2.1. TIER-SEREN..................................................................................................................... 6 2.2. HYBRIDOMA-TECHNIK.................................................................................................... 6 2.3. DISPLAY-TECHNOLOGIEN FUER ANTIKOERPER UND IHRE F RAGM ENTE ................................. 8 2.3.1. PHAGEN-DISPLAY....................................................................................................... 8 2.3.2. ZELLULAERE DISPLAY-TECHNOLOGIEN............................................................................10 3. PHARM AZEUTISCHE ANWENDUNGEN VON A NTIKOERPERN ..................................................... 12 4. AUTODISPLAY........................................................................................................................ 14 5. CARCINOEMBRYONALES ANTIGEN (CEA)..............................................................................17 6. ZIEL DER ARBEIT....................................................................................................................19 II. MATERIAL UND METHODEN..................................................................................... 20 1. M ATERIAL............................................................................................................................... 20 1.1. G ERAETE..........................................................................................................................20 1.2. SOFTW ARE..................................................................................................................... 22 1.3. CHEMIKALIEN UND V ERBRAUCHSM ATERIALIEN............................................................. 22 1.4. LOESUNGEN UND PUFFER................................................................................................ 24 1.4.1. PUFFER UND LOESUNGEN FUER ARBEITEN MIT BAKTERIEN................................................24 1.4.2. PUFFER UND LOESUNGEN FUER ARBEITEN MIT EUKARYOTISCHEN ZELLEN............................25 1.4.3. LOESUNGEN FUER DIE AGAROSEGELELEKTROPHORESE.......................................................25 1.4.4. LOESUNGEN FUER SDS-PAGE UND WESTERN BLOT ......................................................... 26 1.4.5. LOESUNGEN FUER DIE BEHANDLUNG MIT PROTEINASE K .................................................. 27 1.4.6. LOESUNGEN FUER DIE ISOLIERUNG VON PROTEINEN DER AEUSSEREN MEMBRAN GRAM NEGATIVER BAKTERIEN.............................................................................................. 27 1.4.7. LOESUNGEN FUER DIE BESTIMMUNG DES GESAMTPROTEINGEHALTS NACH LOWRY ............. 27 1.5. NAEHRMEDIEN FUER ARBEITEN M IT B AKTERIEN...............................................................26 1.6. MEDIEN FUER DIE ZELLKULTUR, 28 1.7. REAGENZIENSAETZE (*KITS )...........................................................................................29 1.8. E NZYM E........................................................................................................................29 1.9. A NTIKOERPER...................................................................................................................29 1.10. OLIGONUKLEOTIDE...................................................................................................... 30 1.11. B AKTERIENSTAEM M E...................................................................................................30 1.12. ZELLLINIEN..................................................................................................................31 1.13. PLASMIDE...................................................................................................................32 2. M ETHODEN........................................................................................................................... 33 2.1. ARBEITEN M IT N UKLEINSAEUREN .................................................................................... 33 2.1.1. PLASMIDISOLIERUNG................................................................................................. 33 2.1.2. PCR........................................................................................................................ 33 2.1.3. SPALTUNG VON DNA MIT RESTRIKTIONSENZYMEN ...................................................... 34 2.1.4. AGAROSEGELELEKTROPHORESE................................................................................... 34 2.1.5. FAERBEN VON AGAROSEGELEN..................................................................................... 34 2.1.6. EXTRAKTION VON DNA-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGELEN ........................................... 34 2.1.7. LIGATION..................................................................................................................35 2.1.8. DNA-SEQUENZANALYSE............................................................................................ 35 2.2. ARBEITEN M IT PROTEINEN............................................................................................. 35 2.2.1. ISOLIERUNG VON PROTEINEN DER AEUSSEREN MEMBRAN GRAM-NEGATIVER BAKTERIEN ... 35 2.2.2. NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) ................ 36 2.2.3. WESTERN BLOT UND PROTEINDETEKTION AUF PVDF-MEMBRANEN ................................ 37 2.2.4. BESTIMMUNG DES GESAMTPROTEINGEHALTES NACH LOWRY ........................................ 38 2.2.5. KO-IMMUNPRAEZIPITATION........................................................................................ 38 2.3. ARBEITEN M IT ESCHERICHIA COLI (E. COLI) .................................................................... 39 2.3.1. KRYOKONSERVIERUNG UND STAMMLAGERUNG VON E. COLI ........................................... 39 2.3.2. GEWINNUNG ELEKTROKOMPETENTER ZELLEN VON E. COLI..............................................39 2.3.3. TRANSFORMATION VON E. COLI MITTELS ELEKTROPORATION............................................40 2.3.4. KULTIVIERUNG VON E. COLI......................................................................................... 40 2.3.5. EXPRESSION DER AUTOTRANSPORTER-FUSIONSGENE IN E. COLI ..................................... 41 2.3.6. BEHANDLUNG VON E. COLI-ZELLEN MIT PROTEINASE K .................................................. 41 2.3.7. CROSSLINKING VON PROTEINEN AUF DER OBERFLAECHE GANZER E. COLI-ZELLEN ................... 41 2.3.8. AUFNAHME VON WACHSTUMSKURVEN VON E. COLI ..................................................... 42 2.3.9. BINDUNG VON GEGEN DEN HUMANEN FC-TEIL GERICHTETEN ANTIKOERPERN AN ANTIKOERPERKETTEN-PRAESENTIERENDE E. COLI ............................................................. 42 2.3.10. BINDUNG VON CARCINOEMBRYONALEM ANTIGEN (CEA) AN ANTIKOERPERKETTEN PRAESENTIERENDE E. COLI...........................................................................................43 2.4. ARBEITEN M IT EUKARYOTISCHEN ZELLLINIEN ................................................................. 44 2.4.1. KULTIVIERUNG VON EUKARYOTISCHEN ZELLEN.............................................................. 44 2.4.2. PASSAGIEREN UND AUSSAEEN VON EUKARYOTISCHEN ZELLEN ........................................ 44 2.4.3. KRYOKONSERVIERUNG VON EUKARYOTISCHEN ZELLEN.................................................. 45 2.4.4. IMMUNZYTOCHEMISCHE FAERBUNG VON A431-ZELLEN................................................45 2.4.5. IMMUNZYTOCHEMISCHE FAERBUNG VON SW-403-ZELLEN...........................................46 2.4.6. FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE ANALYSE DES BINDUNGSVERMOEGENS VON SCFV- PRAESENTIERENDEN COLI AN A431-TUMORZELLEN....................................................47 2.4.7. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE UNTERSUCHUNG DES BINDUNGSVERMOEGENS VON ANTI-EGFR-SCFV PRAESENTIERENDEN E. COLI AN A431-ZELLEN .................................... 48 2.4.8. GEWINNUNG EINES CEA-HALTIGEN EXTRAKTES AUS SW-403-ZELLEN............................49 III. EXPERIMENTE UND ERGEBNISSE............................................................................50 1. AUTODISPLAY EINES IGG-ANTIKOERPERS AUF E. COLI..............................................................50 1.1. EXPRESSION DER EINZELNEN KETTEN DES ANTIKOERPERS T84.66 ALS A UTOTRANSPORTER- FUSIONSPROTEINE IN E. COLI......................................................................................... 50 1.2. KOEXPRESSION DER SCHW EREN UND LEICHTEN KETTE VON T84.66 ALS A UTOTRANSPORTER-FUSIONSPROTEINE IN E. COLI .......................................................... 59 1.3. OBERFLAECHENSTAENDIGKEIT DER ANTIKOERPERKETTEN AUF E. COLI .................................. 62 1.4. Q UERVERNETZUNG DER ANTIKOERPERKETTEN AUF E. COLI................................................65 1.5. KO-IMMUNPRAEZIPITATION DER ANTIKOERPERKETTEN .................................................... 68 1.6. HERSTELLUNG EINES CEA-HALTIGEN EXTRAKTES AUS TUM ORZELLEN ............................. 72 1.7. BINDUNG DES ANTIGENS CEA AN DEN AUF E. COLI PRAESENTIERTEN A NTIKOERPER .......... 75 2. TUMORZELL-TARGETING MITTELS AUTODISPLAY.................................................................... 62 2.1. IMMUNZYTOCHEMISCHE FAERBUNG VON A431-ZELLEN................................................83 2.2. BINDUNG VON A NTIKOERPERFRAGM ENT-PRAESENTIERENDEN E. COLI AN T UM ORZELLEN.. 84 IV. DISKUSSION...........................................................................................................88 1. AUTODISPLAY EINES IGG-ANTIKOERPERS AUF E. COLI .............................................................. 88 2. AUTODISPLAY EINES VOLLSTAENDIGEN ANTIKOERPERS: BEDEUTUNG UND PERSPEKTIVEN ....... 93 3. TUMOR TARGETING MITTELS E. COLI....................................................................................... 96 4. FAZIT..................................................................................................................................... 99 V. LITERATURVERZEICHNIS.........................................................................................100 VI. ANHANG............................................................................................................... 113 1. A BKUERZUNGSVERZEICHNIS.................................................................................................. 113 2. SEQUENZEN........................................................................................................................ 115 2.1. UET 84.66 (SCHWERE ANTIKOERPERKETTE VON T84.66) AUS PW W 003 ......................... 115 2.2. L T S 4.66 (LEICHTE ANTIKOERPERKETTE VON 184.66) AUS PW W 004 ............................ 116 3. PLASM IDKARTEN.................................................................................................................. 117 4. PUBLIKATIONEN................................................................................................................... 118 LEBENSLAUF. 121
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