Untersuchungen zur Wirkung von Acorus calamus, Galium verum, Malva sylvestris, Osmunda regalis und Sanicula europaea auf die Zelllinien HLaC79, HLaC79-Tax und HEp2 in vitro:
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Würzburg
Juli 2016
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|---|---|
| adam_text | AUS DER KLINIK UND POLIKLINIK FUER HALS-, NASEN- UND OHRENKRANKHEITEN,
PLASTISCHE UND AESTHETISCHE OPERATIONEN DER UNIVERSITAET WUERZBURG
DIREKTOR: UNIV.-PROF. DR. MED. RUDOLF HAGEN
UNTERSUCHUNGEN ZUR WIRKUNG VON
ACORUS CALAMUS, GALIUM VERUM, MALVA SYLVESTRIS,
OSMUNDA REGALIS UND SANICULA EUROPAEA
AUF DIE ZELLLINIEN
HLAC79, HLAC79-TAX UND HEP2
IN VITRO
INAUGURAL - DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DER DOKTORWUERDE DER
MEDIZINISCHEN FAKULTAET
DER
JULIUS-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET WUERZBURG
VORGELEGT VON
CLEMENS OTTO
AUS BERLIN
WUERZBURG, JULI 2016
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG....................................................................................................
1
1.1
PFLANZEN...................................................................................................2
1.1.1 ACORUS CALAMUS
................................................................................
2
1.1.2 GALIUM VERUM
...................................................................................
4
1.1.3 MALVA
SYLVESTRIS..........................................................................
6
1.1.4 OSMUNDA REGALIS
...............................................................................
7
1.1.5 SANICULA EUROPAEA
............................................................................
8
1.2 DIE
ZELLLINIEN...........................................................................................10
1.2.1
HEP2................................................................................................
10
1.2.2
HLAC79...........................................................................................10
1.2.3 HLAC79-TAX
(RACLITAXEL-RESISTENZ).................................................10
1.3
FRAGESTELLUNG.........................................................................................11
2 MATERIAL UND
METHODEN...............................................................................
12
2.1 VERWENDETE
GERAETE................................................................................12
2.2 LABOR- UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN........................................................13
2.3 ZELLKULTUR- UND
VERSUCHSGEBRAUCH.........................................................
13
2.4 VERARBEITUNG DER PFLANZEN ZU TESTSUBSTANZEN
.....................................
14
2.4.1
URTINKTUREN.......................................................................................14
2.4.2 PULVER-EXTRAKTE
.....
..........................................................................
15
2.4.3 WAESSRIGE
AUSZUEGE..........................................................................
15
2.5 ANSETZEN DES
ZELLKULTURMEDIUMS..........................................................
16
2.6 ZUECHTUNG DER
ZELLEN...............................................................................16
2.7 ERSTELLUNG VON ZELLSUSPENSION UND ZELLPASSAGEN
................................
17
2.8
ZELLZAHLBESTIMMUNG...............................................................................17
2.9 WAHL DER
EXPERIMENTE............................................................................18
2.10 DATENVERARBEITUNG, STATISTISCHE PRUEFMETHODEN, PRAESENTATION
..........
19
3 VERSUCHSAUFBAUTEN
................................
21
3.1 ZELLVIABILITAET IN VITRO
(MTT-ASSAY)..........................................................21
3.1.1 ANLAGE DER KULTURPLATTEN FUER DEN MTT-ASSAY
.................................
21
3.1.2 INKUBATION MIT
TEST-SUBSTANZEN.....................................................21
3.1.3 MTT-ASSAY UND
DATENERHEBUNG.....................................................21
3.1.4 DATENANALYSE
..................................................................................
23
3.2 APOPTOSEMESSUNG MIT DEM ANNEXIN V-KIT (FACS)
..................
24
3.2.1 WIRKMECHANISMUS DES ANNEXIN V-APC-KIT
...................................
24
3.2.2 KULTIVIERUNG UNTER SUBSTANZEINFLUSS
...................................
25
3.2.3 VORBEREITUNG UND MESSUNG VON APOPTOSE
........................
25
3.2.4
AUSWERTUNG...................................................................................
26
3.3 MOTILITAETSHEMMUNG AUF
MATRIGEL............................................................27
3.3.1 ZUECHTUNG DER SPHAEROIDE
....
............................................................
27
3.3.2 BESCHICHTUNG MIT
MATRIGEL...............................................................27
3.3.3 AUSWERTUNG DER MIGRATION
............
.................................................. 28
3.4 SEZERNIERUNG VON MATRIX-METALLOPROTEINASEN
(MMPS).........................30
3.4.1 MECHANISMUS DER
ZYMOGRAPHIE......................................................30
3.4.2 KULTIVIERUNG UNTER SUBSTANZEINFLUSS
...............................................
30
3.4.3 AUFKONZENTRIEREN DER
UEBERSTAENDE...................................................31
3.4.4 ANALYSE DER UEBERSTAENDE AUF MMP DURCH
ZYMOGRAPHIE.................31
4
ERGEBNISSE...................................................................................................33
4.1 ZELLVIABILITAET NACH INKUBATION MIT DEN AGENZIEN
..................
34
4.1.1 ZYTOTOXIZITAET VON ACORUS CALAMUS
..................................................
34
4.1.2 ZYTOTOXIZITAET VON GALIUM VERUM.
4.1.3 ZYTOTOXIZITAET VON MALVA SYLVESTRIS
...................................................
38
4.1.4 ZYTOTOXIZITAET VON OSMUNDA
REGALIS.................................................41
4.1.5 ZYTOTOXIZITAET VON SANICULA
EUROPAEA..............................................42
4.2 APOPTOSERATEN UNTER EINFLUSS DER AGENZIEN
.........................................
44
4.2.1 MANIPULATION DER APOPTOSERATE DURCH ACORUS
CALAMUS..................44
4.2.2 MANIPULATION DER APOPTOSERATE DURCH GATIUM
VERUM.....................45
4.2.3 MANIPULATION DER APOPTOSERATE DURCH MALVA
SYLVESTRIS..................46
4.2.4 MANIPULATION DER APOPTOSERATE DURCH OSMUNDA REGALIS
...............
47
4.2.5 MANIPULATION DER APOPTOSERATE DURCH SANICULA EUROPAEA
............
48
4.3 MOTILITAETSHEMMUNG DURCH DIE AGENZIEN
................................................
49
4.3.1 ZELLMIGRATION NACH INKUBATION MIT
ACORUS CALAMUS
........................
49
4.3.2 ZELLMIGRATION NACH INKUBATION MIT GALIUM VERUM
...........................
50
4.3.3 ZELLMIGRATION NACH INKUBATION MIT MALVA SYLVESTRIS
..........
.............
51
4.3.4 ZELLMIGRATION NACH INKUBATION MIT OSMUNDA REGALIS
....................
52
4.3.5 ZELLMIGRATION NACH INKUBATION MIT SANICULA EUROPAEA
...................
53
4.4 SEZERNIERUNG VON MMP2 UNTER EINFLUSS VON G. VERUM, O. REGALIS UND
S.
EUROPAEA.....................................................................................................54
5 DISKUSSION UND
FAZIT...................................................... 55
5.1 EINFLUSS VON ACORUS CALAMUS AUF PROLIFERATION UND MOTILITAET
.................
56
5.2 EINFLUSS VON GALIUM VERUM AUF PROLIFERATION UND MOTILITAET
....................
58
5.3 EINFLUSS VON MALVA SYLVESTRIS AUF PROLIFERATION UND
MOTILITAET.................60
5.4 EINFLUSS VON OSMUNDA REGALIS AUF PROLIFERATION UND
MOTILITAET................61
5.5 EINFLUSS VON SANICULA EUROPAEA AUF PROLIFERATION UND MOTILITAET
............
62
6 ZUSAMMENFASSUNG
......................................................................................
65
7
ABSTRACT........................................................................................................67
8
ANHANG.........................................................................................................69
8.1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.........................................................................
69
8.2 LITERATURVERZEICHNIS
...............................................................................
70
8.3 GRAPHEN DER EINZELNEN ZELLVIABILITAETSVERSUCHE
.....................................
76
8.3.1 ACORUS CALAMUS
..............................................................................
76
8.3.2 GALIUM VERUM
.................................................................................
80
8.3.3 MALVA SYLVESTRIS
..............................................................................
83
8.3.4 OSMUNDA
REGALIS.............................................................................
68
8.3.5 SANICULA
EUROPAEA..........................................................................
90
8.4
HERSTELLERVERZEICHNIS.............................................................................
94
8.5
DANKSAGUNG...........................................................................................97
8.6
LEBENSLAUF........................................................................................
98
|
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