Einfluss der subendothelialen Matrix auf die Apoptose von humanen aortalen Endothelzellen:
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München
2017
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 01
1.1 ATHEROSKLEROSE 01
1.1.1 BEDEUTUNG UND PATHOPHYSIOLOGIE 01
1.1.2 DAS ENDOTHEL 01
1.1.3 ENDOTHELIALE DYSFUNKTION 03
1.1.4 APOPTOSE ALS SCHLUESSELPROZESS DER ATHEROSKLEROSE 03
1.2 APOPTOSE 04
1.2.1 BEDEUTUNG UND ABLAUF DER APOPTOSE 04
1.2.2 INDUKTION ENDOTHELIALER APOPTOSE 05
1.2.2.1 UEBERSICHT 05
1.2.2.2 TUMOR-NEKROSE-FAKTOR A 05
1.2.2.3 CYCLOHEXIMID 06
1.2.3 APOPTOTISCHE SIGNALKASKADE 06
1.2.3.1 UEBERBLICK 06
1.2.3.1.1 EXTRINSISCHER SIGNALWEG 07
1.2.3.1.2 INTRINSISCHER SIGNALWEG 07
1.2.3.2 PROAPOPTOTISCHE SIGNALWEGE 09
1.2.3.2.1 P38 MAP-KINASE 09
1.2.3.2.2 BAX 10
1.2.3.2.3 T UMORSUPPRESSOR P53 10
1.2.3.3 ANTIAPOPTOTISCHE SIGNALWEGE 11
1.2.3.3.1 AKT (PROTEINKINASE B) 11
1.2.3.3.2 ERK 11
1.2.3.3.3 C-FLIP 12
1.2.3.3.4 BCL-XL 13
1.2.3.4 ENDSTRECKE DER APOPTOSE 13
1.2.3.4.1 CASPASE 9 14
1.2.3.4.2 CASPASE 3 14
1.2.3.4.3 ALTERATIONEN DER PLASMAMEMBRAN 15
1.3 BASALMEMBRAN UND EXTRAZELLULAERE MATRIX 15
1.3.1 EINFLUSS DER SUBENDOTHELIALEN MATRIX AUF DAS GEFAESSENDOTHEL 15
1.3.2 STRUKTUR UND AUFBAU DER SUBENDOTHELIALEN BASALMEMBRAN 16
1.3.2.1 ALLGEMEIN 16
1.3.2.2 KOLLEGEN TYP IV 17
1.3.2.3 LAMININ 18
1.3.2.4 FIBRONECTIN 18
1.3.2.5 FIBRINOGEN 19
1.3.2.6 KOLLEGEN TYP I 19
1.3.3 INTEGRINE: SCHNITTSTELLEN ZWISCHEN ENDOTHEL UND BASALMEMBRAN 20
1.3.3.1 FOCAL ADHESION KINASE (FAK) 20
1.3.3.2 RECEPTOR-INTERACTING PROTEIN (RIF) 21
1.3.4 EINFLUSS EINER DREIDIMENSIONALEN ZELLKULTUR AUF DEN ENDOTHELIALEN
22
PHAENOTYP
1.4 FRAGESTELLUNG 24
2. MATERIAL UND METHODEN
25
2.1 GERAETE, CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 25
2.1.1 GERAETE 25
2.1.2 CHEMIKALIEN 26
2.1.3 REAGENZIENSAETZE 26
2.1.4 PUFFER, LOESUNGEN, MEDIEN UND SEREN 27
2.1.5 MATERIALIEN FUER DIE ZELLKULTUR 27
2.1.6 WESTERN BLOT MATERIALIEN 28
2.1.7 ZYTOKINE 29
2.1.8 ANTIKOERPER 29
2.1.9 PRIMER FUER DIE PCR 30
2.2 ZELLULAER-IMMUNOLOGISCHE METHODEN 30
2.2.1 ZELLKULTUREN 30
2.2.2 BESCHICHTUNG DER KULTURPLATTEN 31
2.2.3 INDUKTION DER APOPTOSE DURCH TNF-A UND CYCLOHEXIMID 32
2.2.4 BESTIMMUNG DER INDIVIDUELLEN ENZYMKINETIK 33
2.2.5 QUANTIFIZIERUNG DER PROTEOLYTISCHEN CASPASE-AKTIVITAET UND 34
DER LAKTAT-DEHYDROGENASE-AKTIVITAET MITTELS ELISA-TEST
(ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY)
2.2.6 DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS-ANALYSE) 35
2.2.7 IMMUNOPRAEZIPITATION 36
2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 37
2.3.1 PROTEINMENGENBESTIMMUNG MITTELS BRADFORD-ASSAY 37
2.3.2 WESTERN BLOT 38
2.3.3 EXTRAKTION DER RNA AUS HUMANEN AORTALEN ENDOTHELZELLEN 40
2.3.4 REVERSE TRANSKRIPTION VON RNA IN CDNA 40
2.3.5 POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 41
2.4 STATISTISCHE ANALYSE 42
3. ERGEBNISSE 44
3.1 MODULATION DER ENDOTHELIALEN APOPTOSE IN ABHAENGIGKEIT VON DER 44
STRUKTURELLEN KOMPOSITION UND DER RAEUMLICHEN STRUKTUR DER SUB
ENDOTHELIALEN MATRIX
3.1.1 BEEINFLUSSUNG DES ENDOTHELIALEN ANNEXIN V-STAININGS DURCH 44
STRUKTURELLE KOMPOSITION UND RAEUMLICHE STRUKTUR DER KULTURUMGEBUNG
3.1.2 EINFLUSS DER KULTURBEDINGUNG AUF DIE LDH-AKTIVITAET 45
3.1.3 VERAENDERUNG DER ENYZMAKTIVITAET VON CAPSASE 3 UND 9 47
3.2 ANALYSE VON UNTERSCHIEDEN IN DEN GENUTZTEN SIGNALTRANSDUKTIONS- 50
WEGEN IN ABHAENGIGKEIT VON STRUKTURELLER UND RAEUMLICHER KOMPOSI
TION DER ZELLKULTURUMGEBUNG
3.2.1 VERAENDERUNG DER BASALEXPRESSION VON AKT (PKB) UND DER 50
PHOSPHORYLIERUNG VON AKT AN 8473
3.2.2 VERAENDERUNG DER BASALEXPRESSION VON P38-MAPK UND DER 53
PHOSPHORYLIERUNG VON P38-MAPK AN TI 80 UND Y182
3.2.3 VERAENDERUNG DER BASALEXPRESSION VON PAK UND DER AKTIVIERUNG 55
VON PAK UEBER PHOSPHORYLIERUNG AN Y397
3.2.4 VERAENDERUNG DER BASALEXPRESSION VON ERK-1/2 UND DER PHOS- 56
PHORYLIERUNG AN T202/Y204 UND T185/Y187
3.2.5 VERAENDERUNG DER BASALEXPRESSION DES TUMORSUPPRESSORS P53 58
3.2.6 VERAENDERUNG DER BASALEXPRESSION VON BAX 59
3.2.7 VERAENDERUNG DER BASALEXPRESSION VON BCL-2 60
3.2.8 BEEINFLUSSUNG DER ASSOZIATION VON PAK UND RIP 61
3.3 EINFLUSS DER ZELLKULTURKONDITION AUF DIE EXPRESSION VON C-FLIP 62
4. DISKUSSION
65
4.1 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE 65
4.2 BEURTEILUNG DES IN-VITRO-MODELLS 66
4.3 INTERPRETATION DER ERGEBNISSE UNTER BERUECKSICHTIGUNG DER LITERATUR
68
4.3.1 INHIBIERUNG DER ENDOTHELIALEN APOPTOSE DURCH ZELLKULTUR AUF FIBRO-
68
NECTIN
4.3.2 ANTIAPOPTOTISCHER EFFEKT VON KOLLEGEN TYP IV AUF AORTALE 71
ENDOTHELZELLEN
4.3.3 KOLLEGEN TYP I ALS INDIFFERENTE MATRIXKOMPONENTE FUER DIE 73
ENDOTHELZELLAPOPTOSE
4.3.4 PROAPOPTOTISCHE WIRKUNG DER ECM-KOMPONENTE FIBRINOGEN 74
4.3.5 ANTIAPOPTOTISCHER EFFEKT DER LAMININ-BESCHICHTUNG 75
4.3.6 EINFLUSS DER RAEUMLICHEN KULTURANORDNUNG AUF DIE
ENDOTHELZELLAPOPTOSE 77
4.4 AUSBLICK 80
5. ZUSAMMENFASSUNG 82
6. LITERATURVERZEICHNIS
85
7. VERZEICHNIS DER ABKUERZUNGEN UND AKRONYME
93
8. DANKSAGUNG
95
9. VEROEFFENTLICHUNGEN
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