Einfluss der NO-sensitiven Guanylyl-Cyclase auf den cGMP/cAMP-Crosstalk und die Steifigkeit der murinen Aorta: = Influence of NO-sensitive guanylyl-cyclase on cGMP/cAMP crosstalk and the stiffness of the murine aorta
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Würzburg
2016
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| adam_text | EINFLUSS DER NO-SENSITIVEN GUANYLYL-CYCLASE AUF DEN
CGMP/CAMP-CROSSTALK UND DIE STEIFIGKEIT
DER MURINEN AORTA
DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES
NATURWISSENSCHAFTLICHEN DOKTORGRADES
DER JULIUS-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET WUERZBURG
VORGELEGT VON
SARAH DUENNES
AUS MAINZ
WUERZBURG 2016
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG...............................................................................................................................
1
1.1
NO/CGMP-SIGNALKASKADE...........................................................................................1
1.2
NO-SYNTHESE..................................................................................................................1
1.3 NO-SENSITIVE
GUANYLYL-CYCLASE..................................................................................4
1.4 EFFEKTORPROTEINE VON CG M P
.........................................................................................
5
1.4.1 CGMP-ABHAENGIGE
PHOSPHODIESTERASEN.............................................................5
1.4.1.1 PHOSPHODIESTERASE 3
...................................................................................6
1.4.2 CGMP-ABHAENGIGE
LONENKANAELE..........................................................................
7
1.5 EFFEKTORPROTEINE VON
CAMP..........................................................................................
7
1.6 NO/CGMP-SIGNALKASKADE IM VASKULAEREN SYSTEM
...................................................
8
1.7 DAS
BLUTGEFAESSSYSTEM.................................................................................................
11
1.7.1 FUNKTION UND AUFBAU DER
BLUTGEFAESSE..............................................................12
1.7.2
AORTA.....................................................................................................................15
1.8 EXTRAZELLULAERE
MATRIX....................................................................................................15
1.8.1
KOLLAGEN...............................................................................................................
16
1.8.2
ELASTIN...................................................................................................................17
1.8.3 VASKULAERES REMODELLING UND PULSWELLENGESCHWINDIGKEIT
..........................
17
1.9 TRANSGENE MAUS-MODELLE
.........................................................................................
18
1.9.1 GLOBALER KNOCK-OUT DER
NO-GC............................................/.........................19
1.9.2 GLATTMUSKELSPEZIFISCHER KNOCK-OUT DER NO-GC
......
......................................
20
2 ZIELSETZUNG........................ 21
3 MATERIAL UND
METHODEN......................................................................................................
22
3.1
MATERIAL........................................................................................................................22
3.1.1
CHEMIKALIEN........................................................................................................
22
3.1.2 ANTIKOERPER FUER WESTERN
BLOT..............................................................................23
3.1.3 ANTIKOERPER FUER IMMUNHISTOCHEMIE
...................................................................
23
3.1.4 PUFFER UND
LOESUNGEN.........................................................................................
23
3.1.5
GERAETE..................................................................................................................
26
3.2
METHODEN.....................................................................................................................27
3.2.1 TIERE UND
PRAEPARATION........................................................................................
27
3.2.1.1 HALTUNG UND
ZUCHT.......................................................................................
27
3.2.1.2 T
AMOXIFEN-LNJEKTIONEN................................................................................
27
3.2.1.3 GENOTYPISIERUNG
..................................
27
3.2.1.4
ORGANENTNAHME...........................................................................................28
3.2.2 WESTERN
BLOT.......................................................................................................28
3.2.2.1 HERSTELLUNG DER WESTERN
BLOT-PROBEN......................................................28
3.2.2.2 BESTIMMUNG DER
PROTEINKONZENTRATION.....................................................28
3 .2 .2 3
GELELEKTROPHORESE.......................................................................................29
3.2.2.4
BLOTTING..........................................................................................................
29
3.2.3 MESSUNG VON DURCHMESSER UND
WANDDICKE................................................30
3.2.4
AKTIVITAETSMESSUNGEN.........................................................................................
30
3.2.4.1
PHOSPHODIESTERASE-ASSAY........................................................................30
3 .2.42
RADIOIMMUNOASSAY.....................................................................................32
3.2.5
ORGANBAD.............................................................................................................34
3.2.5.1 TEST ZUR RELAXATION DER G
EFAESSE...............................................................34
3 .2 .5 2
SPANNUNGS-DEHNUNGS-TEST......................................................................35
3.2.6 MESSUNG DER PULSWELLENGESCHWINDIGKEIT MITTELS M
RT................................36
3.2.6.1 TIERPRAEPARATION UND
MESSUNG..................................................................
37
3 .2.62
AUSWERTUNG..................................................................................................
39
3.2.7 BIOCHEMISCHE UNTERSUCHUNGEN DER AORTA
....................................................
39
3.2.7.1
ELASTIN-ASSAY...............................................................................................
39
3.2 7 .2
KOLLAGEN-ASSAY..........................................................................................
40
3.2.8
IMMUNHISTOCHEMIE............................................................................................
41
3.2.9
HISTOLOGIE............................................................................................................
41
3.2.9.1
HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG......................................................................41
3.2.9.2 PIKROSIRIUSROT-FAERBUNG
................................................................................
42
3.2.10
STATISTIK......................................................................................
42
4
ERGEBNISSE.............................................................................................................
;
...........
43
4.1 AUSSCHNITT DER
NO-GC...............................................................................................43
4.1.1 IMMUNHISTOCHEMIE DER GLATTEN MUSKULATUR
...................................................
43
4.1.2 NO-INDUZIERTE RELAXATION DER G EFAESSE
...........................................................
46
4.2
CAMP/CGMP-CROSSTALK.............................................................................................46
4.2.1
CAMP-SIGNALKASKADE........................................................................................49
4.2.1.1 MESSUNG DES CAMP-SPIEGELS MITTELS RADIOIMMUNOASSAY
.................
49
4.2.1.2 EFFEKT VON FORSKOLIN AUF DIE RELAXATION DER AORTA
.................................
49
4.2.2 PDE3-VERMITTELTER CAMP/CGMP-CROSSTALK
....................................................
49
4.2.2.1 PDE3-EXPRESSION IN DER GLATTEN GEFAESSMUSKULATUR
...............................
53
4.2.2 2 ROLLE DER PDE3A BEI DER RELAXATION DER AORTA
......................................
55
4.2.2 3 EFFEKT VON ODQ AUF DIE MILRINON-INDUZIERTE RELAXATION
........................
55
4.2.2 4 ABNAHME DER
PDE3A-EXPRESSION............................................................58
4.2.2.5
PDE3A-AKTIVITAET...........................................................................................61
4.3 EINFLUSS DER NO-GC AUF DIE STEIFIGKEIT DER
AORTA.................................................63
4.3.1 MESSUNG DES SPEZIFISCHEN HERZGEWICHTES
4.3.2 AORTENSTEIFIGKEIT.............................................
4.3.2.1 SPANNUNGS-DEHNUNGS-TEST
................
4 .3 .2 2 PULSWELLENGESCHWINDIGKEIT
4.3.3 MESSUNG DER AORTEN-GEOMETRIE
...........................................
4.3.4 MESSUNG DER ECM-PROTEINE
..................................................
4.3.5 STRUKTUR DER
AORTA.....................................................................
5 DISKUSSION
.................................................................................................
5.1 DELETION DER NO-GC IN DEN GEFAESSEN
...........................................
5.2 EINFLUSS DER NO-GC-DELETION AUF DEN CAMP/CGMP-CROSSTALK.
5.3 BEDEUTUNG DER NO-GC FUER DIE STEIFIGKEIT DER AORTA
..................
6
ZUSAMMENFASSUNG...................................................................................
7
SUMMARY....................................................................................................
8
LITERATURVERZEICHNIS..................................................................................
9 EIGENE
PUBLIKATIONEN...............................................................................
10 DANKSAGUNG
...............................
..........................................................
.63
65
65
68
..68
..71
..73
..78
..78
..79
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| spelling | Dünnes, Sarah ca. 21. Jh. Verfasser (DE-588)112382956X aut Einfluss der NO-sensitiven Guanylyl-Cyclase auf den cGMP/cAMP-Crosstalk und die Steifigkeit der murinen Aorta = Influence of NO-sensitive guanylyl-cyclase on cGMP/cAMP crosstalk and the stiffness of the murine aorta vorgelegt von Sarah Dünnes aus Mainz ; Gutachter: Prof. Dr. Andreas Friebe, Prof. Dr. Erhard Wischmeyer Influence of NO-sensitive guanylyl-cyclase on cGMP/cAMP crosstalk and the stiffness of the murine aorta Würzburg 2016 104 Blätter Illustrationen, Diagramme txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Dissertation Julius-Maximilians-Universität Würzburg 2016 Langzeitarchivierung gewährleistet, LZA Zusammenfassung in deutscher und englischer Sprache Cyclo-GMP (DE-588)4318174-0 gnd rswk-swf Guanylatcyclase (DE-588)4158499-5 gnd rswk-swf Cyclo-AMP (DE-588)4148493-9 gnd rswk-swf Maus (DE-588)4169148-9 gnd rswk-swf Knockout Molekulargenetik (DE-588)4671699-3 gnd rswk-swf Aorta (DE-588)4200089-0 gnd rswk-swf Guanylyl-Cyclase (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Maus (DE-588)4169148-9 s Aorta (DE-588)4200089-0 s Knockout Molekulargenetik (DE-588)4671699-3 s Guanylatcyclase (DE-588)4158499-5 s Cyclo-GMP (DE-588)4318174-0 s Cyclo-AMP (DE-588)4148493-9 s DE-604 Friebe, Andreas ca. 21. Jh. (DE-588)112383007X dgs Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:20-opus-141479 https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:20-opus-141479 Resolving-System kostenfrei Volltext http://d-nb.info/1121508316/34 Langzeitarchivierung Nationalbibliothek DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=029414824&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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