Die Rolle des plättchenreichen Plasmas (PRP) in einem in vitro Modell für Arthritis:
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Aachen
[2015]
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INHALTSVERZEICHNIS.............................................................................ILL
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS...................................................................VI
!EINLEITUNG.........................................................................................1
1.1. RHEUMATOIDE
ARTHRITIS.................................................................................1
1.2.
GELENKAUFBAU............................................................................................2
191 ARTHRITISCHE
GELENKVERAENDERUNGEN.........................................
1 YY2.2YY AETIOLOGIE UND PATHOGENESE DER RHEUMATOIDEN ARTHRITIS
YY..YYYY....YYYY.4
1.3. THERAPYYE DER RHEUMATOIDEN
ARTHRITIS...................................................6
1_4. THROMBOZYTEN
(BLUTPLAETTCHEN)..................................................................7
14.1. AKTIVIERUNG DER THROMBOZYTEN
..............................................................
8
1.4.2. EINFLUESSE VON THROMBOZYTEN AUF
GEWEBEREGENERATION..YY...YY9
1.4.3.
WACHSTUMSFAKTOREN..............................................................................IO
1.5. PLAETTCHENREICHES PLASMA (PLATELET RICH PLASMA,
PRP)YYYYYYYYYY.YYYYYYYY11
1.6. AKTUELLE FORSCHUNGSLAGE
.........................................................................
12
2YY ZIELSETZUNG DIESER A
R
B
E
I
T
1
5
3 MATERIAL UND METHODEN
................................................................
16
3.1.MATERIAL........................................................................................................16
3.1.1. VERBRAUCHSMATERIALIEN
.........................................................................
16
3.1.2.
GERAETE....................................................................................................17
3.1.3. FERTIGE
KITS.............................................................................................18
3.1.4.
CHEMIKALIEN..........................................................................................19
3.1.5. ZELLKUITURMEDIEN UND
ZUSAETZEYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY...YYYYYYYYYYYYYYYYYY20
3.1.6. LOESUNGEN UND
PUFFER............................................................................21
31.7.
PRIMER....................................................................................................21
3.1.8.
ANTIKOERPER..............................................................................................22
3.2.
METHODEN...................................................................................................23
3.2.1. VOTUM DER ETHIKKOMMISSION
................................................................
23
3.2.2. PRAEPARAFION VON PLATELET-RELEASED GROWTH
FACTOR(PRGF)...............23
3.2.3.
ZELLKULTUR...............................................................................................24
3.2.4. AUFTAUEN YY
YYYY
7YY||YYYY 9YY
3,2.5 KULTIVIERUNG VON ZELLEN UND ZELLTRENNUNG
...........................................
25
3.2.6. BESTIMMUNG DER
ZELLANZAHL...............................................................25
3.2.7 BESTIMMUNG DES MANGELMEDLUMSFUERDIE ZELLLINIEN YY4YYYY UND HSE 26
3.2.8
CELLTITER-BLUEZE Y AB [AE{-ASSAY......................................................27
3.2.9. STIMULATION DERZEHLINIEN YY4YYYY UND HSE MIT
3.2.10. CYQUANT ZELLPROLIFERATION-YASSAY .....28
3.2.11. ETABLJERUNG EINES IN VITRO
RHEUMA-MODELLS......................................29
3.2.12. BEHANDLUNG DER
YY
MIT TNFA VORSTLMULIERTEN
YY
ZELLEN MIT PRGF ..YYYY30
3.3. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN
........................................................
31
33.1YY PROTEINBESTLMMUNG MITTELS BJCINCHONINSAEURE (YY
YY
YY)........31
3.3.2 ENZYME^LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) 31
3.3.3 RNA
ISOLIERUNG.....................................................................................32
3.3.4. CDNA-SYNTHESE (REVERSE TRANSKRIPTION)
...........................................
33
3.3.5. QUANTITATIVE REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION (QRT-PCR) YYYY33
3.4. DIE DARSTELLUNG UND DIE STATISTISCHE AUSWERTUNG DER DATEN __ _.34
4.
YYYY
^
YY
YYYYYYYYYYYYYY.YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
4.1 BESTIMMUNG DES MANGELMEDIUMS FUER DIE ZELLLINIEN YY4YYYY UND HSE 35
4.2. STIMULATION DER ZELLLINIEN YY4YYYY UND HSE MIT PRGF 37
4.2.1. WIRKUNG VON PRGF AUF DIE VIABILITAT DER SYNOVYYAJ
YY
ZYTEN_._..__.._.____._37
4.2.2. WIRKUNG VON PRGF AUF DIE PROLIFERATION DER SYNOVIALOZYTEN
YY.YY....41
4.3. ETABLIERUNG EINES IN VITRO
RHEUMA-MODELLS.........................................44
4.3.1. QUANTIFIZIERUNG DER ENDOGENEN ZYTOKINE UNTER TNFA-BEHANDLUNG
MITTELS
ELISA........................................................................................44
4.3.2. QUANTIFIZIERUNG DER TNFA- UND YYL6-MRNA EXPRESSJON
YY._....__...46
4_4_BEHANDLUNG DER, MIT TNFA VORSTIMULIERTEN, ZELLEN MIT PRGF
..........47
4.4.1. QUANTIFIZIERUNG DER FREIGESETZTEN ZYTOKINE UND WACHSTUMSFAKTOREN
NACH PRGF-BEHANDLUNG MITTELS ELISA
..............................................
47
4.4.2. QUANTIFIZIERUNG DER TNFAYY
YY
IL6- UND ILISS-MRNA EXPRESSION MITTELS
QRT-PCR
..............................................................................................
51
5. DISKUSSION
....................................................................................
53
5_1YY BESTIMMUNG DES MANGELMEDIUMS FUER DIE ZELLLINIEN YY4YYYY UND HSE53
5.2.STIMULATYYON DER ZELLLINIEN YY4YYYY UND HSE MIT PLATELET-RELEASED
GROWTH FACTOR
(PRGF)...............................................................................53
5.3.IN VITRO
RHEUMA-MODELL.............................................................................54
5.4YY WIRKUNG VON PRGF AUF DIE
YY
MIT TNFA VORSTIMUHERTEN
YY
ZELLEN.YYYYYYYYYY56
6YY
ZUSAMMENFASSUNG.......................................................................59
6.!.SUMMARY.....................................................................................................60
7. LITERATURVERZEICHNIS
.....................................................................
62
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
...................................................................
70
TABELLENVERZEICHNIS7
2
DANKSAGUNG
......................................................................................
73
ERKLAERUNG ZUR DATENAUFBEWAHRUNG7
5
YYDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG...............................................................76
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