Einflüsse von Hypoxie auf humane Pulpazellen:
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Regensburg
2016
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| adam_text | AUS DEM L E I T U H L
FUER MEFERORTHOPADIE
PROF. DR DR. P. PROFF
FAKULTAET FUER MEDIZIN
DER UNIVERSITAET REGENSBURG
EINFLUESSE VON H Y P O I A U F HUMANE PULPAZELLEN
INAUGURAL - DISSERTATION
ZURERLANGVMG DES DOKTORGRADES
DER ZAHNMEDIZIN
DER
FAKULTAET FOR MEDIZIN
DER UNIVERSITAET REGENSBURG
VORGELEGT VON
DR. MED. MICHAEL DANIEL PFUETZE
2016
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG UND ZIELSTELLUNG 1
2 LITERATURUEBERSICHT 3
2.1 ORALE ANATOMIE UND PHYSIOLOGIE DER ZAHNPULPA 3
2.2 KIEFERORTHOPAEDISCHE KRAEFTE 5
2.3 KIEFERORTHOPAEDISCHE B EW EGUNGSEN 6
2.4 ZYTOLOGISCH-HISTOLOGISCHE A USW IRBGEN 6
2.5 WURZELRESORPTIONEN 6
2.6 KIEFERORTHOPAEDISCHE ZAHNBEWEGUNG UND AUSWIRKUNGEN AUF DEN PULPALEN
BLUTFLUSS 7
2.7 HISTOLOGISCHE VERAENDERUNGEN DER ZAHNPULPA DURCH KJEFERORTHOPAEDISCHE
THERAPIE 8
2.8 PULPALE ISCHAEMIE UND HYPOXIE 11
2.9 BIOLOGISCHE EFFEKTE IN DER HYPOXISCHEN ZAHNPULPA 13
3 MATERIAL UND METHODE 16
3.1 CHEMIKALIEN 16
3.1.1 PUFFERREZEPTUR FIIR PROTEINEXTR*TION UND -ISOLATION 17
31.2 REZEPTUR IUR TRENN UND SAMMELGELE (WESTEMBLOT) 18
3.1.3 REZEPTUR FIIR TRANSFER- UND ELEKTRODENPUFFER (WESTEMBLOT) 19
3.2 GERAETE/VERBRAUCHSARTIKEL 19
3.3 STERILISATION VON LOSUNGEN UND GERAETEN 21
3.4 ZELLKULTUR 21
3.4.1 HERKUNFT DER ZELLLINIEN 21
3.4.2 GEWINNEN DER ZELLEN 22
3.4.3 MEDIEN UND KULTIVIERUNG
23
3.4.4 ZELLPASSAGIERUNG UND ZELLEMTE 23
3.4.5 ZELLZAEHLUNG 24
3.4.6 ZELLKULTIVIERUNG UNTER HYPOXIE 24
3.5 WST-LTEST 25
3.6LDH
*
TEST 25
3.7 NACHWEIS DER ROS-BILDUNG MITTELS DURCHFLUSSZYTOME*IE 26
3.7.1 DURCHFUEHRUNG DER FACS-ANALYSE 27
3.8 REVERSE-TRANSKRIPTIONS-UND QUANTITATIVE PCR 28
3.8.1 AUFREINIGUNG VON G E SA M T-IA 29
3.8.2 R EERSE TRANSKRIPTION VON RNA IN CDNA 30
3.8.3 DURCHFUHREN DER QPCR 31
3.8.4 HERSTELLEN DES AGAROSEGELS 32
3.9 ELISA.TEST 32
3.10WESTEM
*
BLOT 32
3.10.1 PROTEINEXTRAKTION UND -AUFTRENNUNG 33
3.10.2 BRADFORD-TEST 33
3.10.3 NACHWEIS VON ZELLKEMPROTEINEN MITTELS WESTERN-BLOT 34
3.11 ANMERKUNGEN ZU STATISTIK UND VERSUCHSKONFROLLEN 36
3.12 ETHIKRICHTLINIEN 36
4 ERGEBNISSE 37
4.1 CHARAKTERISIERUNG VON PULPAFIBROBLASTEN 37
4.2 NACHWEIS HYPOXISCHER VERSUCHSBEDINGUNGEN
37
4.3 EINFLUSS VON HYPOXIE AUF ZELLVIABILITAET UND ZYTOTOXIZITAET 39
4.4 GENEXPRESSIONSUNTERSUCHUNG PRO-INFLAMMATORISCHER UND
ANGIOGENETISCHER GENE 40
4.5 ZYTOKINANALYTIK IM ZELUTUMBERSTAND 42
4.6 NACHWEIS VON NADPH-OXIDASE-4 IN PULPAFIBROBLASTEN 43
4.7 NACHWEIS VON OXIDATIVEM STRESS IN HYPOXISCHEN PULPAFIBROBLASTEN 45
4.8 WIRKUNG VON OXIDATIVEM STRESS AUF DIE AKTIVIERUNG VOM NF-KB-PROTEIN
P65 (RELA) 46
4.9 W I R B G VON OXIDATIVEM STRESS (100 ** *
2
*
2
) AUF DIE EXPRESSION
PRO-INFLAMMATORISCHER UND ANGIOGENETISCHER GENE IN PULPAFIBROBLASTEN 46
*
DISKUSSION 48
5.1 METHODENDISKUSSION 48
5.2 ERGEBNISDISKUSSION 50
6 ZUSAMMENFASSUNG 55
7 LITERATURVERZEICHNIS 57
ANHANG 70
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 70
TABELLENVERZEICHNIS 72
SELBSTSLDIGKEITSERKLARUNG 73
ERWAE^NGUEBERPROMOTIONSVE^^^ 73
LEBENSLAUF 74
DANKSAGUNG 77
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