Regulation Tumornekrosefaktor (TNF) Rezeptor assoziierter Signalwege durch das Adapterprotein TRAF1: = Regulation of tumor necrosis receptor (TNF) associated pathways through the adapter protein TRAF1
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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Würzburg
2015
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| adam_text | REGULATION TUMORNEKROSEFAKTOR (TNF)
REZEPTOR ASSOZIIERTER SIGNALWEGE DURCH
DAS ADAPTERPROTEIN TRAFI
REGULATION OF TUMOR NECROSIS RECEPTOR (TNF) ASSOCIATED
PATHWAYS THROUGH THE ADAPTER PROTEIN TRAFI
DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES
NATURWISSENSCHAFTLICHEN DOKTORGRADES
DER BAYERISCHEN JULIUS-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET WUERZBURG
VORGELEGT VON
JOSE ANTONIO CARMONA ARANA AUS HUERCAL-OVERA
WUESZBU
*
G2015
*NHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG
_1
1.1 DIE TNF-SUPERFAMILIE
______________________________
1
1.1 *1 LIGANDEN DER TNF-SUPERFAMILIE _ _ _ _ _ _ 1
1.1.2 REZEPTOREN DER TNF-SUPERF* 3
1.1.3 NFKB-AKTIVIERUNG IN RAHMEN - 7
1.2 TN F
__________________________________
11
13 TWEAK/FN14
_______________________________________
11
1-4 CD40*CD40___________________________________ 13
1.4.1 CD40LIGAND/CD154
___________________________________
*
3
1.4.2 DER CD40 REZEPTOR
_______________________________
13
IS TRAF MOLEKUELE
__________________________________
16
1.6 ZIELSETZUNG_____________________
17
2 MATERIALIEN _ _ _ _ _ _ _ _ 18
2.1 CHEMIKALIEN, REAGENZIEN, ZELLKULTURMEDIEN _ _ _ _ _ _ 18
2.2 ENZYME
_________________
19
2.3
ANTIKOERPER_________________________
9
*
2.4
LOESUNGEN UND PUFFER _ _ _ _ _ _
2
Q
2.5 K ITS
____________________________________________
21
2.6 APPARATUREN UND VERBRAUCHSTMATERIAL _ _ _ _ _ 22
2.7 ZELLLINIEN________________________ 23
2.7.1 EUKARYOTISCHE ZELLEN _ _ _ _ _ _ _ _ _ 23
2.7.2 MESENCHYMALE HUMANE STAMMZELLEN 23
MESENCHYMALE HUMANE STAMMELLEN WURDEN AUS DEM STOCK DES LEHRSTUHLS FUER
TISSUE
ENGINEERING & REGENERATIVE MEDIZIN DES UNIVERSITAETSKLINIKUMS WUERZBURG
ERHALTEN. _ 23
2.7.3 PROKARYOTISCHE ZELLEN _ _ _ _ _ _ _ 23
2.8 REKOMBINANT FUSIONSPROTEINE UND PLASMIDE 24
3 METHODEN 25
3.1 KULTIVIERUNG EUKARYOTISCHER ZELLEN _ _ _ _ 25
3.2 KONSERVIERUNG UND REVITALISIERUNG VON EUKARYOTISCHEN ZELLEN 25
3.3 PRODUKTION DER REKOMBINANTEN PROTEINE
*
_ _ _ _ 26
3.4 HERSTELLUNG DER STABIL TRANSFIZIERTE TRAF1_ZELLEN 26
3.5 HERSTELLUNG VON GESAMTZELLLYSATEN NACH STIMULATION 26
3.6 GLEICHGEWICHTSBINDUNGSSTUDIEN 27
3.7 STATISTIK, BERECHNUNGEN UND DARSTELLUNG DER DATEN
________________
28
3.8 ELISA ANALYSE
___________________________________________
28
3.9 ELISA ANALYSE IN TRANSIENT TRANSFIZIERTEN ZELLEN
___________________
29
3.10 DURCHFLUSSZYTOMETRIE______________________________
29
3.11 WESTERN BLOT*
___________________________________
30
3.11 *1 SDS-**** (SODIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE) *
30
3.11.2 ELEKTROTRANSFER VON PROTEINEN AUF NITROZELLULOSEMEMBRAN, 30
3.11.3 IMMUNDETEKTION
_________________________
31
3.12 POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR)
______________________
31
4 ERGEBNISSE________________________________ 32
4.1 TWEAK INDUZIERT TRAFI STAERKER ALS TNF
_________________________
32
4-2 DIE INDUKTION VON TRAFI DURCH LOESLICHES TWEAK KANN ABHAENGIG ODER
UNABHAENGIG VOM KLASSISCHEN NFS-SIGNALWEG ERFOLGEN
__________________
38
4.3 TWEAK PRIMING UND EKTOPISCHE TRAFI-EXPRESSION INHIBIEREN DIE CD40-
INDUZIERTE SIQNALTRANSDUKTION
____________________________________
43
4.3.1 TWEAK VORSTIMULATION INHIBIERT DIE CD40-INDUZIERTEN AKTIVIERUNG
DES
KLASSISCHES NFKB-SIGNALWEGS _ 43
4.3.2 I E A K INHIBIERT DIE CD40-VERMITTELTE AKTIVIERUNG DER MAPKS _ _ _
_ _ _ _ _ _ 47
4.3.3 D E EKTOPISCHE EXPRESSION VON TRAFI HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE
INTERAKTION VON
CD40 MIT SEINEM LIGANDEN_______________________________ 49
4 3 .4 TRAFI UEBEREXPRESSION VERHINDERT CD40L-ASSOZ*ERTE INDUKTION VON
NF
K
B* 51
4.3.5 VERMINDERTE IL6 UND IL8 SYNTHESE IN TRAFI.STABILTRANSFEKTANTEN _ _
_ _ _ 52
5 DISKUSSION_______________________________ 54
5.1 SOWOHL DER KLASSISCHE
*
ALS AUCH DER ALTERNATIVE NFKB-SIGNALWEGE
SPIELEN EINE ROLLE BE* DER TWEAK-INDUZIERTE TRAFI-EXPRESSION 54
5.2 ^EAK-STIMULATION UND EKTOPISCH INHIBIEREN
CD40-ASOZIIERTE SIGNALWEGE
_______________________
57
6 ZUSAMMENFASSUNG
__________________
61
7 ABSTRACT
____________________________________
63
8 LITERATURVERZEICHNIS 65
9 ANHANG
_________________________________
77
9.1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS________________________________________ 77
9.2 PUBLIKATIONEN 83
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