Das non-neuronale cholinerge System des Kolons der Ratte:
Gespeichert in:
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|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen
VVB Laufersweiler Verlag
2014
|
| Ausgabe: | 1. Auflage |
| Schriftenreihe: | Edition Scientifique
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| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | IV, 171 Seiten Illustrationen, Diagramme |
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 CHOLINERGE SYSTEME 1
1.1.1 ACETYLCHOLIN: MEHR ALS EIN NEUROTRANSMITTER 1
1.1.2 NON-NEURONALES CHOLINERGES SYSTEM 1
1.2 ACETYLCHOLIN: SYNTHESE, FREISETZUNG, ABBAU UND RECYCLING IN
NEURONALEN UND NON-NEURONALEN ZELLEN 3
1.2.1 SYNTHESE VON ACETYLCHOLIN 3
1.2.2 SPEICHERUNG UND FREISETZUNG VON ACETYLCHOLIN 4
1.2.3 ABBAU VON ACETYLCHOLIN 5
1.2.4 AUFNAHME VON CHOLIN 6
1.3 ACETYLCHOLINREZEPTOREN 9
1.3.1 NIKOTINERGE ACETYLCHOLINREZEPTOREN 9
1.3.1.1 AUFBAU UND EINTEILUNG 9
1.3.1.2 SIGNALTRANSDUKTION 12
1.3.2 MUSKARINERGE ACETYLCHOLINREZEPTOREN 13
1.3.2.1 AUFBAU UND EINTEILUNG 13
1.3.2.2 SIGNALTRANSDUKTION 14
1.4 DAS KOLON 16
1.4.1 ANATOMIE UND HISTOLOGIE DER DARMWAND 16
1.4.2 DAS KOLONEPITHEL 18
1.4.3 FUNKTIONEN DES KOLONEPITHELS 19
1.4.4 SEKRETIONSMECHANISMEN AM KOLON 20
1.4.5 CHOLINERGE REGULATION DES IONENTRANSPORTES IM KOLON 21
1.4.6 KURZKETTIGE FETTSAEUREN 22
1.5 EIGENE FRAGESTELLUNG 23
2 MATERIAL UND METHODEN 25
2.1 VERSUCHSTIERE 25
2.2 LOESUNGEN 25
2.2.1 LOESUNGEN FUER DIE KRYPTENISOLATION 25
2.2.1.1 ISOLATIONSLOESUNG 25
2.2.1.2 AUFFANGTYRODE 25
2.2.2 LOESUNGEN FUER DIE USSINGKAMMER-VERSUCHE 26
2.2.2.1 BICARBONAT-GEPUFFERTE PARSONSLOESUNG (STANDARD) 26
2.2.2.2 CHLORIDFREIE PARSONSLOESUNG 26
2.2.2.3 CALCIUMFREIE PARSONSLOESUNG 26
2.2.3 LOESUNGEN FUER DIE IMMUNHISTOCHEMISCHEN VERSUCHE 27
2.2.3.1 GELATINELOESUNG ZUR BESCHICHTUNG DER OBJEKTTRAEGER 27
2.2.3.2 GELATINELOESUNG ZUR GEWEBEEINBETTUNG 27
2.2.3.3 PHOSPHATPUFFER (PB) 27
2.2.3.4 PARAFORMALDEHYD-LOESUNG (PFA 4%) 27
2.2.3.5 BLOCKING-LOESUNG 27
2.2.3.6 PRIMAERANTIKOERPERLOESUNGEN 28
I
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INHALTSVERZEICHNIS
2.2.3.7 SEKUNDAERANTIKOERPERLOESUNGEN 28
2.2.3.8 D API-LOESUNG 28
2.2.4 LOESUNGEN FUER DIE CA
2+
-IMAGINGVERSUCHE 29
2.2.4.1 FURA-2 AM-LOESUNG 29
2.2.4.2 STANDARD-TYRODELOESUNG 29
2.2.4.3 CA
2+
-FREIE TYRODELOESUNG 29
2.2.5 LOESUNGEN FUER DIE ENZYMHISTOCHEMIE 30
2.2.5.1 MALEATPUFFER 30
2.2.5.2 CITRATPUFFER 30
2.2.5.3 INKUBATIONSLOESUNG 30
2.3 SUBSTANZEN 31
2.4 GEWEBEPRAEPARATION 32
2.4.1 HERSTELLUNG DER MUKOSA-SUBMUKOSA-PRAEPARATE 32
2.4.2 HERSTELLUNG DER MUKOSA-PRAEPARATE 33
2.4.3 DIE PRAEPARATION ISOLIERTER KRYPTEN 35
2.5 ZELLKULTUR DER HT29/B6 ZELLEN 36
2.5.1 KULTURBEDINGUNGEN 36
2.5.2 AUFTAUEN DER ZELLEN 36
2.5.3 PASSAGIEREN DER ZELLEN 37
2.6 IMMUNFLUORESZENZ-ANALYSE 38
2.6.1 GRUNDLAGEN DER IMMUNFLUORESZENZ 38
2.6.2 IMMUNFLUORESZENZMARKIERUNG AN GEWEBESCHNITTEN 39
2.6.2.1 GELATINEBESCHICHTUNG DER OBJEKTTRAEGER 39
2.6.2.2 FIXIERUNG UND GELATINE-EINBETTUNG DES GEWEBES 39
2.6.2.3 HERSTELLUNG DER GEWEBESCHNITTE 40
2.6.2.4 VERWENDETE ANTIKOEIPER 41
2.6.2.5 FAERBEPROTOKOLL 42
2.6.2.6 NEGATIVKONTROLLEN 44
2.6.2.7 MIKROSKOPIE 44
2.7 ENZYMHISTOCHEMISCHER NACHWEIS DER ESTERASEAKTIVITAET 45
2.8 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 47
2.8.1 PRINZIP DER PCR 47
2.8.2 RNA-ISOLATION AUS KRYPTEN DES DISTALEN KOLONS 49
2.8.3 RNA-ISOLATION AUS DER KOLONMUKOSA 49
2.8.4 RNA-ISOLATION AUS REFERENZGEWEBE 50
2.8.5 REVERSE TRANSKRIPTION 51
2.8.6 VERWENDETE PRIMER 53
2.8.7 DURCHFUEHRUNG DER PCR 55
2.8.8 KONTROLLREAKTIONEN 57
2.8.9 GELELEKTROPHORESE 57
2.9 USSINGKAMMER-MESSUNGEN 58
2.9.1 DIE MESSKAMMER 58
2.9.2 THEORIE DER USSINGKAMMER-TECHNIK 60
2.9.3 VERSUCHSDURCHFUHRUNG UND DATENERFASSUNG 63
2.10 CA
:+
-IMAGING 64
2.10.1 THEORIE DES CA
2+
-IMAGINGS 64
2.10.2 DER FLUORESZENZFARBSTOFF FURA-2 66
II
INHALTSVERZEICHNIS
2.10.3 DER IMAGING-MESSSTAND 67
2.10.4 DIE IMAGING-MESSKAMMER MIT PERFUSIONSSYSTEM 68
2.10.5 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG DER CA
2T
-MESSUNGEN 68
2.11 MESSUNG DER ACETYLCHOLINFREISETZUNG MITTELS HPLC .... ... ...71
2.12 STATISTIK 71
3 ERGEBNISSE 72
3.1 DAS EPITHELIALE CHOLINERGE SYSTEM DES DISTALEN KOLONS DER RATTE 72
3.1.1 AUFNAHME VON CHOLIN IN DIE KOLONEPITHELZELLE 72
3.1.1.1 IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS DES CHT1 72
3.1.1.2 MOLEKULARBIOLOGISCHER NACHWEIS DES CHT1 73
3.1.1.3 UNTERSUCHUNG DER BEDEUTUNG DES CHT 1 FUER DIE EPITHELIALE
ACETYLCHOLINSYNTHESE MITHILFE VON USSINGKAMMER-VERSUCHEN 75
3.1.1.4 UNTERSUCHUNG DER BEDEUTUNG DES CHT 1 FUER DIE EPITHELIALE
ACETYLCHOLINSYNTHESE MITHILFE VON HPLC-MESSUNGEN 79
3.1.2 ACETYLCHOLINSYNTHESE IN DER KOLONEPITHELZELLE 81
3.1.2.1 IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS DER CHAT UND DER CARAT 81
3.12.2 MOLEKULARBIOLOGISCHER N ACHWEIS DER CHAT UND DER CARAT 82
3.1.2.3 UNTERSUCHUNG DER BEDEUTUNG DER CHAT UND DER CARAT FUER DIE
EPITHELIALE ACETYLCHOLINSYNTHESE MITTELS USSINGKAMMER-VERSUCHE 84
3.1.3 SPEICHERUNG VON ACETYLCHOLIN IN KOLONEPITHELZELLEN 87
3.1.3.1 IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS DES V ACHT 87
3.1.3.2 MOLEKULARBIOLOGISCHER NACHWEIS DES VACHT 89
3.1.3.3 UNTERSUCHUNG DER BEDEUTUNG DES V ACHT FUER DIE SPEICHERUNG VON
EPITHELIALEM ACETYLCHOLIN MITHILFE VON USSINGKAMMER-VERSUCHEN 90
3.1.4 ACETYLCHOLINFREISETZUNG AUS DEM KOLONEPITHEL 92
3.1.4.1 IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS DER OCTS 92
3.1.4.2 MOLEKULARBIOLOGISCHER NACHWEIS DER OCTS 94
3.1.4.3 UNTERSUCHUNG DER BEDEUTUNG DER OCTS FUER DIE FREISETZUNG DES
EPITHELIALEN ACETYLCHOLINS MITHILFE VON USSINGKAMMER-VERSUCHEN 95
3.1.4.4 UNTERSUCHUNG DER BEDEUTUNG DER OCTS FUER DIE FREISETZUNG DES
EPITHELIALEN ACETYLCHOLINS MITHILFE VON HPLC-MESSUNGEN 98
3.1.5 NACHWEIS DER ESTERASEAKTIVITAET IM KOLONEPITHEL 100
3.2 SIGNALUEBERTRAGUNG DES EPITHELIALEN ACETYLCHOLINS 101
3.2.1 PROPIONAT BEWIRKT EINEN ANSTIEG DER ZYTOSOLISCHEN
CA
2T
-KONZENTRATION IN ISOLIERTEN KRYPTEN 101
3.2.1.1 CA
2T
- IMAGING VERSUCHE MIT HT29/B6-ZELLEN 107
3.3 NIKOTINERGE ACETYLCHOLINREZEPTOREN AM KOLONEPITHEL DER RATTE... 109
3.3.1 MOLEKULARBIOLOGISCHER NACHWEIS VON UNTEREINHEITEN DER
NIKOTINERGEN ACETYLCHOLINREZEPTOREN 109
3.3.2 DIE WIRKUNG VON NIKOTIN AM KOLONEPITHEL DER RATTE 111
3.3.2.1 DER NIKOTINREZEPTOR-AGONIST DMPP INDUZIERT EINEN
TTX-RESISTENTEN ANSTIEG DES K AN DER KOLONMUKOSA 111
3.3.2.2 NIKOTIN INDUZIERT EINEN KONZENTRATIONSABHAENGIGEN ANSTIEG DES I;
AN
DER KOLONMUKOSA 112
3.3.2.3 DER NIKOTIN-INDUZIERTE I
SC
-ANSTIEG WIRD VON EINER CL -SEKRETION
GETRAGEN UND IST CA
J+
-ABHAENGIG 114
III
INHALTSVERZEICHNIS
3.4 ATYPISCHE AGONISTEN 116
3.4.1 CHOLIN 116
3.4.1.1 CHOLIN INDUZIERT EINEN KONZENTRATIONSABHAENGIGEN ANSTIEG DES IM
DISTALEN KOLON 116
3.4.1.2 CHOLIN INDUZIERT EINE TETRODOTOXIN-RESISTENTE, ATROPIN-SENSITIVE
CL -SEKRETION 117
3.4.2 BUTYRYLCHOLIN UND PROPIONYLCHOLIN 122
3.4.2.1 BUTYRYLCHOLIN UND PROPIONYLCHOLIN INDUZIEREN EINEN
KONZENTRATIONSABHAENGIGEN ^-ANSTIEG 122
3.4.2.2 DER DURCH BUTYRYLCHOLIN UND PROPIONYLCHOLIN INDUZIERTE ANSTIEG
DES IG; ENTSTEHT DURCH STIMULATION VON MUSKARINREZEPTOREN 123
4 DISKUSSION 125
4.1 NON-NEURONALES ACETYLCHOLIN: VON DER SYNTHESE ZUR FREISETZUNG..125
4.1.1 SYNTHESE VON ACETYLCHOLIN 125
4.1.2 SPEICHERUNG UND FREISETZUNG VON ACETYLCHOLIN 127
4.1.3 ABBAU VON ACETYLCHOLIN 131
4.1.4 AUFIIAHME VON CHOLIN 132
4.1.5 SIGNALTRANSDUKTION VON EPITHELIALEM ACEYLCHOLIN 135
4.2 EPITHELIALE NIKOTINERGE REZEPTOREN 138
4.2.1 NIKOTINREZEPTOR-UNTEREINHEITEN IM KOLONEPITHEL 138
4.2.2 FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG DER NACHR IM KOLONEPITHEL 139
4.3 UNGEWOEHNLICHE AGONISTEN AN CHOLINERGEN REZEPTOREN 141
4.3.1 CHOLIN 141
4.3.2 BUTYRYLCHOLIN UND PROPIONYLCHOLIN 143
4.4 FAZIT 144
5 ZUSAMMENFASSUNG 146
6 SUMMARY 148
7 VERZEICHNISSE 150
7.1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 150
7.2 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 153
7.3 TABELLEN
VERZEICHNIS 155
7.4 LITERATURVERZEICHNIS 156
8 DANKSAGUNG 169
9 EIGENE PUBLIKATIONEN 171
ERKLAERUNG 172
IV
|
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| spelling | Bader, Sandra Verfasser aut Das non-neuronale cholinerge System des Kolons der Ratte eingereicht von Sandra Bader, Tierärztin aus Ulm 1. Auflage Gießen VVB Laufersweiler Verlag 2014 IV, 171 Seiten Illustrationen, Diagramme txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Edition Scientifique Dissertation Justus-Liebig-Universität, Gießen 2014 rats CAB colon CAB nevrons CAB cholinergic mechanisms CAB acetylcholine CAB polymerase chain reaction CAB Non-neuronales cholinerges System (DE-588)1068661844 gnd rswk-swf Epithel (DE-588)4130937-6 gnd rswk-swf Tiermodell (DE-588)4140660-6 gnd rswk-swf Colon (DE-588)4070071-9 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Colon (DE-588)4070071-9 s Epithel (DE-588)4130937-6 s Non-neuronales cholinerges System (DE-588)1068661844 s Tiermodell (DE-588)4140660-6 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe Bader, Sandra Das non-neuronale cholinerge System des Kolons der Ratte DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=028778050&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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