pan-Her-Rezeptor-Targeting von Mammakarzinomzellen mit Afatinib und Neratinib:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2015
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| adam_text | AUS DEM LEHRSTUHL
FUER
FRAUENHEILKUNDE UND GEBURTSHILFE
(SCHWERPUNIA FRAUENHEILKUNDE)
DIREKTOR: PROF. DR. MED.
OLAF ORTMANN
DER FAKULTAET FUER MEDIZIN
DER UNIVERSITAET REGENSBURG
PAN-HER-REZEPTOR-TARGETING VON MAMMAKARZINOMZELLEN
MIT AFATINIB UND NERATINIB
INAUGURAL
- DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG
DES DOKTORGRADES
DER MEDIZIN
DER
FAKULTAET FUER MEDIZIN
DER UNIVERSITAET REGENSBURG
VORGELEGT VON
CHRISTINA-MARIA SCHWARZ
2015
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INHALTSVERZEICHNIS I
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 7
1.1 DAS MAMMAKARZINOM 7
1.1.1 EPIDEMIOLOGIE UND AETIOLOGIE 7
1.1.2 PATHOGENESE 7
1.1.3 MOLEKULARPATHOLGIE 2
1.1.4 REZEPTORSTATUS 3
1.1.5 MOLEKULARE SUBTYPEN
DES MAMMAKARZINOMS
IN DIAGNOSTIK
UND THERAPIE 3
1.2 DIE HER-REZEPTORFAMILIE 6
1.2.1 STRUKTUR UND AUFBAU 6
1.2.2 REZEPTORAKTIVIERUNG UND
SIGNALTRANSDUKTION 9
1.2.3 DIE ONKOLOGISCHE
BEDEUTUNG
DER HER-REZEPTOREN 12
1.3 DER MONOKLONALE ANTIKOERPER TRASTUZUMAB IN DER BRUSTKREBSTHERAPIE 13
1.3.1 WIRKUNGSWEISE 13
1.3.2 ANSPRECHEN UND
RESISTENZMECHANISMEN 14
1.4 TYROSINKINASEINHIBITOREN ALS ALTERNATIVEN
IN DER BRUSTKREBSTHERAPIE 15
1.4.1 DER DUALE
TYROSINKINASEINHIBITOR LAPATINIB 16
1.4.2 DER PAN-HER-LNHIBITOR NERATINIB 17
1.4.3 DER PAN-HER-LNHIBITOR AFATINIB 19
1.5 ZIELSETZUNG 20
2. THEORETISCHE GRUNDLAGEN 22
2.1. DIE DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE FLUORESZENZANALYTIK 22
2.1.1. DAS DURCHFLUSSZYTOMETER
FACSCANTO II 24
2.1.2. EINGESETZTE FARBSTOFFE 24
2.1.3. DAS PRINZIP DER
DATENANALYSE 24
2.2. DER ZELLZYKLUS 26
2.3. PROLIFERATIONSMESSUNGEN
MIT PROPIDIUMIODID 27
2.4. DER PROGRAMMIERTE ZELLTOD (APOPTOSE) 29
2.5. NACHWEIS DER APOPTOSE
MITHILFE VON ANNEXIN-V-FITC 31
INHALTSVERZEICHNIS
II
3. MATERIAL UND METHODEN 33
3.1. MATERIALIEN (IN TABELLENFORM) 33
3.1.1. GERAETE 33
3.1.2. VERBRAUCHSMATERIAL 33
3.1.3. GEBRAUCHSFERTIG ZUSAMMENGESTELLTE
REAGENZIEN (KITS) 34
3.1.4. REAGENZIEN UND
CHEMIKALIEN 34
3.1.5. MEDIEN UND PUFFERLOESUNGEN MIT IHREN ZUSAMMENSETZUNGEN 35
3.1.6. ANTIKOERPER 36
3.1.7. DNA- FARBSTOFFE
UND ENZYME 37
3.2. VERWENDETE ZELLLINIEN 38
3.3. ZELLEN IN DER STANDARDKULTUR 41
3.4. ZELLERNTE UND
ZELLZAHLBESTIMMUNG 41
3.5. HANDHABUNG DER
KULTURZELLEN 41
3.6. PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 42
3.6.1. HERSTELLUNG
VON LYSATEN 42
3.6.2. DAS BCA-PROTEIN-ASSAY-KIT 42
3.6.3. SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 43
3.6.4. WESTEM-BLOT 43
3.6.5. IMMUNCHEMISCHER PROTEINNACHWEIS (CHEMOLUMINESZENZ) 44
3.6.6. DENSITOMETRISCHE AUSWERTUNG 45
3.7. VERSUCHSAUFBAU PROLIFERATIONSMESSUNG 46
3.7.1. NERATINIB UND AFATINIB BEHANDLUNG 46
3.8. EINPARAMETRISCHE DNA-MESSUNG
MIT PROPIDIUMIODID 46
3.9. ANNEXIN-ASSAY 47
3.10. KNOCK-DOWN VERSUCH 47
4. ERGEBNISSE 50
4.1. EINFLUSS VON
NERATINIB UND AFATINIB AUF DIE PROLIFERATION DER ZELLLINIEN BT474
WT
UND BT474
CYT2 50
4.1.1. S-PHASE-FRAKTION VON
BT474 WT UND CYT2
NACH NERATINIB BEHANDLUNG 51
4.1.2. EINFLUSS EINER DOSISREDUKTION
AUF DIE
S-PHASE-FRAKTION 53
4.1.3. S-PHASE-FRAKTION VON
BT474 WT UND CYT2 NACH
AFATINIB BEHANDLUNG 54
4.2. EINFLUSS VON
NERATINIB UND AFATINIB AUF DIE PROLIFERATION DER ZELLLINIE
ZR-75-1 55
INHALTSVERZEICHNIS III
4.2.1. S-PHASE-FRAKTION VON
ZR-75-1WT UND
ZR-75-1
HER4-K.O NACH
NERATINIB
BEHANDLUNG 55
4.2.2. S-PHASE FRAKTION
VON ZR-75-1
WT UND
ZR-75-1
HER4-K.O NACH
AFATINIB
BEHANDLUNG 57
4.3. ANNEXIN-V-FITC MESSUNG
ZUR BESTIMMUNG
DER APOPTOSE BEI BT474 58
4.3.1. EINFLUSS VON
NERATINIB AUF DIE APOPTOSE 58
4.3.2. EINFLUSS VON AFATINIB
AUF DIE
APOPTOSE 60
4.4. ANNEXIN-V-FITC MESSUNG
ZUR BESTIMMUNG
DER APOPTOSE BEI
ZR-75-1
UND ZR-75-1
HER4-K.O 61
4.4.1. EINFLUSS VON
NERATINIB AUF DIE APOPTOSE 62
4.4.2. EINFLUSS VON
AFATINIB AUF DIE APOPTOSE 62
4.5. DOSISAUSTESTUNG ANDERER ZELLLINIEN 63
4.6. SDS-PAGE UND
WESTERN BLOT UNTERSUCHUNGEN ZUR PHOSPHORYLIERUNG
WICHTIGER
REZEPTOR- UND
SIGNALPROTEINE UNTER TKI-BEHANDLUNG 67
4.7. ZUSAMMENFASSUNG DER
ERGEBNISSE 71
5. DISKUSSION 72
5.1. EINFLUSS DES
TYROSINKINASEINHIBITORS NERATINIB AUF PROLIFERATION UND APOPTOSE 72
5.2. EINFLUSS DES TYROSINKINASEINHIBITORS
AFATINIB AUF PROLIFERATION UND APOPTOSE 75
5.3. DIE ROLLE
DES HER4-REZEPTORS (UNTER
BETRACHTUNG VON ZR-75-1) 77
5.4. SURVIVIN ALS
POTENZIELLER MARKER FUER EIN ANSPRECHEN 80
5.5. TYROSINKINASEINHIBITOREN ALS ERSATZ BEI
TRASTUZUMAB-RESISTENTEN HER2-POSITIVEN
TUMOREN 83
6. ZUSAMMENFASSUNG 86
7. AUSBLICK 88
8. LITERATURVERZEICHNIS 90
9. ERKLAERUNG ZUR EIGENSTAENDIGEN ANFERTIGUNG 97
10. LEBENSLAUF 99
11. DANKSAGUNG 101
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