Pharmakologische und elektrophysiologische Charakterisierung des humanen intestinalen Natriumkanals (hINaC):
Gespeichert in:
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
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Veröffentlicht: |
2015
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adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 DIE DEG/ENAC LONENKANALFAMILIE 1
1.1.1 GESCHICHTLICHER HINTERGRUND 1
1.1.2 STRUKTURELLER AUFBAU 3
1.1.3 EXPRESSION, AKTIVIERUNG UND PHYSIOLOGISCHE FUNKTION 4
1.2 PHARMAKOLOGISCHES PROFIL VON RBLINAC 10
1.2.1 RBLINAC UND HINOC WERDEN NICHT DURCH PROTONEN, FMRFAMID UND
AEHNLICHE PEPTIDE
AKTIVIERT
10
1.2.2 AKTIVIERUNG VON BLINAC UND HINACDURCH PUNKTMUTATION 10
1.2.3 BLINAC WIRD DURCH EXTRAZELLULAERES CALCIUM INHIBIERT 11
1.2.4 BLINAC INHIBIERUNG DURCH DIARYLAMIDINE UND AKTIVIERUNG DURCH
FENAMATE 12
1.2.5 PRAELINIMINAERE STUDIEN IN DER ARBEITSGRUPPE 13
1.3 ZIEL DER ARBEIT UND VERSUCHSPLANUNG 16
2 MATERIAL UND METHODEN 18
2.1 MOLEKULARBIOLOGIE 18
2.1.1 POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) 18
2.1.2 OVERLAP-PCR 20
2.1.3 VEKTOR-KLONIERUNG VIA IN-FUSION 23
2.1.4 CDNA KONSTRUKTE FUER DIE EXPRESSION IN XENOPUS OOZYTEN 24
2.1.5 QUICK-CHANGE MUTAGENESE 25
2.1.6 PLASMID DNA AMPLIFIKATION VIA TRANSFORMATION VON E. COLI 26
2.1.7 PLASMIDPRAEPARATION 26
2.1.8 DNA-SEQUENZIERUNG 27
2.1.9 CRNA-SYNTHESE 27
2.1.10 RNA-ISOLIERUNG AUS KULTIVIERTEN ZELLEN 28
2.1.11 REVERSE TRANSKRIPTION 28
2.1.12 PRIMER FUER DEN NACHWEIS VON HINAC IN KULTIVIERTEN ZELLEN 28
2.1.13 RERVERSE TRANSCRIPTION PCR (RT-PCR) 29
2.2 ZWEI-ELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME (TEVC) 29
2.2.1 MODELLORGANISMUS XENOPUS LAEVIS 30
I
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INHALTSVERZEICHNIS
2.2.2 ISOLIERUNG VON XENOPUS OOZYTEN 30
2.2.3 CRNA INJEKTION IN XENOPUS OOZYTEN 31
2.2.4 MESSAPPARATUR 32
2.2.5 ELEKTRODEN 33
2.2.6 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 34
2.2.7 AUSWERTUNG 34
2.3 USSING-KAMMER 35
2.3.1 ZELLLINIE 35
2.3.2 LAGERUNG VON ZELLLINIEN 36
2.3.3 AUFTAUEN UND PASSAGIEREN VON NRCS 36
2.3.4 ZELLKULTUR INSERTS 36
2.3.5 MESSAPPARATUR 37
2.3.6 ELEKTRODEN 38
2.3.7 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 38
2.3.8 AUSWERTUNG 40
2.4 CHEMIKALIEN 40
2.5 MATERIALIEN FUER DIE MOLEKULARBIOLOGIE 40
2.5.1 FERTIGMATERIAL 40
2.5.2 ENZYME 41
2.5.3 KITS 41
2.5.4 LOESUNGEN 41
2.5.5 GERAETE 42
2.6 MATERIALIEN FUER DIE TEVC 43
2.6.1 SUBSTANZEN 43
2.6.2 GALLE UND GALLENSAEUREN 43
2.6.3 LOESUNGEN FUER DIE TEVC 44
2.7 MATERIALIEN FUER DIE USSING-KAMMER 46
2.7.1 SUBSTANZEN 46
2.7.2 LOESUNGEN FUER DIE USSING-KAMMER 46
3 ERGEBNISSE 48
3.1 PHARMAKOLOGISCHES PROFIL DES HUMANEN INTESTINALEN NATRIUMKANALS
HINAC 48
3.1.1 HINAC WIRD DURCH PHYSIOLOGISCHE KONZENTRATIONEN EXTRAZELLULAERER CA
2
*- UND MG
1
* -
IONEN INHIBIERT 48
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.2 FIUFENAMINSAEURE AKTIVIERT HINAC 50
3.1.3 DIMINAZEN INHIBIERT HINAC 51
3.1.4 VERAENDERUNG DER IONENSEIEKTIVITAET VON HINAC IN ABHAENGIGKEIT
DIVALENTER KATIONEN.... 52
3.2 AKTIVIERUNG VON HINAC DURCH GALLENSAEUREN 54
3.2.1 DIE APPLIKATION VON SCHWEINEGALLE ERHOEHT DIE STROMAMPLITUDE VON
HINAC 54
3.2.2 AKTIVIERUNG VON HINAC DURCH GALLENSAEUREN, INSBESONDERE DURCH
TAURIN-KONJUGIERTE
CHENODEOXYCHOLSOEURE (CDCA) 55
3.2.3 SYNERGISTISCHE AKTIVIERUNG VON HINAC DURCH DCA UND CDCA 58
3.3 VERWENDUNG VON GALLENSAEUREN UND ALTERNATIVEN PFLANZLICHEN
WIRKSTOFFEN IN DER
NATURHEILKUNDE 61
3.3.1 DIE GALLENSAEURE UDCA AKTIVIERT HINAC IN MILLIMOLAREN
KONZENTRATIONEN 61
3.3.2 SILIBININ INHIBIERT BLINAC 62
3.4 DER EPITHELIALE NATRIUMKANAL (ENAC) WIRD DURCH GALLENSAEUREN
AKTIVIERT 64
3.4.1 ENAC WIRD DURCH GALLENSAEUREN AKTIVIERT 64
3.4.2 HINAC WIRD NICHT DURCH PROTEOLYTISCHE SPALTUNG MITTELS TRYPSIN
AKTIVIERT 66
3.4.3 ROMK1 (KIRL.L) WIRD NICHT DURCH CDCA UND DCA AKTIVIERT 67
3.5 MEMBRANAKTIVE SUBSTANZEN BEEINFLUSSEN DIE AKTIVITAET VON HINAC 68
3.5.1 HINAC WIRD DURCH GADOLINIUM INHIBIERT
68
3.5.2 TRINITROPHENOL UND N-LAUROYLSARCOSINE ERHOEHEN DIE HINAC AKTIVITAET
69
3.6 CHIMAEREN ZWISCHEN MBLINAC UND HINAC 71
3.6.1 KEINE DER DREI CHIMAEREN IST KONSTITUTIV AKTIV WIE MBLINAC 72
3.7 UNTERSUCHUNG VON BLINAC IN DER NRC ZELLLINIE 75
3.7.1 AUSBILDUNG EINES NRC-MONOLAYERS AUF UNBESCHICHTETEN PE
FILTER-INSERTS 75
3.7.2 KEIN NACHWEIS VON HINAC IN CACO-2-ZELLEN 77
3.7.3 ERHOEHUNG DES TRANSEPITHELIALEN STROMS IN NRCS DURCH APPLIKATION
VON GALLE 78
3.7.4 DER GALLE-INDUZIERTE ANSTIEG DES TRANSEPITHELIALEN STROMS IN NRCS
WIRD NICHT DURCH
DIMINAZEN INHIBIERT 81
4 DISKUSSION 82
4.1 HINAC UND RBLINAC WEISEN AEHNLICHE ELEKTROPHYSIOLOGISCHE
EIGENSCHAFTEN AUF 82
4.1.1 DIVALENTE KATIONEN REGULIEREN DIE KANALAKTIVITAET 82
4.1.2 FIUFENAMINSAEURE - DER ERSTE ARTIFIZIELLE HINAC AKTIVATOR 83
4.1.3 DIMINAZEN - DER ERSTE POTENTE HINAC INHIBITOR 84
4.2 CHIMAEREN ZWISCHEN HINAC UND MBLINAC 85
4.3 GALLENSAEUREN ALS NATUERLICHER AKTIVATOR FUER HINAC 87
III
INHALTSVERZEICHNIS
4.3.1 GALLENSAEUREN IM MENSCHEN 87
4.3.2 AUS HINAC WIRD DER HUMANE BILE ACID-SENSITIVE ION CHANNEL (HBASIC)
88
4.3.3 UDCA IN DER THERAPIERUNG VON CHOLESTATISCHEN LEBERERKRANKUNGEN 90
4.3.4 SILIBININ - EIN PFLANZENEXTRAKT MIT LEBERPROTEKTIVER WIRKUNG
INHIBIERT BASIC 91
4.4 MECHANISMUS DER GALLENSAEUREN-AKTIVIERUNG 93
4.4.1 GALLENSAEUREN ALS BASIC-LIGAND? 93
4.4.2 IST BASIC MECHANOSENSITIV? 94
4.5 PHYSIOLOGISCHE FUNKTION VON HBASIC 97
4.5.1 IST DIE REGULATION VON BASIC DURCH DIVALENTE KATIONEN
PHYSIOLOGISCH? 97
4.5.2 HBASIC IM DUENNDARM 98
4.5.3 BASIC IN CHOLANAGIOZYTEN 100
4.5.4 AUSBLICK 102
5 LITERATUR 104
ANHANG 125
IV
|
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