Einfluss von Lysophosphatidsäure auf Monozytenadhäsion und Atherosklerose:
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2015
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| adam_text | AUS DER MEDIZINISCHEN KLINIK UND POLIKLINIK IV
KLINIK DER LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN
DIREKTOR: PROF. DR. MED. M. REINCKE
EINFLUSS VON LYSOPHOSPHATIDSAEURE AUF MONOZYTENADHAESION UND
ATHEROSKLEROSE
DISSERTATION
ZUM ERWERB DES DOKTORGRADES DER MEDIZIN
AN DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET ZU MUENCHEN
VORGELEGT VON
BRIGITTA GLOBKE
AUS
GEORGSMARIENHUETTE
2015
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 6
1.1 KARDIOVASKULAERE ERKRANKUNGEN
6
1.2 ATHEROSKLEROSE - EIN UEBERBLICK 7
1.2.1 OXIDIERTE LOW-DENSITY LIPOPROTEINE 7
1.2.2 MECHANISMEN DER ATHEROGENEN MONOZYTENREKRUTIERUNG 8
1.3 LYSOPHOSPHATIDSAEURE (LPA) 9
1.3.1 BILDUNG UND VORKOMMEN VON LPA 9
1.3.2 LPA REZEPTOREN 11
1.3.3 LPAS IN DER KLINIK 14
1.4 ZIELE DER ARBEIT 15
1.5 ZUSAMMENFASSUNG DES VERSUCHSAUFBAUS 16
2 MATERIAL UND
METHODEN 17
2.1 MATERIAL. 17
2.1.1 TIERE 17
2.1.2 SUBSTANZEN 17
2.1.3 GERAETE 19
2.1.4 VERBRAUCHSMATERIAL 21
2.1.5 SOFTWARE 22
2.2 METHODEN 23
2.2.1 LOESUNGEN, REZEPTE, ANSAETZE 23
2.2.1.1 PBS (PHOSPHATE BUFFERED SALINE) 23
2.2.1.2 MOPS (PERFUSIONSPUFFER) 23
2.2.1.3 ZELLKULTURMEDIUM MONO MAC 6 24
2.2.1.4 FAERBEREAGENZIEN HISTOLOGIE 25
2.2.1.4.1 MODIFIZIERTE MOVAT PENTACHROM FAERBUNG 25
2.2.1.4.2 OIL-RED-O AORTENFAERBUNG 26
2.2.1.5 KI16425 26
2.2.1.6 LPA ANSAETZE 27
2.2.1.6.1 LPA 18:0 27
2.2.1.6.2 LPA 1-AGP18:1 27
2.2.1.6.3 LPA 20:4 27
2.2.1.7 CALCEIN 28
2.2.1.8 TNF-A 28
2.2.1.9 CXCR2 AK 28
2.2.1.10 ISOTYP-KONTROLLANTIKOERPER MOUSE IGG^ 28
2.2.2 MAEUSESTAEMME 29
2.2.2.1 C57/BI6 MAEUSE 29
2.2.2.2 APOE MAEUSE 29
2.2.3 TIERVERSUCHE, TIERHALTUNG UND MAEUSEZUCHT 30
2.2.4 ANAESTHESIE 30
2.2.5 MONOMAC 6 ZELLKULTUR 31
2.2.5.1 MM6 ZELLEN 31
2.2.5.2 MM6 KULTUR 31
2.2.5.3 ZELLFAERBUNG MIT CALCEIN 32
2.2.5.4 ANTIKOERPER VORBEHANDLUNG DER MM6 ZELLEN 32
2.2.6 VERSUCHE 33
2.2.6.1 EX-VIVO PERFUSION 33
2.2.6.1.1 VERSUCHSAUFBAU 33
2.2.6.1.2 OP VORBEREITUNG 33
2.2.6.1.3 OP 33
2.2.6.1.4 EX-VIVO PERFUSION 35
2.2.6.1.5 VIDEOAUSWERTUNG 36
2.2.6.2 EFFEKTE VON ENDOGENEM LPA AUF DIE DIAET INDUZIERTE ATHEROSKLEROSE
37
2.2.6.2.1 VERSUCHSAUFBAU 37
2.2.6.2.2 OP 37
4
2.2.7 HISTOLOGIE 38
2.2.7.1 HERSTELLUNG DER SCHNITTE 38
2.2.7.2 ENTPARAFFINIERUNG 38
2.2.7.3 MODIFIZIERTE MOVAT PENTACHROM FAERBUNG 39
2.2.7.3.1 FAERBEPROTOKOLL MOVAT FAERBUNG 40
2.2.7.4 EN-FACE-OIL-RED-0 40
2.2.7.4.1 AORTENFAERBUNG 40
2.2.8 IMMUNHISTOCHEMIE UND IMMUNFLUORESZENZ 41
2.2.8.1 A-SMOOTH MUSCLE ACTIN (A-SMA) 41
2.2.8.2 MAUS-MAKROPHAGEN-ANTIKOERPER 2 (MAC2) FAERBUNG 42
2.2.8.3 CXCL1 FAERBUNG 43
2.2.9 MIKROSKOPIE UND MORPHOMETRISCHE ANALYSE 44
2.2.10 BLUTUNTERSUCHUNGEN 44
2.2.10.1 LABORPARAMETER 44
2.2.11 STATISTIK 45
3. ERGEBNISSE 46
3.1 EINFLUSS VON LPA AUF DIE ATHEROGENE MONOZYTENREKRUTIERUNG 46
3.1.1 MECHANISMUS DER LPA-EFFEKTE AUF DAS ROLLEN VON MONOZYTEN 46
3.1.1.1 AUSWIRKUNG VON UNGESAETTIGTEN UND GESAETTIGTEN LPA-DERIVATEN AUF
DAS ROLLEN VON
MONOZYTEN 46
3.1.1.2 MECHANISMUS DES 1-AGP18:1-INDUZIERTEN ROLLENS VON MONOZYTEN 47
3.1.1.3 MECHANISMUS DES LPA 20:4-INDUZIERTEN ROLLENS VON MONOZYTEN 48
3.1.2 MECHANISMUS DER LPA-EFFEKTE AUF DIE ADHAESION VON MONOZYTEN 49
3.1.2.1 AUSWIRKUNG VON UNGESAETTIGTEN UND GESAETTIGTEN LPA-DERIVATEN AUF
DIE
MONOZYTENADHAESION 49
3.1.2.2 MECHANISMUS DER 1-AGP18:1-INDUZIERTEN MONOZYTENADHAESION 50
3.1.2.3 MECHANISMUS DER LPA 20:4-INDUZIERTEN MONOZYTENADHAESION 52
3.2 EFFEKTE VON ENDOGENEM LPA AUF DIE DIAET INDUZIERTE ATHEROSKLEROSE 54
3.2.1 AORTENKLAPPENEBENE 54
3.2.1.1 EINFLUSS DES LPA REZEPTORANTAGONISTEN KI16425 AUF DIE
PIAQUEBILDUNG AN DEN SINUS
DER AORTENKLAPPEN 54
3.2.1.2 EINFLUSS DES LPA REZEPTORANTAGONISTEN KH6425 AUF DIE
AKKUMULATION VON GLATTEN
MUSKELZELLEN IN ATHEROSKLEROTISCHEN PLAQUES 55
3.2.1.3 EINFLUSS DES LPA REZEPTORANTAGONISTEN KH6425 AUF DIE
AKKUMULATION VON
MAKROPHAGEN IN ATHEROSKLEROTISCHEN PLAQUES 56
3.2.1.4 EINFLUSS DES LPA REZEPTORANTAGONISTEN KH6425 AUF DIE EXPRESSION
VON CXCL1 IN
ATHEROSKLEROTISCHEN PLAQUES 57
3.2.2 AORTENFAERBUNG 58
3.2.2.1 EINFLUSS DES LPA REZEPTORANTAGONISTEN KH6425 AUF DIE
PIAQUEBILDUNG IN DER AORTA 58
3.3 LABORCHEMISCHE KONTROLLE VON ORGANFUNKTION UND FETTSTOFFWECHSEL 59
3.3.1 EINFLUSS DER BEHANDLUNG MIT KI16425 AUF LIPIDWERTE 59
3.3.2 HEPATO- UND RENALE TOXIZITAET DER BEHANDLUNG MIT KI16425 59
4. DISKUSSION 60
4.1 UNGESAETTIGTE LPAS INDUZIEREN ROLLEN UND ADHAESION VON MONOZYTEN IN
ARTERIEN 60
4.2 EINFLUSS DER LPA
1/3
REZEPTOREN AUF DIE LPA-INDUZIERTE MONOZYTENADHAESION 61
4.3 ROLLE VON CXCL1 IN DER LPA-VERMITTELTEN ATHEROGENEN
MONOZYTENADHAESION 62
4.4 INHIBITION DES LPA
R
UND LPA
3
-REZEPTORS VERMINDERT ATHEROSKLEROSE 64
4.5 EFFEKTE EINER PHARMAKOLOGISCHEN HEMMUNG VON LPA REZEPTOREN 66
4.6 AUSBLICK 67
6 LITERATURVERZEICHNIS 70
7 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 75
8 DANKSAGUNG 77
9 PUBLIKATIONEN 78
10 LEBENSLAUF 79
5
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