Ko-Kultivierung adipogener Stammzellen mit Fibroblasten und Endothelzellen: in vitro-Effekte externer Bestrahlung
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2014
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
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|---|---|
| adam_text | AU
S DEM LEHRSTUHL
FUER HALS-NASEN-UND-OHRENHEILKUNDE
PROF. DR. MED JUERGEN STRUTZ
DER FAKULTAET FUER MEDIZIN
DER UNIVERSITAET REGENSBURG
KO-KULTIVIERUNG ADIPOGENER
STAMMZELLEN MIT FIBROBLASTEN UND
ENDOTHELZELLEN:
IN VITRO-EFFEKTE EXTERNER
BESTRAHLUNG
INAUGURAL-DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER
ZAHNMEDIZIN
DER FAKULTAET FUER MEDIZIN
DER UNIVERSITAET REGENSBURG
VORGELEGT VON
VERA-CAECILIA RUDOLPH
2014
I
NHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG.............................................................................................
1
1.1 PHYSIOLOGIE DER
WUNDHEILUNG.........................................................................1
1.1.1 PHASEN DER
WUNDHEILUNG.............................................................................................1
1.1.2 EXSUDATIVE P
HASE..............................................................
1.1.3 PROLIFERATIVE
PHASE............................................................
1.1.4 REPARATIVE P H A S E
.............................................................
1.2 WUNDHEILUNGSSTOERUNGEN............................................
1.2.1 EXTRINSISCHE FAKTOREN
.......................................................
1.2.2 INTRINSISCHE
FAKTOREN.........................................................
1.2.3 AUSWIRKUNG EXTERNER BESTRAHLUNG AUF DIE WUNDHEILUNG
1.3
THERAPIEKONZEPTE ZUR BEHANDLUNG STRAHLENGESCHAEDIGTER WUNDEN
...........
10
1.3.1 GEGENWAERTIGE STRATEGIEN IN DER BEHANDLUNG STRAHLENGESCHAEDIGTER
WUNDEN
.......
10
1.3.2 ZUKUENFTIGE PERSPEKTIVEN IN DER BEHANDLUNG STRAHLENGESCHAEDIGTER W
UNDEN
........
11
1.3.2.1 SPEZIELLE
WUNDVERBAENDE......................................................................................
11
1.3.2.2 APPLIKATION AKTIVER SUBSTANZEN
..........................................................................
11
1.3.2.3 APPLIKATION VON WACHSTUMSFAKTOREN
...................................................................
12
1.3.2.4 INJEKTION VON
ZELLEN................................................................................................
14
1.4
FRAGESTELLUNG UND ZIELSETZUNG DER ARBEIT
..............................................................
18
2 MATERIAL
....................................................................................................................................19
2.1
ZELLKULTUREN........................................................................................................
19
2.2
MEDIEN.................................................................................................................19
2.3
CHEMIKALIEN UND LOESUNGEN
.........................................................................................20
2.4
KITSYSTEME........................................................................................................
21
2.5
MATERIALIEN..........................................................................................................
22
2.6
GERAETE
...................................................................................................................................
22
3 METHODEN
................................................................................................................................
24
3.1
ZELLKULTUR
..............................................................................................................................24
3.1.1 ALLGEMEINE
VORGEHENSWEISE........................................................................................24
3.1.2 AUFTAUEN DER
ZELLEN.......................................................................................................24
3.1.3 TRYPSINIEREN . PASSAGIEREN UND ABNAHME DES VERSUCHS
........................................
24
3.1.4 AUSZAEHLEN DER Z
ELLEN.....................................................................................................
25
3.1.4.1 HAEMOZYTOMETER (NEUBAUER
ZAEHLKAMMER)............................................................
25
3.1.4.2 CEDEX XS A
NALYZER...............................................................................................
26
3.1.5 EINFRIEREN DER
ZELLEN.....................................................................................................
26
3.2
EXPRESSIONSANALYSE.........................................................................................
27
3.2.1
ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY
(ELISA )
........................................................
27
3.2.2
POLYMERASE CHAIN REACTION
(P C R
).............................................................................
28
3.2.2.1
RNA-EXTRAKTION.....................................................................................................28
CO ^ IN CO CO
CO
CD
3
.2.2.2 CDNA-SYNTHESE (REVERSE TRANSKRIPTION)
..........................................................
29
3.2.2.3 QUANTITATIVE REAL-TIME-PCR (QR T-PC R
)............................................................ 29
3.3 V E RS U C H E
..............................................................................................................................30
3.3.1 ETABLIERTE ZELLKULTUREN
...................................................................................................30
3.3.2
BESTRAHLUNG...................................................................................................................
30
3.3.3 BESTRAHLUNGSVERSUCHE DER EINZELKULTUREN
..............................................................
.
31
3.3.4 BESTRAHLUNG DIREKTER KO-KULTUR MIT
FETTSTAMMZELLEN.................................................32
3.3.5 BESTRAHLUNG INDIREKTER KO-KULTUR MIT FETTSTAMMZELLEN
.............................................
33
3.3.5.1 UEBERFUEHREN DER TRANSWELLS NACH DER
BESTRAHLUNG...............................................33
3.3.5.2 UEBERFUEHREN DER TRANSWELLS VOR DER BESTRAHLUNG
...............................................
34
3.4 A U S W E RTU N G
........................................................................................................................
34
4 E R G E B N I S S E
.........................................................................................................................
35
4.1 P RO LIFE RA TIO N
........................................................................................................................
35
4.1.1 PROLIFERATIONSVERHALTEN NACH BESTRAHLUNG
..................................................................
35
4.1.1.1 PROLIFERATION VON NHF NACH
BESTRAHLUNG.............................................................35
4.1.1.2 PROLIFERATION VON HDMEC NACH
BESTRAHLUNG......................................................36
4.1.1.3 PROLIFERATION VON ASC NACH BESTRAHLUNG IN FETTSTAMMZELL- UND
ENDOTHELZELLMEDIUM............................................................................................................
36
4.1.2 PROLIFERATIONSVERHALTEN IN DIREKTER
KO-KULTUR..............................................................37
4.1.2.1 PROLIFERATION VON NHF IN DIREKTER KO-KULTUR MIT A S C
........................................37
4.1.2.2 PROLIFERATION VON HDMEC IN DIREKTER KO-KULTUR MIT A S C
.................................
38
4.1.3 PROLIFERATIONSVERHALTEN IN INDIREKTER K O-KULTUR
..........................................................
39
4.1.3.1 PROLIFERATION VON NHF IN INDIREKTER KO-KULTUR MIT A S C
....................................
39
4.1.3.1.1 PROLIFERATION VON NHF-ASC-KO-KULTUR MIT UEBERFUEHRUNG DES
TRANSWELLS
NACH DER BESTRAHLUNG
........................................................................................................39
4.1.3.1.2 PROLIFERATION VON NHF-ASC-KO-KULTUR MIT UEBERFUEHRUNG DES
TRANSWELLS VOR
DER BESTRAHLUNG
................................................................................................................
40
4.1.3.2 PROLIFERATION VON HDMEC IN INDIREKTER KO-KULTUR MIT ASC
................................
41
4.1.3.2.1 PROLIFERATION VON HDMEC-ASC-KO-KULTUR MIT UEBERFUEHRUNG DES
TRANSWELLS
NACH DER BESTRAHLUNG
.......................................................................................................
41
4.1.3.2.2 PROLIFERATION VON HDMEC-ASC-KO-KULTUR MIT UEBERFUEHRUNG DES
TRANSWELLS
VOR DER BESTRAHLUNG
..........................................................................................................41
4.1.3.3 KONTROLLVERSUCHE FUER KO-KULTUREN UEBER TRANSWELLSYSTEM
...................................
42
4.1.3.3.1 KONTROLLVERSUCHE FUER INDIREKTE KO-KULTUREN ZWISCHEN NHF UND A
S C
......
42
4.1.3.3.1 KONTROLLVERSUCHE FUER INDIREKTE KO-KULTUREN ZWISCHEN HDMEC UND
ASC..
43
4.2 P RO TE IN E X P RE S S IO N W U N D H E ILU N G S RE LE V A N TE R
F A K TO RE N
.....................................
44
4.2.1 PROTEINEXPRESSION NACH BESTRAHLUNG
.........................................................................
44
4.2.1.1 PROTEINEXPRESSION VON NHF NACH
BESTRAHLUNG.................................................44
4.2.1.2 PROTEINEXPRESSION VON HDMEC NACH
BESTRAHLUNG............................................45
4.2.1.3 PROTEINEXPRESSION VON ASC NACH BESTRAHLUNG IN FETTSTAMMZELL- UND
ENDOTHELZELLMEDIUM............................................................................................................46
4.2.2 PROTEINEXPRESSION IN DIREKTER KO-KULTUR
....................................................................
47
4.2.2.1 PROTEINEXPRESSION VON NHF IN DIREKTER
KO-KULTUR...........................................47
4
.2.2.2 PROTEINEXPRESSION VON HDMEC IN DIREKTER KO-KULTUR
...................................
48
4.2.3 PROTEINEXPRESSION IN INDIREKTER KO-KULTUR
.............................................................
51
4.2.3.1 PROTEINEXPRESSION VON NHF IN INDIREKTER
KO-KULTUR..........................................51
4.2.3.1.1 PROTEINEXPRESSION VON NHF-ASC-KO-KULTUR MIT UEBERFUEHRUNG DES
TRANSWELLS NACH DER BESTRAHLUNG
..................................................................................
51
4.2.3.2 PROTEINEXPRESSION VON HDMEC IN INDIREKTER KO-KULTUR
...................................
52
4.2.3.2.1 PROTEINEXPRESSION VON HDMEC-ASC-KO-KULTUR MIT UEBERFUEHRUNG DES
TRANSWELLS NACH DER BESTRAHLUNG
....................................................................................52
4.2.3.2.2 PROTEINEXPRESSION VON HDMEC-ASC-KO-KULTUR MIT UEBERFUEHRUNG DES
TRANSWELLS VOR DER BESTRAHLUNG
.......................................................................................54
4.3 G E N E XP RE SSIO N W U N D H E ILU N G S RE LE V A N TE R F A K TO
RE N
.........................................
56
4.3.1 GENEXPRESSION VON NHF NACH
BESTRAHLUNG..............................................................56
4.3.2 GENEXPRESSION VON HDMEC NACH BESTRAHLUNG
........................................................
57
5 D IS K U S S IO N
..............................................................................................................................58
5.1 U N TE RS U C H U N G E N ZUM Z E LLW A C H S TU M
.......................................................................
56
5.1.1 WACHSTUMSVERHALTEN VON FIBROBLASTEN UND ENDOTHELZELLEN NACH
EXTERNER
BESTRAHLUNG
..............................................................................................................................
58
5.1.2 WACHSTUMSVERHALTEN ADIPOGENER STAMMZELLEN NACH EXTERNER
BESTRAHLUNG IN
FETTSTAMMZELL- UND
ENDOTHELZELLMEDIUM..............................................................................60
5.1.3 WACHSTUMSVERHALTEN VON FIBROBLASTEN BZW. ENDOTHELZELLEN IN
DIREKTER KO-KULTUR
MIT ADIPOGENEN
STAMMZELLEN...............................................................................................61
5.1.4 WACHSTUMSVERHALTEN VON FIBROBLASTEN BZW. ENDOTHELZELLEN IN
INDIREKTER KO-KULTUR
MIT ADIPOGENEN
STAMMZELLEN................................................................................................
63
5.2 U N TE RS U C H U N G E N Z U R P RO TE IN BZW . G E N E X P RE S S
IO N
..............................................
65
5.2.1 PROTEIN- BZW. GENEXPRESSION VON FIBROBLASTEN UND ENDOTHELZELLEN
NACH EXTERNER
BESTRAHLUNG
..............................................................................................................................
65
5.2.2 PROTEINEXPRESSION ADIPOGENER STAMMZELLEN NACH EXTERNER BESTRAHLUNG
IN
FETTSTAMMZELL- UND
ENDOTHELZELLMEDIUM..............................................................................69
5.2.3 PROTEINEXPRESSION VON FIBROBLASTEN BZW. ENDOTHELZELLEN IN DIREKTER
KO-KULTUR MIT
ADIPOGENEN STAMMZELLEN
......................................................................................................
70
5.2.4 PROTEINEXPRESSION VON FIBROBLASTEN BZW. ENDOTHELZELLEN IN
INDIREKTER KO-KULTUR MIT
ADIPOGENEN STAMMZELLEN
......................................................................................................
72
6 Z U S A M M E N F A S S U N G
...........................................................................................................76
7 L IT E R A T U R V E R Z E IC H N IS
.........................................................................................................78
8 A N H A N G
......................................................................................................................................88
8.1 A B B ILD U N G S V E RZ E IC H N IS
..................................................................................................88
8.2 T A B E LLE N V E RZ E IC H N IS
.........................................................................................................90
8.3 A B K UE RZ U N G S V E RZ E IC H N IS
.................................................................................................91
8.4 D A N K S A G U N G
.......................................................................................................................
93
|
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