Zugkraftanalyse an bovinen Osteoblasten nach biochemischer Stimulation:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2014
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| Beschreibung: | V, 79 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
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| adam_text | AUS DEM INSTITUT FUER
EXPERIMENTELLE ORTHOPAEDIE UND BIOMECHANIK
GESCHAEFTSFUEHRENDER DIREKTOR: PROF. DAVID B. JONES PHD.
DES FACHBEREICHS MEDIZIN DER PHILIPPS-UNIVERSITAET MARBURG
IN ZUSAMMENARBEIT MIT DEM UNIVERSITAETSKLINIKUM GIESSEN UND MARBURG GMBH,
STANDORT MARBURG
ZUGKRAFTANALYSE AN BOVINEN OSTEOBLASTEN NACH
BIOCHEMISCHER STIMULATION
INAUGURAL-DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES
DOKTORGRADES DER GESAMTEN HUMANMEDIZIN
DEM FACHBEREICH MEDIZIN DER PHILIPPS-UNIVERSITAET MARBURG
VORGELEGT VON
LENA WENTRUP
GEB. SCHWENDEMANN
AUS BLAUBEUREN
MARBURG, 2014
HTTP://D-NB.INFO/1064029957
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZETCHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 KNOCHENZELLEN UND
BESTANDTEILE DER KNOCHENMATRIX 1
1.2 STIMULATIONSVERFAHREN VON OSTEOBLASTEN 2
1.2.1 MECHANISCHE STIMULATION VON OSTEOBLASTEN IN VITRO 2
1.2.2 HORMONELLE STIMULATION VON OSTEOBLASTEN IN VITRO UND IN VIVO 3
1.2.2.1 PARATHORMON (PTH) UND PARATHORMIN-RELATED-PEPTIDE (PTHRP) 3
1.2.2.2 OXYTOCIN (OT) 5
1.3 CALCIUM ALS
WICHTIGER BOTENSTOFF IN DER ZELLULAEREN SIGNALTRANSDUKTION 5
1.3.1 REGULATION DER ZYTOPLASMATISCHEN CALCIUMKONZENTRATION 6
1.3.2 SPANNUNGSUNABHAENGIGE CAKAUMKANALTYPEN 7
1.3.3 CALCIUMEINSTRAM OBER DEN G-PRATEIRVGEKOPPELTEN PATHWAY 8
1.4 ZELLULAERE ZUGKRAEFTE VON
OSTEOBLASTEN 9
1.4.1 WAS SIND ZUGKRAEFTE? 9
1.4.2
SUBSTRATE ZUR ZUGKRAFTMESSUNG 10
1.4.3 DIE HIER ANGEWANDTE METHODE DER ZUGKRAFTMESSUNG 10
1.5 ZIELSETZUNG UND
KLINISCHE RELEVANZ DER ARBEIT 11
2 MATERIALIEN UND METHODEN 12
2.1 ZELLEN UND ZELLKULTUR 12
2.1.1 PRIPAIAFION UND ZUECHTUNG PRIMAER BOVINER OSTEOBLASTEN 12
2.1.2 PASSAGIEREN DER PRIMAEREN BOVINEN OSTEOBLASTEN 14
2.1.2.1 ABTRYPSINIEREN DER ZELLEN 14
2.1.2.2 AUSSAEEN DER ZELLEN AUF SUBSTRAT UND KULTIVIENING 14
2.2 KRYOKONSERVIERUNG DER ZELLEN 15
2.3 PHAENOTYPISIERUNG VON OSTEOBLASTEN. 15
2.3.1 IMMUNZYTOCHEMISCHER NACHWEIS VON OSTEOCAICIN 15
2.3.2 IMMUNZYTOCHEMISCHER NACHWEIS VON KOLLAGEN TYP 1 16
2.3.3 NACHWEIS VON ALKALISCHER PHOSPHATASE 17
2.3.4 NACHWEIS DER MECHANOSENSITVITST IM MTT-PROLIFERATIONSESSAY 18
I
2.4 HERSTELLUNG DER VERSUCHSKAMMERN 20
2.5 HERSTELLUNG DER POLYACRYLAMIDGELE 20
2.5.1 VORBEREITEN DER DECKGLASER ALS SUBSTRATUNTERLAGE 20
2.5.2 GIESSEN DER FLEXIBLEN SUBSTRATE AUS ACRYLAMID 21
2.5.3 BESCHICHTEN DER POLYACRYLAMIDGELE MIT KOLLAGEN 22
2.5.3 STERILISIEREN DER POLYACRYLAMIDGELE 23
2.6 VERSUCHSDURCHFUHRUNG DER INTRAZELLULAEREN CALCIUMMESSUNG MITHILFE DER
FLUORESZENZMIKROSKOPIE 23
2.6.1 FLUORESZENZFARBSTOFF FURAR2 23
2.6.2 FLUORESZENZMIKROSKOPIE 24
2.6.3 BILDANALYSEMETHODEN ZUR INTRAZELLULAEREN CALCIUMMESSUNG 25
2.6.4 FAERBUNG UND ZELLPRAEPARATION 26
2.6.5 STIMULATION 26
2.6.5.1 STIMULATION DURCH ZUGABE VON PTH 27
2.6.5.2 STIMULATION MIT OXYTOCIN (OT) 27
2.6.5.3 STIMULATION DURCH ZUGABE VON FCS 28
2.6.5.4 STIMULATION DURCH ZUGABE VON THAPSIGARGIN : 28
2.6.5.5 STIMULATION DURCH ZUGABE VON ESSIGSAEURE 29
2.7 VERSUCHSDURCHFIIHRUNG DER ZUGKRAFTMESSUNGEN 29
2.8 ANALYSE DER ZELLULAEREN ZUGKRAEFTE 31
2.8.1 OPTISCHER FLUSSALGORITHMUS FOR ZUGKRAFTMESSUNGEN 31
2.8.2 ERSTELLUNG EINER KRAFT-VEKTOR-KARTE 33
3 ERGEBNISSE 35
3.1 PHAENOTYPISIERUNG PRIMAERER OSTEOBLASTEN 35
3.1.1 IMMUNZYTOCHEMISCHE NACHWEISE 35
3.1.2 NACHWEISE DER MECHANOSENSITIVITAET 36
3.2 INTRAZELLULAERE CALCIUMERTIOEHUNG
NACH STIMULATION 38
3.2.1 MIT PTH UND OT 38
3.2.2 MIT FCS 38
3.2.3 MIT THAPSIGARGIN 40
3.2.3 MIT ESSIGSAEURE 41
3.3 ZUGKRAFTAENDERUNG NACH STIMULATION 41
3.3.1 STIMULATION MIT FCS 42
3.3.2 STIMULATION MIT THAPSIGARGIN 45
3.3.3 NEGATIVKONTROLLE MIT HAM S/HEPES 47
II
4 DISKUSSION 50
4.1 BISHERIGE ERKENNTNISSE ZU ZELLULAEREN
KRAEFTEN 50
4.2 DISKUSSION DER METHODIK 51
4.2.1 WAHL DER ZIELZEOE IN DER TRACTION-FORCE-ANALYSE 51
4.2.2 AUSBLEICHEN DER FLUORESZENZKUGELN 52
4.2.3 ABLOESUNG DER ZELLE ODER ZUNAHME DER ZUGKRAEFTE? 52
4.2.4 ZEITABSTAENDE ZWISCHEN DEN BILDERN IN DER TRACTION-FORCE-ANALYSE 53
4.4 DISKUSSION DER ERGEBNISSE 54
4.4.1 FEHLENDE CALDUMREAKTION AUF PTH UND OT 54
4.4.2 CAKAUMANTWORT DURCH STIMULATION MIT FCS 55
4.4.3 INTRAZELLULAERE CAICIUMEIHFIHUNG NACH ZUGABE VON THAPSIGAIGIN 58
4.4.4 CAKNIMANTWORT NACH
ANDEMNG DES
EXTRAZELLULAEREN PH-WERTS 56
4.4.5 TRACTION FBROE - ANALYSE NACH STIMULATION MIT FCS 57
4.4.6 TRACTION FORCE - ANALYSE NACH STIMULATION MIT THAPSIGARGIN 58
4.4.7 ZUGKRAFTAENDERUNG UND UMBAU DES ZYTOSKEIETTS 58
4.4.8 INTRAZELLULAERE CALAUMERHOEHUNG UND ZUGKRAFTVERAENDENING 60
4.4.9 OBERTRAGBAIKEIT DER ERGEBNISSE AUF ZELLVERBAENDE 61
5 ZUSAMMENFASSUNG 62
LITERATURVERZEICHNIS 64
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 74
TABELLENVERZEICHNIS 75
ANHANG 76
TABELLARISCHER LEBENSLAUF 76
VERZEICHNIS DER AKADEMISCHEN
LEHRER 77
DANKSAGUNG 78
EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG 79
III
|
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