Reaktivierung des murinen Cytomegalovirus bei allogener Knochenmarktransplantation:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2014
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| adam_text | REAKTIVIERUNG DES MURINEN CYTOMEGALOVIRUS
BEI ALLOGENER KNOCHENMARKTRANSPLANTATION
DER NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET
DER FRIEDRICH-ALEXANDER-UNIVERSITAET ERLANGEN-NUERNBERG
ZUR
ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DR. RER NAT.
VORGELEGT VON
MARTINA ELISABETH SEEFRIED
AUS ANSBACH
HTTP://D-NB.INFO/1068837543
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 SUMMARY 2
3 EINLEITUNG 3
3.1 DAS HUMANE CYTOMEGALOVIRUS (HCMV)
3
3.1.1 KLASSIFIZIERUNG UND MORPHOGENESE 3
3.1.2 EPIDEMIOLOGIE UND PATHOGENESE 5
3.2
DIE GRAFT-VERSUS-HOST-DISEASE (GVHD) 8
3.2.1 GVHD - EINE SCHWERWIEGENDE KOMPLIKATION BEI DER HAEMATOPOETISCHEN
STAMMZELLTRANSPLANTATION 8
3.2.2 PATHOPHYSIOLOGIE DER AKUTEN GVHD 10
3.3
PROPHYLAXE UND THERAPIE 11
3.3.1 BEHANDLUNGSSTRATEGIEN BEI DER AKUTEN GVHD UND RESULTIERENDE
RISIKEN FUER
EINE HCMV-ERKRANKUNG 11
3.3.2 BEHANDLUNGSSTRATEGIENEN BEI HCMV-LNFEKTIONEN NACH HAEMATOPOETISCHEN
STAMMZELLTRANSPLANTATIONEN 12
4 FRAGESTELLUNG 14
5 ERGEBNISSE
15
5.1 MODELLSYSTEM ZUR REAKTIVIERUNG VON MCMV DURCH INDUKTION EINER GVHD
15
5.1.1 ETABLIERUNG EINES MURINEN GVHD-MODELLSYSTEMS 15
5.1.2 EINFLUSS DER GVHD AUF DIE REAKTIVIERUNG VON MCMV IN
VIRUS-POSITIVEN REZIPIENTEN 17
5.1.2.1 KONTROLLE DER PRIMAEREN MCMV-INFEKTION
IN BALB/C MAEUSEN 18
5.1.2.2 IN VIVO REAKTIVIERUNG VON MCMV
DURCH
INDUKTION EINER GVHD 19
5.1.2.3 STATUS DES ADAPTIVEN IMMUNSYSTEMS WAEHREND
DER VIRUSREAKTIVIERUNG 21
5.2
THERAPIE DER MCMV-REAKTIVIERUNG MIT VIRUS-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN 23
5.2.1 PROPHYLAKTISCHER B-ZELL-TRANSFER ZUR THERAPIE DER
VIRUSREAKTIVIERUNG 23
5.2.2 THERAPIE DER VIRUSREAKTIVIERUNG DURCH DEN TRANSFER VON
MCMV-SPEZIFISCHEM SERUM 25
5.2.2.1 HERSTELLUNG UND
IN VIVO TEST VON MCMV-SPEZIFISCHEN SERUM-POO/S 25
5.2.2.2 TRANSFER VON MCMV-SPEZIFISCHEM SERUM ZUR KONTROLLE
DER VIRUSREAKTIVIERUNG WAEHREND EINER GVHD 27
5.2.2.3 HALBWERTSZEIT VON SERUM-IGG
WAEHREND EINER GVHD 28
5.2.2.3 REPETITIVE APPLIKATION VON MCMV-SPEZIFISCHEM SERUM ZUR KONTROLLE
DER VIRUSREAKTIVIERUNG WAEHREND EINER GVHD 31
5.2.3 EINFLUSS DES ENDOGENEN REZIPIENTENTITERS AUF DIE
VIRUSREAKTIVIERUNG
WAEHREND EINER GVHD 35
5.3
THERAPIE DER MCMV-REAKTIVIERUNG DURCH ADOPTIVEN TRANSFER VON
REGULATORISCHEN T-ZELLEN (T
REG
S) 37
5.3.1 AUFREINIGUNG UND TRANSFER VON CD4
+
CD25
+
T
REGS
ZUR SUPPRESSION
EINER LETALEN GVHD 38
INHALTSVERZEICHNIS
5.3.2 EINFLUSS EINER T^-VERMITTELTEN SUPPRESSION DER GVHD AUF DIE
VIRUSREAKTIVIERUNG IN MCMV-POSITIVEN REZIPIENTEN 40
5.3.3 REKONSTITUTION DES ADAPTIVEN IMMUNSYSTEMS WAEHREND EINER DURCH
TRCGS-SUPPRIMIERTEN GVHD 44
5.3.4 ENTWICKLUNG EINER VIRUS-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERANTWORT WAEHREND
EINER
DURCH TROG., SUPPRIMIERTEN GVHD 46
5.3.5 ENTWICKLUNG EINER ANTIVIRALEN CD8
+
T-ZELL-ANTWORT WAEHREND EINER DURCH
T^ SUPPRIMIERTEN GVHD 47
5.3.5.1 ANALYSE EINER ANTIVIRALEN CD8
T
T-ZELL-ANTWORT UNTER VERWENDUNG
VON DEXTRAMEREN 48
5.3.5.2 ETABLIERUNG EINES IN VITRO STIMULATIONSTESTS ZUM NACHWEIS
VIRUS-SPEZIFISCHER CD8
+
T-ZELLEN 50
5.3.5.3 NACHWEIS EINER ANTIVIRALEN CD8
+
T-ZELL-ANTWORT
IN VERSUCHSTIEREN MIT
TREG-VERMITTELTER GVHD-SUPPRESSION 52
6 DISKUSSION 55
6.1
REAKTIVIERUNG VON MCMV DURCH INDUKTION EINER GVHD 55
6.2
PROTEKTIVE AKTIVITAET VON MCMV-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN BEI DER
VIRUSREAKTIVIERUNG 56
6.3
THERAPIE DER GVHD UND VIRUSREAKTIVIERUNG DURCH ADOPTIVEN TRANSFER
VON REGULATORISCHEN T-ZELLEN 60
6.3.1 EFFEKTIVE SUPPRESSION DER GVHD BEI BEGLEITENDER MCMV-REAKTIVIERUNG
60
6.3.2 SUPPRESSIVE AKTIVITAETEN DER T
REGS
INTERFERIEREN NICHT MIT EINER
ANTIVIRALEN IMMUNANTWORT 61
6.3.3 HERKUNFT DER ANTIVIRALEN IMMUNANTWORT NACH EINER ALLOGENEN
HAEMATOPOETISCHEN
STAMMZELLTRANSPLANTATION MIT TREG-SUPPRIMIERTER GVHD 62
6.4
FAZIT UND AUSBLICK 64
7 MATERIAL 66
7.1 CHEMIKALIEN 66
7.2 GERAETE
67
7.3 VERBRAUCHSMATERIALIEN 68
7.4 PROGRAMME 69
7.5 ZELLKULTURAGENZIEN 69
7.6 KOMMERZIELLE KITS
70
7.7 PUFFER UND LOESUNGEN 70
7.8 ANTIKOERPER
72
7.9 STREPTAVIDIN-KONJUGATE
73
7.10 MHC-I-DEXTRAMERE 74
7.11 VIRALE PEPTIDE UND PEPTID-POOFC
74
7.12 VERSUCHSTIERE
75
7.13 PRIMAERE ZELLEN 76
7.14 ZELLLINIEN
76
INHALTSVERZEICHNIS
7.15 VIRUS
76
7.16 PROTEINKONJUGATE 76
8 METHODEN 77
8.1 IMMUNOLOGISCHE METHODEN 77
8.1.1 ENZYMGEKOPPELTER IUMMUNOADSORPTIONSTEST (ELISA) 77
8.1.1.1 BESTIMMUNG DES MCMV-SPEZIFISCHEN SERUM-IGG-TITERS 77
8.1.1.2 BESTIMMUNG DES MCMV-SPEZIFISCHEN SERUM-IGG2A
A
/IGG2A
B
-TITERS 78
8.1.1.3 BESTIMMUNG DES NP-SPEZIFISCHEN SERUM-IGG-TITERS 78
8.1.2 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 79
8.1.2.1 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE FAERBUNG VON
ZELLOBERFLAECHENPROTEINEN 79
8.1.2.2 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE FAERBUNG VON
INTRAZELLULAEREM IFNY 79
8.1.2.3 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE FAERBUNG VON
NUKLEAEREM FOXP3 80
8.1.2.4 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE FAERBUNG VON
PEPTID-SPEZIFISCHEN
CD8
+
T-ZELLEN MIT MHC-I-MULTIMEREN 80
8.1.2.5 ZELLZAHLBESTIMMUNG IM VOLLBLUT MITTELS TRUCOUNT TUBES 81
8.2 TIEREXPERIMENTELLE TECHNIKEN 82
8.2.1 MURINES GVHD-MODELLSYSTEM 82
8.2.1.1 ALLOGENE KNOCHENMARKTRANSPLANTATION 82
8.2.1.2 ALLOGENER T-ZELL-TRANSFER 83
8.2.1.3 KLINISCHER GVHD-INDEX 84
8.2.2 ADOPTIVER TRANSFER CD4
+
CD25
+
FOXP3
+
REGULATORISCHER T-ZELLEN 85
8.2.3 ADOPTIVER TRANSFER VON B-LYMPHOZYTEN 86
8.2.4 IN VIVO BIOLUMINESZENZ-IMAGING 87
8.2.5 SERUMGEWINNUNG 87
8.2.5.1 GEWINNUNG VON MCMV-SPEZIFISCHEM IMMUN-SERUM 88
8.2.5.2 GEWINNUNG VON NIP-BSA-SPEZIFISCHEM SERUM 88
8.3 VIROLOGISCHE METHODEN 88
8.3.1 VIRUSPRAEPARATION VON MCMV-AML57-LUC 88
8.3.2 VIRUSTITERBESTIMMUNG VON VIRUS-STOCKS 89
8.3.3 VIRUSTITERBESTIMMUNG VON ORGANPROBEN 90
8.3.4 BESTIMMUNG DER VIRUSLAST MITTELS LUZIFERASE-^RAOY 90
8.3.5 IN VITRO STIMULATION VIRUS-SPEZIFISCHER CD8
+
T-ZELLEN 91
8.4 ZELLKULTURVERFAHREN 92
8.5 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 93
8.5.1 QUANTITATIVE PROTEINBESTIMMUNG 93
8.5.2 HERSTELLUNG VON GANZZELLLYSAT INFIZIERTE MEF-ZELLEN 93
8.6 MATHEMATISCHE METHODEN 94
8.6.1 STATISTISCHE AUSWERTUNG 94
8.6.2 BERECHNUNG DER HALBWERTSZEIT 94
9 LITERATURVERZEICHNIS
95
III
INHALTSVERZEICHNIS
10 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 107
11 LEBENSLAUF 110
12 PUBLIKATIONEN UND PRAESENTATIONEN 111
12.1 PUBLIKATIONEN 111
12.2 PRAESENTATIONEN 111
13 DANKSAGUNG 112
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