Th9-Zellen bei Autoimmunerkrankungen:
Gespeichert in:
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|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2014
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
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|---|---|
| adam_text | AUS DER MEDIZINISCHEN KLINIK UND POLIKLINIK IV
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN
DIREKTOR: PROF. DR. MED. M. REINCKE
SEKTION RHEUMATOLOGIE UND KLINISCHE IMMUNOLOGIE
LEITER: PROF. DR. MED. HENDRIK SCHULZE-KOOPS
TH9-ZELLEN BEI AUTOIMMUNERKRANKUNGEN
DISSERTATION
ZUM ERWERB DES DOKTORGRADES DER MEDIZIN
AN DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET ZU MUENCHEN
VORGELEGT VON
CLEMENS KUEPPER
AUS MUENCHEN
2014
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INHALTSVERZEICHNIS
1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 6
2 EINLEITUNG 9
2.1 T-HELFER-ZELLEN - BESTANDTEIL DES ADAPTIVEN IMMUNSYSTEMS 9
2.1.1 THL-UND TH2-ZELLEN 9
2.1.2 THL7-ZELLEN 10
2.1.3 TH22-ZELLEN 11
2.1.4 TH9-ZELLEN 12
2.1.5 PLASTIZITAET DER TH-ZELLLINIEN 13
2.2 RHEUMATOIDE ARTHRITIS * EINE TH-ZELL-VERMITTELTE AUTOIMMUNERKRANKUNG
13
2.2.1 DEFINITION, DIAGNOSESTELLUNG UND EPIDEMIOLOGIE 13
2.2.2 PATHOGENESE 14
2.2.3 THERAPIE 16
2.3 SYSTEMISCHE SKLEROSE - IBROSE DURCH TH-ZELLEN? 17
2.3.1 DEFINITION, EPIDEMIOLOGIE UND DIAGNOSESTELLUNG 17
2.3.2 PATHOGENESE 18
2.3.3 THERAPIE 19
2.4 RA UND SSC - TH9 UND IL-9 PATHOGEN? 19
2.5 ZIELSETZUNG DER DISSERTATION 20
3 MATERIALIEN UND METHODEN 21
3.1 VERWENDETE MATERIALIEN 21
3.1.1 PUFFER UND REAGENZIEN 21
3.1.2 KITS 22
3.1.3 ANTIKOERPER FUER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 23
3.1.3.1 ANTIKOERPER FUER OBERFLAECHENFAERBUNGEN 23
3.1.3.2 ANTIKOERPER FUER INTRAZELLULAERE FAERBUNGEN 24
3.1.3.3 ISOTYP-KONTROLL-ANTIKOERPER 25
3.1.4 ANTIKOERPER FUER ZELLKULTUR 25
3.1.5 PRIMER 25
3.1.6 ZYTOKINE 26
3.1.7 ENZYME 26
3.1.8 SEREN 26
3.1.9 GEBRAUCHSMATERIALIEN UND GERAETE 26
3.1.10 SOFTWARE 28
3.1.11 ZUSAMMENSETZUNG DER VERWENDETEN PUFFER UND LOESUNGEN 28
3.1.12 ZUSAMMENSETZUNG DES ZELLKULTURMEDIUMS 29
3.2 METHODEN 29
3.2.1 STUDIENKOHORTEN 29
3.2.2 BLUTABNAHME 30
3.2.3 ZELLISOLATION 30
3.2.3.1 ISOLATION VON MONONUKLEAEREN ZELLEN DES PERIPHEREN BLUTES 30
3.2.3.2 AUFTRENNUNG IN ROSETTE-POSITIVE UND -NEGATIVE ZELLEN 31
3.2.3.3 ISOLATION VON CD4-POSITIVEN NAIVEN T-ZELLEN 32
3.2.3.4 ISOLATION VON CD4-POSITIVEN GEDAECHTNIS T-ZELLEN 32
3.2.3.5 ISOLATION VON CD4-POSITIVEN T-ZELLEN 33
3.2.3.6 ISOLATION VON CD8-POSITIVEN T-ZELLEN 33
3.2.3.7 ISOLATION VON NK-ZELLEN 33
3.2.3.8 ISOLATION VON B-ZELLEN 33
3.2.3.9 ISOLATION VON MONOZYTEN 33
3
3.2.3.10 KONTROLLE DER REINHEIT DER ZELLISOLATIONEN 34
3.2.4 ZELLSTIMULATION 34
3.2.5 RESTIMULATION DER ZELLEN ZUR ZYTOKINBESTIMMUNG 35
3.2.6 BESTIMMVING DER ZYTOKINPRODUKTION 35
3.2.7 BESTIMMUNG DER IL-9R-MRNA-EXPRESSION 36
3.2.7.1 ISOLATION VON TOTALER RNA 36
3.2.7.2 UMSCHREIBEN VON MRNA IN CDNA 37
3.2.7.3 PCR UND GELELEKTROPHORESE 37
3.2.7.4 AMPLIFIKATION DER CDNA DURCH QUANTITATIVE RT-PCR 38
3.2.8 STATISTISCHE AUSWERTUNG 38
4 ERGEBNISSE 40
4.1 ERGEBNISSE DER SSC-PATIENTEN 40
4.1.1 KLINISCHE DATEN DER SSC-PATIENTEN 40
4.1.2 ZYTOKINPRODUKTION DURCH NAIVE TH-ZELLEN 41
4.1.2.1 PRODUKTION VON IFNY 41
4.1.2.2 PRODUKTION VON IL-4 42
4.1.2.3 PRODUKTION VON IL-22 43
4.1.2.4 PRODUKTION VON IL-17 45
4.1.2.5 PRODUKTION VON IL-9 47
4.1.2.6 KOPRODUKTION VON IL-9 UND IL-17 49
4.1.2.7 ZUSAMMENFASSUNG 51
4.1.3 ZYTOKINPRODUKTION DURCH GEDAECHTNIS T-HELFER-ZELLEN 51
4.1.3.1 ZYTOKINPRODUKTION DURCH FRISCH ISOLIERTE GEDAECHTNIS TH-ZELLEN 51
4.1.3.2 PRODUKTION VON IFNY 53
4.1.3.3 PRODUKTION VON IL-4 54
4.1.3.4 PRODUKTION VON IL-22 54
4.1.3.5 PRODUKTION VON IL-17 57
4.1.3.6 PRODUKTION VON IL-9 59
4.1.3.7 KOPRODUKTION VON IL-9 UND IL-17 61
4.1.3.8 KOPRODUKTION ANDERER ZYTOKINE MIT IL-17 66
4.1.3.9 ZUSAMMENFASSUNG 69
4.1.4 KLINISCHE RELEVANZ DER GESTEIGERTEN IL-9/IL-17-KOPRODUKTION 70
4.1.4.1 IL-9/IL-17-KOPRODUKTION IN ABHAENGIGKEIT DES AUTOANTIKOERPERSTATUS
70
4.1.4.2 IL-9/IL-17- KOPRODUKTION IN ABHAENGIGKEIT DER DLCOC 71
4.1.4.3 IL-9/IL-17- KOPRODUKTION IN ABHAENGIGKEIT DER PROTEINURIE 72
4.1.4.4 IL-9/IL-17-KOPRODUKTION IN ABHAENGIGKEIT DER ARTERIELLEN
HYPERTONIE 72
4.1.4.5 ZUSAMMENFASSUNG 73
4.2 ERGEBNISSE DER RA-PATIENTEN 74
4.2.1 KLINISCHE DATEN DER RA-PATIENTEN 74
4.2.2 ZYTOKINPRODUKTION DURCH NAIVE TH-ZELLEN 75
4.2.2.1 PRODUKTION VON IFNY 75
4.2.2.2 PRODUKTION VON IL-4 76
4.2.2.3 PRODUKTION VON IL-22 76
4.2.2.4 PRODUKTION VON IL-17 79
4.2.2.5 PRODUKTION VON IL-9 81
4.2.2.6 KOPRODUKTION VON IL-9 UND IL-17 83
4.2.2.7 ZUSAMMENFASSUNG 85
4.2.3 ZYTOKINPRODUKTION DURCH GEDAECHTNIS TH-ZELLEN 85
4.2.3.1 ZYTOKINPRODUKTION DURCH FRISCH ISOLIERTE GEDAECHTNIS TH-ZELLEN 85
4.2.3.2 PRODUKTION VON IFNY 87
4
4.2.3.3 PRODUKTION VON IL-4 88
4.2.3.4 PRODUKTION VON IL-22 88
4.2.3.5 PRODUKTION VON IL-17 91
4.2.3.6 PRODUKTION VON IL-9 93
4.2.3.7 KOPRODUKTION VON IL-9 UND IL-17 95
4.2.3.8 KOPRODUKTION VON ANDEREN ZYTOKINEN MIT IL-17 101
4.2.3.9 ZUSAMMENFASSUNG 103
4.2.4 KLINISCHE RELEVANZ DER ERHOEHTEN IL-9/IL-17 PRODUKTION 104
4.2.4.1 IL-9/IL-17-KOPRODUKTION IN ABHAENGIGKEIT VOM
AUTO-ANTIKOERPERSTATUS . 104
4.2.4.2 IL-9/IL-17-KOPRODUKTION IN ABHAENGIGKEIT VON
ENTZUENDUNGSPARAMETERN 105
4.2.4.3 IL-9/IL-17-KOPRODUKTION IN ABHAENGIGKEIT VOM GELENKBEFALL 106
4.2.4.4 IL-9/IL-17-KOPRODUKTION IN ABHAENGIGKEIT VON DER
KRANKHEITSAKTIVITAET.. 107
4.2.4.5 IL-9/IL-17-KOPRODUKTION IN ABHAENGIGKEIT VOM ROENTGENBEFUND 108
4.2.4.6 ZUSAMMENFASSUNG 109
4.2.5 EXPRESSION DER IL-9R-MRNA IN PBMC-SUBPOPULATIONEN 109
4.2.5.1 EXPRESSION DER IL-9R-MRNA IN FRISCH ISOLIERTEN
PBMC-SUBPOPULATIONEN.
109
4.2.5.2 EXPRESSION DER IL-9R-MRNA IN STIMULIERTEN CD4-POSITIVEN
T-ZELLEN... 110
5 DISKUSSION 112
5.1 ZUSAMMENFASSUNG VON FRAGESTELLUNG UND ERGEBNISSEN 112
5.2 DISKUSSION DER VERWENDETEN IL-9-INDUZIERENDEN KULTURBEDINGUNGEN 113
5.3 EINORDNUNG DER GEWONNENEN ERKENNTNISSE ZU IL-9- UND IL-17-POSITIVEN
TH-ZELLEN
BEI DER RA 113
5.4 EINORDNUNG DER GEWONNENEN ERKENNTNISSE ZU IL-9- UND IL-17-POSITIVEN
TH-ZELLEN
BEI DER SSC 116
5.5 MOEGLICHE ROLLEN DER IL-9/IL-17-POSITIVEN GEDAECHTNIS TH-ZELLEN IN DER
PATHOGENESE
VON RA UND SSC 121
5.6 AUSBLICK 122
6 ZUSAMMENFASSUNG 124
7 LITERATURVERZEICHNIS 125
8 LEBENSLAUF. 134
9 DANKSAGUNG 135
10 EIDESSTATTLICHE V ERSICHERUNG 136
5
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