Untersuchung des immunmodulatorischen Potentials von MCS-18 in vitro und in vivo im NOD-Mausmodell:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen
VVB Laufersweiler Verlag
2014
|
| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Edition Scientifique
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | VIII, 129 S. Ill., graph. Darst. |
| ISBN: | 9783835961364 |
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 DAS IMMUNSYSTEM 1
1.1.1 DAS ANGEBORENE IMMUNSYSTEM 1
1.1.2 DAS ERWORBENE (ADAPTIVE) IMMUNSYSTEM 3
1.1.2.1 T-LYMPHOZYTEN 3
1.1.2.2 B-LYMPHOZYTEN 6
1.2 DENDRITISCHE ZELLEN UND IHRE REIFUNG 7
1.3 AKTIVIERUNG DER T-EFFEKTORZELLEN 11
1.4 REGULATORISCHE T-ZELLEN (TREG) 12
1.5 TOLERANZ 17
1.6 AUTOIMMUNITAET 18
1.7 DIABETES MELLITUS 18
1.8 DIABETES VOM TYP 1 19
1.9 DIE NOD-MAUS: MODELLSYSTEM FUER HUMANEN T1D 21
1.10 MCS-18 22
1.11 ZIELE DER WISSENSCHAFTLICHEN ARBEIT 24
2 MATERIAL UND METHODEN 26
2.1 TIERE 26
2.1.1 VERWENDETE MAUSSTAEMME 26
2.1.2 GENEHMIGUNG DER TIERVERSUCHE 26
2.1.3 ZUCHT UND HALTUNG DER NOD-MAEUSE 26
2.1.4 HALTUNG DER C57BL/6- UND BALB/C-MAEUSE 27
2.2 MATERIAL 27
2.2.1 GERAETE 28
2.2.2 VERBRAUCHSMATERIAL 29
2.2.3 GEBRAUCHSMATERIAL 30
2.2.4 MEDIEN UND PUFFER 31
2.2.5 VERWENDETE COMPUTERPROGRAMME 32
2.2.6 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 33
V
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2.2.7 SPEZIELLE REAGENZIEN 33
2.2.7.1 DZ-REIFUNGSSTIMULI UND ZYTOKINE 33
2.2.7.2 GEBRAUCHSFERTIGE KITS 34
2.2.7.3 ANTIKOERPER FUER DEN ELISPOT-ASSAY 35
2.2.7.4 ANTIKOERPER FUER DIE DURCHFLUSSZYTOMETRIE 35
2.2.7.5 ANTIKOERPER FUER DIE ISOTYPKONTROLLEN 36
2.2.7.6 PRIMAERE ANTIKOERPER FUER DIE IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG 37
2.2.7.7 SEKUNDAERE ANTIKOERPER FUER DIE IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG 37
2.2.7.8 FLUOROPHORE FUER DIE IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG 37
2.2.7.9 PRIMER 38
2.2.7.10 AUTOANTIGENE 38
2.3 METHODEN 38
2.3.1 ZELLKULTURMETHODEN 38
2.3.1.1 KULTIVIERUNG DER ZELLEN 38
2.3.1.2 ZELLZAEHLUNG 39
2.3.1.3 GEWINNUNG VON MURINEM GM-CSF ZELLKULTURUEBERSTAND 39
2.3.1.4 KNOCHENMARKSPRAEPARATION FUER DZ-GEWINNUNG 40
2.3.1.5 GEWINNUNG MURINER DZ AUS DEM KNOCHENMARK 40
2.3.2 MCS-18 BEHANDLUNG IN VIVO IM NOD-MAUSMODELL 41
2.3.2.1 BESCHREIBUNG DES VERSUCHSABLAUFS 41
2.3.3 INJEKTIONSMETHODE ZUR APPLIKATION VON MCS-18 42
2.3.4 BESTIMMUNG DER DIABETESINZIDENZ DURCH NACHWEIS DER HARNGLUKOSE....
43
2.3.5 ORGANENTNAHME DER EUTHANASIERTEN TIERE AM VERSUCHSENDE 44
2.3.5.1 MILZPRAEPARATION 45
2.3.5.2 LYMPHKNOTENPRAEPARATION 45
2.3.5.3 ISOLIERUNG DER LEUKOZYTEN AUS DEM PANKREASGEWEBE 46
2.3.6 IMMUNOLOGISCHE METHODEN 46
2.3.6.1 PRINZIP DER FLUORESZENZAKTIVIERTEN DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS) 46
2.3.6.2 EXTRAZELLULAERE FACS-ANALYSE ZUR BESTIMMUNG DER EXPRESSION
SPEZIFISCHER OBERFLAECHENMOLEKUELE MURINER DZ 48
2.3.6.3 INTRAZELLULAERE FOXP3-SPEZIFISCHE FACS-ANALYSE BEI ISOLIERTEN
ZELLEN AUS MILZ, PANKREAS UND PANKREATISCHEN LYMPHKNOTEN 49
2.3.6.4 APOPTOSE-/NEKROSEFAERBUNG 51
2.3.6.5 ALLOGENE T-ZELL PROLIFERATION/MIXED LEUCOCYTE REACTION (MLR) 52
VI
2.3.6.6 ENZYME-LINKED-IMMUNOSORBENT-ASSAY (ELISA) 53
2.3.6.7 ELISPOT-ASSAY 56
2.3.6.8 CYTOMETRIC BEAD ARRAY (CBA) 59
2.3.6.9 MAGNETISCHE ZELLSORTIERUNG (MACS) ZUR ISOLIERUNG VON B-
LYMPHOZYTEN 60
2.3.7 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 61
2.3.7.1 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA 62
2.3.7.2 PHOTOMETRISCHE BESTIMMUNG DER RNA - KONZENTRATION 62
2.3.7.3 CDNA-SYNTHESE 63
2.3.7.4 QUANTITATIVE REAL-TIME POLYMERASE-KETTENREAKTION (RTQ-PCR) 63
2.3.8 HISTOLOGISCHE METHODEN 65
2.3.8.1 ANFERTIGUNG DER MURINEN PANKREASGEFRIERSCHNITTE 65
2.3.8.2 LMMUNHISTOCHEMISCHE ANALYSE DER GEFRIERSCHNITTE 65
2.3.8.3 FLUORESZENZMIKROSKOPIE 66
2.3.9 STATISTISCHE ANALYSE 67
3 ERGEBNISSE 68
3.1 EINFLUSS VON MCS-18 AUF MURINE DZ VON C57BL/6-MAEUSEN 68
3.1.1 MCS-18 INHIBIERT DIE EXPRESSION OZ-SPEZIFISCHER OBERFLAECHEN
MOLEKUELE 68
3.1.2 MCS-18 BEHANDELTE, TNF-A STIMULIERTE C57BL/6-DZ HEMMEN
KONZENTRATIONSABHAENGIG DIE T-ZELL-PROLIFERATION 73
3.2 MCS-18 BEHANDELTE, LPS STIMULIERTE B-ZELLEN ZEIGEN EINE
KONZENTRATIONSABHAENGIGE HEMMUNG DER PROLIFERATION 75
3.2.1 MCS-18 HEMMT KONZENTRATIONSABHAENGIG DIE IMMUNGLOBULIN-
SEKRETION VON LPS-STIMULIERTEN B-ZELLEN 76
3.2.2 MCS-18 INHIBIERT DIE DURCH ZYTOKINE HERVORGERUFENE PRODUKTION DER
IMMUNGLOBULINE LGG1, LGG2A UND LGG2B DURCH B-ZELLEN 78
3.3 EINFLUSS VON MCS-18 AUF MURINE DZ VON NOD-MAEUSEN 83
3.3.1 MCS-18 INHIBIERT DIE EXPRESSION DZ-SPEZIFISCHER REIFUNGSMARKER 83
3.3.2 MCS-18 BEHANDELTE, LPS GEREIFTE DZ VON NOD-MAEUSEN HEMMEN
KONZENTRATIONSABHAENGIG DIE T-ZELL-PROLIFERATION 85
3.3.3 MCS-18 VERMINDERT DIE ZYTOKIN-SEKRETION IN BEHANDELTEN DZ 87
3.4 MCS-18 IM NOD-MAUSMODELL 88
VII
3.4.1 DIE DIABETESINZIDENZ SINKT BEI MCS-18 BEHANDELTEN NOD-MAEUSE 89
3.4.2 ANALYSE DER IFN-Y, FOXP3, INSULIN 1 UND INSULIN 2 MRNA
EXPRESSION DES PANKREAS MITTELS RT-PCR 90
3.4.3 DIE EXPRESSION VON FOXP3
+
ZELLEN IN MILZ, PANKREATISCHEN
LYMPHKNOTEN (PLN) UND PANKREAS 92
3.4.4 IMMUNHISTOLOGISCHER NACHWEIS VON CD4 CD8
+
UND FOXP3
+
POSITIVEN ZELLEN IM PANKREAS DER NOD-MAUS 94
3.4.5 NACHWEIS VON PEPTID-SPEZIFISCHEN, IFN-Y PRODUZIERENDEN ZELLEN
IN DER MILZ 96
4 DISKUSSION 98
4.1 MCS-18 VERHINDERT DIE EXPRESSION DZ-SPEZIFISCHER REIFUNGSMARKER 98
4.2 INHIBITORISCHE WIRKUNG VON MCS-18 AUF MURINE B-ZELLEN 100
4.3 MCS-18 IM NOD-MAUSMODELL 102
5 LITERATURVERZEICHNIS 104
6 ZUSAMMENFASSUNG 123
7 SUMMARY 126
8 VEROEFFENTLICHUNGEN 128
WISSENSCHAFTLICHE ORIGINALVEROEFFENTLICHUNGEN WAEHREND MEINES
PROMOTIONSSTUDIUMS: 128
9 DANKSAGUNG 129
VIII
|
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