Kainat-induzierte Synthese von TIMP-1 reguliert die Prozessierung von Reelin im epileptischen Hippocampus:
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2013
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| adam_text | AUS DER NEUROCHIRURGISCHEN ABTEILUNG DER UNIVERSITAETSKLINIK FREIBURG
ARBEITSGRUPPE EXPERIMENTELLE EPILEPSIEFORSCHUNG
ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG IM BREISGAU
KAINAT-INDUZIERTE SYNTHESE VON TIMP-1 REGULIERT DIE
PROZESSIERUNG VON REELIN IM EPILEPTISCHEN HIPPOCAMPUS
INAUGURAL-DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DES MEDIZINISCHEN DOKTORGRADES
DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG IM BREISGAU
VORGELEGT 2013
VON JULIA MARIA
RINGWALD
GEBOREN IN WALDKIRCH
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IV
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VIII
ABBILDUNGSVERZEICHNIS XI
TABELLENVERZEICHNIS XII
1 EINLEITUNG 1
1.1 EPILEPSIE 1
1.1.1 EPIDEMIOLOGIE 1
1.1.2 KLASSIFIKATION 1
1.2 TEMPORALLAPPENEPILEPSIE 2
1.3 HIPPOCAMPUS 3
1.3.1 AUFBAU DES
HIPPOCAMPUS 4
1.3.1.1 GYRUS DENTATUS 4
1.3.1.2 AMMONSHORN 4
1.3.2 VERSCHALTUNG DES HIPPOCAMPUS 5
1.4 NEUROPATHOLOGIE DER MTLE 7
1.4.1 AMMONSHORNSKLEROSE 7
1.4.2 .KOERNERZELLDISPERSION 7
1.4.3 MOOSFASERSPROSSUNG 9
1.5 EXTRAZELLULAERE MATRIX 9
1.5.1 REELIN 9
1.5.1.1 REELIN-EXPRESSION 9
1.5.1.2 DAS MOLEKUEL REELIN 10
1.5.1.3 FUNKTIONEN VON REELIN 12
1.5.1.4 REELIN-REZEPTOREN UND SIGNALKASKADE 14
1.5.1.5 PROTEOLYTISCHE SPALTUNG VON REELIN 15
1.5.2 MMPS 16
1.5.2.1 STRUKTURELLER AUFBAU 17
1.5.2.2 FUNKTION 17
1.5.2.3 REGULATIONSMECHANISMEN 18
1.5.3 TIMPS 19
1.5.4 PHYSIOLOGISCHE EXPRESSION VON MMPS UND TIMPS IM ZNS 20
1.5.5 NEURONALE HYPERAKTIVITAET INDUZIERT EXPRESSION VON MMPS UND TIMP-1
21
V
1.6 ORGANOTYPISCHE HIPPOCAMPALE SCHNITTKULTUREN 22
1.6.1 MORPHOLOGISCHE GEMEINSAMKEITEN UND VERAENDERUNGEN IN VITRO 22
1.6.2 OHC ALS EPILEPSIE-MODELL 23
1.7 FRAGESTELLUNG 25
2 MATERIAL 26
2.1 TIERE 26
2.2 REAGENZIEN 26
2.3 PHARMAKOLOGISCHE SUBSTANZEN 27
2.4 VERBRAUCHSMATERIALIEN 28
2.5 GERAETE 28
2.6 SOFTWARE 29
2.7 ANTIKOERPER 29
2.7.1 PRIMAERANTIKOERPER 29
2.7.2 SEKUNDAERANTIKOERPER 30
2.8 HAEUFIG ANGESETZTE LOESUNGEN UND PUFFER 30
2.8.1 GEWEBEKULTUR 30
2.8.2 WESTERN BLOT 31
2.8.3 IMMUNHISTOCHEMIE 32
2.8.4 SONSTIGE LOESUNGEN 32
3 METHODEN 34
3.1 HIPPOCAMPALE SCHNITTKULTUREN 34
3.1.1 ERSTELLUNG HIPPOCAMPALER SCHNITTKULTUREN 34
3.1.2 BEHANDLUNG DER HIPPOCAMPALEN SCHNITTKULTUREN 35
3.2 PROTEINANALYTIK 38
3.2.1 PROTEINEXTRAKTION 38
3.2.2 PROTEINBESTIMMUNG NACH DER BCA-METHODE 39
3.3 WESTERN BLOT ANALYSE 40
3.3.1 SDS-PAGE 40
3.3.2 BLOTTING 41
3.3.3 IMMUNDETEKTION 42
VI
3.3.4 BANDENDETEKTION UND DENSITOMETRIE 43
3.3.5 AUSWERTUNG 43
3.4 ELISA 44
3.4.1 DETEKTION NACH DEM SANDWICH-PRINZIP 44
3.4.2 AUSWERTUNG 45
3.5 MORPHOLOGISCHE METHODEN 46
3.5.1 PFA-FIXIERUNG DER HIPPOCAMPALEN SCHNITTKULTUREN 46
3.5.2 RESLICING A VIBRATOM 46
3.5.3 FAERBUNGEN 46
3.5.3.1 KRESYLVIOLETT-FAERBUNG (NISSL-FAERBUNG) 46
3.5.3.2 IMMUNOHISTOCHEMIE 47
4 ERGEBNISSE 50
4.1 DETEKTION VON REELIN MITTELS G10-REELIN-ANTIKOERPER 50
4.2 KAINAT-BEHANDLUNG UND DEREN EFFEKTE AUF DIE REELIN-PROZESSIERUNG 51
4.3 WIRKUNG VON KAINAT AUF
DIE EXPRESSION VON TIMP-1 54
4.3.1 QUANTITATIVE ANALYSE MITTELS
ELISA 54
4.3.2 IMMUNHISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNGEN 56
4.4 FUNKTIONELLE INHIBITION VON TIMP-1 58
4.5 BEHANDLUNG MIT REKOMBINANTEM TIMP-1 61
4.5.1 EFFEKTE AUF
DIE ZUSAMMENSETZUNG DER REELIN-ISOFORMEN 61
4.5.2 AUSWIRKUNGEN AUF DIE
MORPHOLOGIE DER KOERNERZELLSCHICHT 61
4.5.3 EFFEKTE AUF DIE INTRA-
BZW. EXTRAZELLULAERE VERTEILUNG VON REELIN 63
5 DISKUSSION 65
5.1 KAINAT-KURZZEITBEHANDLUNG TANGIERT REELIN-PROZESSIERUNG NICHT 65
5.2 MMPS UND TIMPS IM KONTEXT DER KOERNERZELLDISPERSION 67
5.3 KAINAT VERMITTELT DIE INDUKTION VON TIMP-1 68
5.4 TIMP-1 WIRD NEURONAL EXPRIMIERT 69
5.5 TIMP-1 IST
IN DIE
PROZESSIERUNG VON REELIN INVOLVIERT 72
5.5.1 TIMP-1-FUNKTIONSINHIBITION SCHUETZT DIE REELIN-PROZESSIERUNG 72
5.5.2 REKOMBINANTES TIMP-1 INHIBIERT DIE REELIN-PROZESSIERUNG 73
VII
5.6 TIMP-1 INDUZIERT KOERNERZELLDISPERSION 75
5.7 TIMP-1 BEEINFLUSST DIE
EXTRA- UND INTRAZELLULAERE REELIN-PROZESSIERUNG 76
5.8 ZUSAMMENFASSENDE BETRACHTUNG DER ERGEBNISSE 78
6 ZUSAMMENFASSUNG 81
7 LITERATURVERZEICHNIS 82
8 DANKSAGUNG 106
9 LEBENSLAUF 107
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