Asymmetrische Fluss-Feldfluss-Fraktionierung zur Charakterisierung kolloidaler Systeme:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
2014
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Beschreibung: | V, 159 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
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A EINFUEHRUNG 1
1 ZIEL DER ARBEIT 2
2 STRUKTURIERUNG DER ARBEIT 2
3 NANOPARTIKULAERE TRAGERSYSTEME 3
3.1 VORTEILE VON NANOSKALIGEN SYSTEMEN 3
3.2 PASSIVES DRUG TARGETING 4
3.3 AKTIVES DRUG TARGETING 6
3.4 ARTEN DER NANOSKALIGEN SYSTEME 8
3.4.1 MILCHSAEURE-BASIERTE NANOPARTIKEL 9
3.4.2 PROTEIN-BASIERTE NANOPARTIKEL 10
4 FELDFLUSS-FRAKTIONIERUNG 12
4.1 FLUSS-FELDFLUSS-FRAKTIONIERUNG 14
4.2 GROESSENBESTIMMUNG MITTELS STATISCHER LICHTSTREUUNG 18
4.3 GROESSENBESTIMMUNG MITTELS DYNAMISCHER LICHTSTREUUNG 19
B MATERIALIEN UND METHODEN 21
1 CHEMIKALIEN 21
2 ZELLLINIE 22
3 PUFFER 23
4 FLIESSMITTEL 23
5 GERAETE UND MATERIALIEN 24
6 HERSTELLUNG VON NANOPARTIKELN AUS HUMANEM SERUMALBUMIN 28
6.1 STANDARDMETHODE 28
6.2 GROESSENMESSUNG DER NANOPARTIKEL MITTELS DYNAMISCHER
LICHTSTREUUNG (BATCH-MODE) 28
6.3 VARIATION DER HERSTELLUNGSBEDINGUNGEN 29
6.4 HSA-NANOPARTIKEL FUER EINE ANSCHLIESSENDE OBERFLAECHEN
MODIFIKATION 29
6.5 FLUORESZENZMARKIERTE NANOPARTIKEL 30
6.6 OBERFLAECHENMODIFIKATION DER NANOPARTIKEL MIT POLYETHYLENGLYCOL 30
6.7 OBERFLAECHENMODIFIKATION DER NANOPARTIKEL MIT TRASTUZUMAB 31
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7 GRUNDOPERATIONEN DER AF4 32
7.1 VARIATION DER EINFLUSSNEHMENDEN PARAMETER 34
7.1.1 VARIATION DES QUERFLUSSES 34
7.1.2 VARIATION DES FOKUSSIERUNGSFLUSSES 34
7.1.3 KONZENTRATIONSERHOEHUNG DURCH OUTLET STREAM-SPLITTING 34
7.1.4 VARIATION DER MEMBRANEN 35
7.1.5 VARIATION DES FLIESSMITTELS 35
7.2 GROESSENMESSUNG DER NANOPARTIKEL MITTELS DYNAMISCHER
LICHTSTREUUNG (FLOW-MODE) 36
7.3 FRAKTIONIERUNG 36
8 AF4-METHODE ZUR VERANSCHAULICHUNG DER HSA-NANOPARTIKEL-
ENTSTEHUNG 36
9 METHODENENTWICKLUNG ZUR UNTERSUCHUNG DER OBERFLAECHENMODIFIKATION. 37
9.1 AF4-METHODE ZUR UNTERSUCHUNG VON PEGYLIERTEM HSA 37
9.1.1 PEGYLIERUNG VON HSA 38
9.2 AF4-METHODE ZUR UNTERSUCHUNG VON ONCASPAR 39
9.2.1 LAGERUNG VON ONCASPAR 39
9.2.2 PEGYLIERUNG VON ASPARAGINASE 40
9.3 AF4-METHODE ZUR UNTERSUCHUNG DER PEGYLIERUNG VON
NANOPARTIKELN 40
9.3.1 AF4-METHODE ZUR UNTERSUCHUNG VON FMOC-PEGYLIERTEN
NANOPARTIKELN AUF DER RC 1-MEMBRAN 41
9.3.2 AF4-METHODE ZUR UNTERSUCHUNG VON
FMOC-PEGYLIERTEN NANOPARTIKELN AUF DER PES 1-MEMBRAN 41
9.3.3 DIREKTE BESTIMMUNG DES PEGYLIERUNGSGRADES
MITTELS FLUORESZENZ-MESSUNG AM MICROPLATE READER 42
J
9.4 AF4-METHODE ZUR UNTERSUCHUNG VON TRASTUZUMAB-MODIFIZIERTEN
NANOPARTIKELN 43
9.4.1 HERSTELLUNG DER PLGA-NANOPARTIKEL MIT ANSCHLIESSENDER
OBERFLAECHENMODIFIKATION MIT TRASTUZUMAB 43
9.4.2 VARIANTE ZUR UNTERSUCHUNG DER OBERFLAECHENMODIFIKATION VON
RHODAMIN-MARKIERTEN HSA-NANOPARTIKELN MIT TRASTUZUMAB 44
10 ZELLKULTURVERSUCHE : 45
10.1 AUFTAUEN DER ZELLEN 45
10.2 ZELL-PASSAGE 46
10.3 AUFNAHME VON ZELLWACHSTUMSKURVEN 46
10.4 INKUBATION DER ZELLEN MIT HSA-NANOPARTIKELN 46
10.5 BESTIMMUNG DER ZELLASSOZIATION MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE 47
10.5.1 DURCHFLUSSZYTOMETER VON BECTON DICKINSON 47
10.5.2 MUSE 49
10.6 AF4-ANALYTIK DES ZELLYSATS 49
10.7 MIKROSKOP-AUFNAHMEN DER
CHAMBERSLIDES
50
10.8 RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE 50
C ERGEBNISSE UND DISKUSSION 53
1 GRUNDLAGEN DER AF4 53
1.1 PARAMETER, DIE DAS ELUTIONSVERHALTEN IN DERAF4 BEEINFLUSSEN 53
1.1.1 EINFLUSS DES QUERFLUSSES AUF DAS ELUTIONSVERHALTEN DER
HSA-NANOPARTIKEL 54
1.1.2 REPRODUZIERBARKEIT DES ELUTIONSVERHALTENS DER
HSA-NANOPARTIKEL 55
1.1.3 EINFLUSS DES FOKUSSIERUNGSFLUSSES AUF DAS
ELUTIONSVERHALTEN DER HSA-NANOPARTIKEL 56
1.1.4 EINFLUSS DES
OUTLET STREAM SPLITTINGS
AUF DAS
ELUTIONSVERHALTEN VON HSA-NANOPARTIKELN UND GELOESTEM
HSA 57
1.1.5 EINFLUSS VERSCHIEDENER MEMBRANEN AUF DAS ELUTIONS
VERHALTEN 60
1.1.6 EINFLUSS VON POLYMEREN AUF DAS ELUTIONSVERHALTEN 61
1.2 INLINE DLS-MESSUNG 63
1.3 FRAKTIONIERUNG 65
2 VERANSCHAULICHUNG DER HSA-NANOPARTIKEL-ENTSTEHUNG MITTELS AF4-
ANALYTIK 68
3 METHODENENTWICKLUNG ZUR UNTERSUCHUNG DER OBERFLAECHENMODIFIKATION. 73
3.1 METHODENENTWICKLUNG ZUR UNTERSUCHUNG DER PEGYLIERUNG 74
3.1.1 UNTERSUCHUNG VON PEGYLIERTEM HSA 76
3.1.2 UNTERSUCHUNG VON ONCASPAR 78
3.1.3 UNTERSUCHUNG DER PEGYLIERUNG VON ASPARAGINASE 88
3.2 PEGYLIERUNG VON HSA-NANOPARTIKELN 92
3.2.1 GROESSENAENDERUNG DURCH PEGYLIERUNG MIT M-PEG-SSA 92
3.2.2 PEGYLIERUNG MIT M-PEGS.OOO-SC 94
3.2.3 PEGYLIERUNG MIT FMOC-PEG-SB 96
3.3 METHODENENTWICKLUNG ZUR UNTERSUCHUNG DER ANTIKOERPERBINDUNG. 110
3.3.1 ANTIKOERPERBINDUNG AN HSA-NANOPARTIKEL MIT
GROESSENBESTIMMUNG 112
3.3.2 ANTIKOERPERBINDUNG AN RHODAMIN-MARKIERTE
HSA-NANOPARTIKEL MIT GROESSENBESTIMMUNG 113
4 IN W'FRO-ZELLVERSUCHE 115
4.1 ZELLWACHSTUMSKURVE 116
4.2 DURCHFLUSSZYTOMETRIE ZUR UNTERSUCHUNG DER ZELLASSOZIATION 117
4.3 VERGLEICH DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE MIT DEM MUSE-SYSTEM 119
4.4 AF4-ANALYTIK DES ZELLLYSATS 121
4.5 FLUORESZENZMIKROSKOPIE 125
4.6 RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE 127
D ZUSAMMENFASSUNG 129
E AUSBLICK 133
F ANHANG 134
1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 134
2 LITERATURVERZEICHNIS 136
3 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 152
4 TABELLENVERZEICHNIS 156
5 LEBENSLAUF 158
6 PUBLIKATIONEN 159
6.1 VEROEFFENTLICHUNGEN 159
6.2 TAGUNGSBEITRAEGE 159 |
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