Genetische Reduktion von mTORC1 mildert die Progression der murinen FSGS:
Gespeichert in:
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
2012
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adam_text | AUS DER MEDIZINISCHEN UNIVERSITAETSKLINIK UND POLIKLINIK
ABTEILUNG INNERE MEDIZIN IV
NEPHROLOGIE UND ALLGEMEINMEDIZIN
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG IM BREISGAU
GENETISCHE REDUKTION VON MTORCL MILDERT
DIE
PROGRESSION DER MURINEN FSGS
INAUGURAL-DISSERTATION
ZUR
ERLANGUNG DES MEDIZINISCHEN DOKTORGRADES
DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET
FREIBURG IM BREISGAU
VORGELEGT 2012
VON STEFAN MUNDER
GEBOREN IN HEIDELBERG
HTTP://D-NB.INFO/1055854126
IV
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VI
TABELLENVERZEICHNIS VIII
ABBILDUNGSVERZEICHNIS IX
1 EINLEITUNG 1
1.1 DIE NIERE 1
1.2 DER GLOMERULAERE FILTRATIONSAPPARAT 2
1.3 FOKALE SEGMENTALE GLOMERULOSKLEROSE 5
1.4 ADRIAMYCIN-INDUZIERTE FSGS IM MAUSMODELL 9
1.5 MTOR 10
1.6 DIE ROLLE VON MTORCL-INHIBITOREN IN DER THERAPIE DER FSGS UND
ANDERER
CHRONISCHER NIERENERKRANKUNGEN BEI MENSCHEN UND TIEREN 14
1.7 FRAGESTELLUNG DER ARBEIT 16
2 MATERIALIEN UND METHODEN 17
2.1 VERBRAUCHSMATERIALIEN 17
2.2 GERAETE UND SOFTWARE 18
2.3 CHEMIKALIEN 20
2.4 LOESUNGEN 21
2.5 REAGENZIEN 23
2.6 PCR-PRIMER 24
2.7 ANTIKOERPER 24
2.8 MAUSEXPERIMENTELLE METHODEN 25
2.8.1 MAUSHALTUNG, MAUSLINIEN UND VERWENDETE KREUZUNGEN 25
2.8.2 GENOTYPISIERUNG 26
2.8.2.1 DNA-ISOLIERUNG 26
2.8.2.2 POLYMERASEKETTENREAKTION 27
2.8.2.3 GELELEKTROPHORESE 28
2.9 RETROBULBAERE INJEKTION DER MAEUSE 29
2.10 URINSAMMLUNG UND ANALYSE VON ALBUMIN UND KREATININ 29
2.10.1 BESTIMMUNG VON ALBUMIN IM URIN 29
2.10.2 BESTIMMUNG VON KREATININ IM URIN 30
2.11 BLUTENTNAHME UND ANALYSE VON KREATININ UND HARNSTOFF 31
2.11.1 BESTIMMUNG VON KREATININ IM SERUM 31
2.11.2 BESTIMMUNG VON HARNSTOFF IM SERUM 32
2.12 GEWICHTSBESTIMMUNG 33
2.13 GEWEBEGEWINNUNG UND AUFARBEITUNG 33
2.13.1 PRAEPARATION DER MAEUSE UND FIXIERUNG DER NIEREN 33
V
2.13.2 PERFUSION DER NIEREN 34
2.13.3 HERSTELLUNG ENDOGENER GLOMERULI-LYSATE 35
2.13.4 QUANTITATIVE PROTEINBESTIMMUNG NACH LOWRY 36
2.14 LMMUNOBLOT 36
2.15 MIKROSKOPIE 38
2.15.1 SCHNEIDEN DER PARAFFINBLOECKE UND FAERBEN DER SCHNITTE 38
2.15.2 GLOMERULOSKLEROSE-LNDEX 38
2.15.3 SCHNEIDEN VON KRYOKONSERVIERTEM GEWEBE UND
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN 39
2.15.4 BESTIMMUNG DER PODOZYTENZAHL 40
2.15.5 QUANTIFIZIERUNG DES PS6-FAERBUNG 41
2.16 STATISTISCHE DATENANALYSE 42
3 ERGEBNISSE 43
3.1 NACHWEIS DER MTOR-HOCHREGULATION BEI DER FSGS IN HUMANEN
NIERENBIOPSIEN 43
3.2 ADRIAMYCIN-NEPHROPATHIE-MODEL IN WILDTYP-MAEUSEN 45
3.2.1 VERSTAERKTE PHOSPHORYLIERUNG VON S6 ALS ZEICHEN EINER VERMEHRTEN
MTORCL-AKTIVITAET IN DER ADRIAMYCIN-GRUPPE 45
3.2.2 ADRIAMYCIN-INJEKTION FUEHRT ZUM VERLUST VON PODOZYTEN 46
3.2.3 ENTWICKLUNG VON PROTEINURIE NACH ADRIAMYCIN-INJEKTION 47
3.3 ADRIAMYCIN-NEPHROPATHIE-MODELL IN RAPTOR
HET
P
DOZ
Y
T
-MAEUSEN 48
3.3.1 NACHWEIS DES HETEROZYGOTEN AEOPTOR-KNOCKOUTS IM WESTERNBLOT 48
3.3.2 VERSTAERKTE PHOSPHORYLIERUNG VON S6 IN DER KONTROLLGRUPPE 49
3.3.3 RAPTOR
HET PODOZ
Y
T
-MAEUSE ZEIGEN EINE NIEDRIGERE PROTEINURIE 50
3.3.4 RAPTOR
HET PODOZ
Y
T
-MAEUSE SIND BESSER VOR PODOZYTENVERLUST GESCHUETZT 50
3.3.5 RAPTOR
HETPODOZ
!
RT
-MAEUSEN ZEIGEN IM GLOMERULOSKLEROSEINDEX WENIGER FSGS-
TYISCHE HISTOLOGISCHE VERAENDERUNGEN 51
3.3.6 DAS KRANKHEITSMODELL FUEHRT IN BEIDEN VERSUCHSGRUPPEN NICHT ZUM
NIERENVERSAGEN 52
3.3.7 GEWICHTSVERLAUF. 53
4 DISKUSSION 54
4.1 ERGEBNISDISKUSSION 55
4.2 NEPHROPROTEKTION EINER GENETISCHEN MTORCL-INHIBITION AUCH IN ANDEREN
TIERMODELLEN CHRONISCHER NIERENERKRANKUNGEN 56
4.3 VOR- UND NACHTEILE DES GENETISCHEN MAUSMODELLS 56
4.4 MOEGLICHE ERKLAERUNGEN FUER DIE KONTROVERSE DATENLAGE DER
MTORCL-INHIBITION IN
MENSCH UND TIER 57
4.5 KLINISCHE IMPLIKATIONEN DER EXPERIMENTE UND AUSBLICK 58
5 ZUSAMMENFASSUNG 60
6 LITERATURVERZEICHNIS 61
7 DANKSAGUNGEN 70
7 LEBENSLAUF 71
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