Rolle endothelialer Progenitorzellen bei der perizytären Differenzierung mesenchymaler Stammzellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2014
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| Beschreibung: | 114 Bl. Ill., graph. Darst. 30 cm |
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|---|---|
| adam_text | AUS DEM DEPARTMENT CHIRURGIE
KLINIK FUER PLASTISCHE- UND HANDCHIRURGIE
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG IM BREISGAU
AERZTLICHER DIREKTOR: PROF. DR. G. B. STARK
ROLLE ENDOTHELIALER PROGENITORZELLEN BEI DER PERIZYTAEREN
DIFFERENZIERUNG MESENCHYMALER STAMMZELLEN
INAUGURAL - DISSERTATION
ZUR
ERLANGUNG DES MEDIZINISCHEN DOKTORGRADES
DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET
FREIBURG IM BREISGAU
NUR
BESCHRAENKT
FUER
DEN
AUSTAUSCH
VORGELEGT 2014
VON JULIA SILVIA PLAHA
GEBOREN IN MUELLHEIM
I
HTTP://D-NB.INFO/1055852921
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IV
INHALTSVERZEICHNIS VII
1 EINLEITUNG 10
1.1 TISSUE ENGINEERING - DEFINITION UND BEDEUTUNG 10
1.2 BLUTGEFAESSNEUBILDUNG 11
1.2.1 NEOVASKULARISATION - ANGIOGENESE UND VASKULOGENESE -
BEGRIFFSKLAERUNG 12
1.2.2 DIE BEDEUTUNG MURALER ZELLEN 14
1.2.3 MESENCHYMALE STAMMZELLEN 15
1.3 HERAUSFORDERUNGEN IM TISSUE ENGINEERING - PROBLEME DER
VASKULARISATION 17
1.3.1 BEDEUTUNG PROANGIOGENER F AKTOREN 18
1.3.2 ZELL- UND GENTHERAPEUTISCHE STRATEGIEN 20
1.3.3 ENDOTHELIALE PROGENITORZELLEN 21
1.4 FRAGESTELLUNG 25
2 MATERIAL UND METHODEN 26
2.1 ZELLKULTUREN 26
2.1.1 ISOLATION UND EXPANSION MESENCHYMALER STAMMZELLEN 26
2.1.2 SPLITTEN DER ZELLEN 27
2.1.3 CHARAKTERISIERUNG DER MESENCHYMALEN STAMMZELLEN 27
2.1.4 OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG DER MESENCHMALEN STAMMZELLEN 28
2.1.5 ISOLATION DER ENDOTHELIALEN PROGENITORZELLEN AUS PERIPHERBLUT 28
2.1.6 COATEN DER ZELLKULTURFLASCHEN MIT KOLLAGEN TYP 1 31
2.1.7 CHARAKTERISIERUNG DER ENDOTHELIALEN PROGENITORZELLEN AUS
PERIPHERBLUT 31
2.1.8 HUMANE UMBILIKALVENOESE ENDOTHELZELLEN 33
2.1.9 ENDOTHELIALE PROGENITORZELLEN DER NABELSCHNUR 33
2.1.10 HUMANE DERMALE FIBROBLASTEN 34
2.2 KRYOKONSERVIERUNG UND AUFTAUEN VON ZELLKULTUREN 35
2.2.1 ANLEGEN EINER KRYOKULTUR 35
2.2.2 EINSAAT DER ZELLEN AUS DER KRYOKULTUR 36
2.3 KOKULTIVIERUNG MIT DIREKTEM ZELLKONTAKT 36
2.3.1 ZEITKINETIK DER PERIZYTAEREN DIFFERENZIERUNG 37
2.3.2 GAP-JUNCTION-KOMMUNIKATION 37
2.3.3 BETEILIGUNG DER MAPK-KASKADE 38
VII
INHALTSVERZEICHNIS
2.3.4 NEGATIVE IMMUNOMAGNETISCHE SEPARATION 38
2.4 KOKULTIVIERUNG MIT INDIREKTEM ZELLKONTAKT 40
2.5 PROTEINANALYTISCHE METHODEN 41
2.5.1 HERSTELLUNG VON ZELLLYSATEN MIT RIPA-PUFFER 41
2.5.2 BCA - PROTEIN ASSAY ZUR QUANTITATIVEN PROTEINBESTIMMUNG 42
2.5.3 SDS - POLYACRYLAMID - GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 43
2.5.4 TRANSFER VON PROTEINEN MITTELS SEMI-DRY BLOT 47
2.5.5 WESTERN-BLOT 48
2.5.6 STRIPPEN DER MEMBRANEN 50
2.6 UNTERSUCHUNG DER DIFFERENTIELLEN GENEXPRESSION IN MSCS 51
2.6.1 ISOLATION DER RNA 51
2.6.2 RNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 52
2.6.3 DNASE 1-VERDAU UND REVERSE TRANSKRIPTION 53
2.6.4 CDNA-SYNTHESE 53
2.6.5 UNTERSUCHUNG DER GENEXPRESSION AUF RNA-EBENE MITTELS TAQMAN-REAL
TIME-PCR ....54
2.7 FAERBUNGEN 57
2.7.1 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN 57
2.7.2 VON KOSSA FAERBUNG 59
2.8 MODIFIZIERTER MATRIGEL-ASSAY 60
2.9 SCRAPE LOADING ASSAY AND DYE TRANSFER 62
2.10 STATISTISCHE AUSWERTUNG 63
3 ERGEBNISSE 64
3.1 ISOLATION UND CHARAKTERISIERUNG DER MSCS 64
3.1.1 OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG MESENCHYMALER STAMMZELLEN 66
3.2 KONTROLLGRUPPEN
.T.V
. 67
3.2.1 POSITIVKONTROLLE - MSC/HUVEC-KOKULTUR 67
3.2.2 NEGATIVKONTROLLE - MSC-MONOKULTUREN IN ECGM 68
3.3 KOKULTIVIERUNG 70
3.4 A-SMA EXPRESSION IN ABHAENGIGKEIT VON DER ZEIT 71
3.5 WEGE DER ZELLULAEREN KOMMUNIKATION 72
3.5.1 DIREKTE ZELL-ZELL-KONTAKTE 72
3.5.2 ROLLE DER GAP JUNCTION-KOMMUNIKATION 73
3.6 FUNKTIONALITAETSPRIIFUNG DES GAP JUNCTION INHIBITORS 18AGA 76
3.6.1 SCRAPE LOADING ASSAY AND DYE TRANSFER 76
3.6.2 WESTERN BLOT ANALYSE VON CONNEXIN 43 78
VIII
INHALTSVERZEICHNIS
3.7 ROLLE DES MAPK-SIGNALWEGES 79
3.8 FUNKTIONELLE EIGENSCHAFTEN DER PERIZYTAER DIFFERENZIERTEN MSCS 81
3.8.1 MODIFIZIERTER MATRIGEL-ASSAY 81
4 DISKUSSION 83
4.1 CHARAKTERISIERUNG DER VERWENDETEN ZELLPOPULATIONEN 83
4.2 INDUKTION DER PERIZYTAEREN DIFFERENZIERUNG DURCH KOKULTIVIERUNG 84
4.3 NOTWENDIGKEIT DIREKTER ZELL-ZELL KONTAKTE 86
4.4 BETEILIGUNG VON GAP JUNCTION KOMMUNIKATION 88
4.5 BETEILIGUNG DES MITOGEN ACTIVATED PROTEIN KINASE-SIGNALWEGES 89
4.6 FUNKTIONELLE EIGENSCHAFTEN PERIZYTAER DIFFERENZIERTER MSCS 90
4.7 AUSBLICK 91
5 ZUSAMMENFASSUNG 93
6 LITERATURVERZEICHNIS 95
7 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 110
8 DANKSAGUNG 112
9 LEBENSLAUF 113
10 ANHANG 114
IX
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