Hochregulierung von Lipocalin-2 in HPV-positiven Keratinozyten und spinozellulären Haut-Karzinomen:
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2014
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 1
2 EINLEITUNG 5
2.1. PAPILLOMVIREN 5
2.2. HPV
ASSOZIIERTE KARZINOME 6
2.3. HPV
UND NICHTMELANOZYTAERER HAUTKREBS 8
2.4. DIE
HAUT 11
2.5. HPV INFEKTION
DER HAUT 13
2.6. HPV
REPLIKATION 14
2.7. DIE
VIRALEN PROTEINE 15
2.7.1 E2 15
2.7.2 E6 17
2.7.3 E7 18
2.8. IDENTIFIKATION VON
LIPOCALIN-2 ALS MOEGLICHES 20
ZELLULAERES ZIELGEN VON HPV8-E7
2.9. ZIELSETZUNG 22
3 MATERIALIEN 23
3.1. BAKTERIENSTAEMME 23
3.1.1. MEDIEN 23
3.2. EUKARYONTE ZELLLINIEN 23
3.2.1. MEDIEN 24
3.3. PRIMAERE KERATINOZYTEN 24
3.3.1. MEDIEN 24
3.4. ORGANOTYPISCHE HAUTKULTUREN UND KUTANE SCCS 24
3.4.1. ORGANOTYPISCHE HAUTKULTUREN 24
3.4.2. PROBEN SPINOZELLULAERER KARZINOME 25
3.5. EXPRESSIONSVEKTOREN 25
3.5.1. PLXSN 25
3.5.2. PLXSN BASIERTE HPV-E7 EXPRESSIONSPLASMIDE 25
3.6. OLIGONUKLEOTIDE 25
3.7. ANTIKOERPER 26
3.7.1. PRIMAERE ANTIKOERPER FUER WESTERNBLOTANALYSE 26
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INHALTSVERZEICHNIS
3.7.2. SEKUNDAERE ANTIKOERPER FUER WESTERNBLOTANALYSE 26
3.7.3. PRIMAERE ANTIKOERPER FUER IMMUNFLUORESZENZ 26
3.7.4. SEKUNDAERE ANTIKOERPER FUER IMMUNFLUORESZENZ 26
3.8. PUFFER UND
LOESUNGEN FUER PROTEINGELE UND WESTERNBLOTS 27
3.9. PROTEINGROESSENSTANDARDS 28
3.10. CHEMIKALIEN UND
REAGENZIEN 28
3.11. VERBRAUCHSMATERIAL 28
3.12. KOMMERZIELLE
KITS 29
3.13. GERAETE 29
4 METHODEN 31
4.1. BAKTERIENKULTUR 31
4.1.1. TRANSFORMATION KOMPETENTER BAKTERIEN 31
4.1.2. ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA AUS BAKTERIEN 31
4.2. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 32
4.2.1. ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA AUS HUMANEN ZELLEN 32
4.2.2. REVERSE TRANSKRIPTION 33
4.2.3. DNA-ISOLIERUNG AUS SCC-PROBENGEWEBE 33
4.2.4. PRINZIP DER POLYMERASE-KETTENREAKTION 34
4.2.5. BREITSPEKTRUM-PCR ZUR DETEKTION VON 35
BETAHPV DNA
IN SCC
4.2.6. REVERSE HYBRIDISIERUNG ZUR IDENTIFIZIERUNG VON 35
KUTANEN HPV-GENOTYPEN IN SCC-PROBEN
4.3. ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 37
4.3.1. KULTIVIERUNG VON PT67 ZELLEN 37
4.3.2. GENERIERUNG VON REKOMBINANTEN RETROVIREN 37
4.3.3. INFEKTION VON PRIMAEREN KERATINOZYTEN MIT 38
REKOMBINANTEN RETROVIREN
4.3.4. INDUKTION VON KERATINZYTENDIFFERENZIERUNG MIT KALZIUM 38
4.3.5. EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN 38
4.3.6. ZELLZAHLBESTIMMUNG 39
4.4. PROTEINCHEMISCHE METHODEN 39
4.4.1. PRAEPARATION VON GESAMTZELLEXTRAKTEN 39
INHALTSVERZEICHNIS
4.4.2. SDS-POLYACRYLGELELEKTROPHORESE
4.4.3. WESTERN BLOT-ANALYSE
4.4.4. STRIPPEN EINES WESTERNBLOTS
4.4.5. ELISA-ANALYSE
4.4.6. IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG VON PARAFFINSCHNITTEN
40
40
41
41
42
5 ERGEBNISSE
S.1.HOCHREGULIERUNG VON LIPOCALIN-2 IN HPV8-E7
44
44
EXPRIMIERENDEN HUMANEN KERATINOZYTEN
5.2. LIPOCALIN-2-SPIEGEL
IN HPV-E7 EXPRIMIERENDEN 44
PRIMAEREN KERATINOZYTEN
5.3. HOCHREGULIERUNG DER
LIPOCALLN-2-SEKRETION DURCH 45
EXPRESSION VERSCHIEDENER HPV-E7
GENE IN PRIMAEREN
HUMANEN KERATINOZYTEN
5.4. INDUKTION VON
LIPOCALIN-2 DURCH KERATINOZYTEN- 46
DIFFERENZIERUNG
5.5. LIPOCALIN-2-EXPRESSION
IN ORGANOTYPISCHEN HAUTKULTUREN 48
HPV-E7 EXPRIMIERENDER PRIMAERER KERATINOZYTEN
5.6. INDUKTION VON LIPOCALIN-2
IN HPV-POSITIVEN
SPINOZELLULAEREN 49
KARZINOMEN
5.7. LIPOCALLN-2-EXPRESSION
IN SCCS ERFOLGT IN DIFFERENZIERTEM, 51
FILAGGRIN-POSLTIVEM GEWEBE
5.8. DIFFERENZIERUNG HPV8-E7-POSITIVER
KERATINOZYTEN FUEHRT ZU 51
ERHOEHTEM INTRAZELLULAEREM EISEN
6 DISKUSSION 54
7 ZUSAMMENFASSUNG 57
8 LITERATURVERZEICHNIS 58
9 ANHANG 71
9.1. VORABVEROEFFENTLICHUNG 71
10 LEBENSLAUF
72
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