Der Proteinase-aktivierte Rezeptor 2 beeinflusst die Migration von Cholangiokarzinomzellen über eine Wechselwirkung mit dem Hepatozyten-Wachstumsfaktor-Rezeptor Met:
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1. ZUSAMMENFASSUNG 1
2. EINLEITUNG 4
2.1 DAS CHOLANGIOKARZINOM 4
2.2 PROTEINASE-AKTIVIERTE REZEPTOREN (PARS) 9
2.2.1 DER PROTEINASE-AKTIVIERTE REZEPTOR 2 10
2.2.1.1 STRUKTUR 10
2.2.1.2 AKTIVIERUNGSMECHANISMUS 10
2.2.1.3.1 G-PROTEIN-KOPPLUNG 11
2.2.1.3.2 HETEROTRIMERE G-PROTEINE 12
2.2.1.4 SIGNALTRANSDUKTION 13
2.2.1.5 INAKTIVIERUNG 14
2.2.1.6 FUNKTIONEN 15
2.2.1.7 PAR2 UND KARZINOGENESE 16
2.3 DIE REZEPTORTYROSINKINASE MET 17
2.3.1 STRUKTUR 18
2.3.2 AKTIVIERUNG 20
2.3.3 SIGNALWEITERLEITUNG/SIGNALTERMINIERUNG 20
2.3.4 FUNKTIONEN 22
2.3.5 MET UND TUMORENTSTEHUNG UND -PROGRESSION 22
3. ZIELSTELLUNG 24
4. MATERIALIEN UND METHODEN 25
4.1 MATERIALIEN 25
4.1.1 CHEMIKALIEN, VERBRAUCHSMATERIALIEN 25
IX
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4.1.2 REZEPTORAGONISTEN UND -ANTAGONISTEN 29
4.1.3. PUFFER, LOESUNGEN UND ZELLKULTURMEDIEN 30
4.1.4. GERAETE 32
4.2 METHODEN 34
4.2.1 DIE CCC-PRIMAERKULTUR 787 34
4.2.1.1 KULTIVIERUNG DER ZELLEN 35
4.2.1.2 EINFRIEREN VON ZELLEN, KRYOKONSERVIERUNG 35
4.2.1.3 AUFTAUEN DER ZELLEN 36
4.2.2 ZELLZAHLBESTIMMUNG 36
4.2.3. GESAMT-RNA-ISOLATION 36
4.2.4 RT-PCR UND AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 36
4.2.5 CHEMOTAKTISCHE MIGRATION 37
4.2.6 STATISTISCHE AUSWERTUNG DER MIGRATIONSDATEN 38
4.2.7 PRAEPARATION VON CCC-787-ZELLLYSATEN 38
4.2.8 PROTEINBESTIMMUNG 39
4.2.9 DISKONTINUIERLICHE SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE).. 40
4.2.10 BESTIMMUNG VON P-MET MITTELS WESTERN BLOTTING 40
4.2.11 MEMBRAN-STRIPPING UND MET-BLOTTING 41
4.2.12 QUANTIFIZIERUNG DER BLOT-DATEN 41
5. ERGEBNISSE 42
5.1 PAR2-NACHWEIS IN CCC-787-ZELLEN 42
5.2 DIE SERINPROTEINASE TRYPSIN UND DAS SELEKTIV PAR
2
-AKTIVIERENDE PEPTID
2-FUROYL-LIGRLO-NH
2
STIMULIEREN DIE MIGRATION VON CCC-787-ZELLEN, DER PAR
2
-
ANTAGONIST P2PAL-18S HEMMT DIESEN EFFEKT 43
5.3 EINE INHIBIERUNG DER RTK MET HEMMT DIE TRYPSIN- SOWIE 2-FUROYL-
LIGRLO-NH
2
-INDUZIERTE STEIGERUNG DER MIGRATION VON CCC-787-ZELLEN 45
X
5.4 TRYPSIN UND DAS PAR
2
-AP 2-FUROYL-LIGRLO-NH
2
INDUZIEREN IN CCC-787-
ZELLEN EINE AKTIVIERUNG VON MET 46
6. DISKUSSION 48
7. SCHLUSSFOLGERUNG 52
8. LITERATURVERZEICHNIS 53
ANHANG 78
XI
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