Onkovirotherapie: Sicherheit Suizidgen-kodierender Masernviren und Tumor-Stammzell-Targeting:
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Veröffentlicht: |
2013
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Beschreibung: | Virale Onkolyse: Sicherheit Suizidgen-kodierender Masernviren und Tumor-Stammzell-Targeting |
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adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 GASTROINTESTINALE TUMOREN 1
1.2 ONKOLYTISCHE VIREN ALS NEUE THERAPIEFORM 1
1.3 DAS MASERNVIRUS 3
1.3.1 DIE MASERN 3
1.3.2 MV-KLASSIFIKATION (MORBILLIVIREN) 4
UJ MV-STRUKTUR UND -MOLEKULARBIOLOGIE 5
1.3.4 ATTENUATION UND REZEPTORNUTZUNG DES MV 7
1.4 DAS MASERNVIRUS
IN DER ONKOLYTISCHEN VIROTHERAPIE 9
1.4.1 ENTWICKLUNGSSTAND UND KLINISCHE STUDIEN 10
1.4.2 TECHNOLOGISCHE OPTIMIERUNG DER ONKOLYSE 11
1.5 MV-SCD 13
1.5.1 5-FC CD 5-FU SYSTEM 14
1.5.2 TUMORIZIDE AKTIVITAET VON MV-SCD 14
1.5
J MV-CD133-SCD 15
1.6 ZIELSETZUNG DER
ARBEIT 16
2 MATERIAL UND METHODEN 18
2.1 MATERIALIEN 18
2.1.1 GERATE 18
2.1.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 19
2.1.3 MEDIEN, LOESUNGEN, CHEMIKALIEN 19
2.1.4 PUFFER 21
2.1.5 KITS . 21
2.1.6 ENZYME, PROTEINE 22
2.1.7 PLASMIDE, PRIMER 22
2.1.8 ANTIKOERPER 22
2.1.9 ZELLEN 22
2.2 METHODEN 23
2.2.1 ZELLKULTUR 23
2.2.2 ISOLATION PRIMAERER ZELLEN 23
2.2.3 VIREN 24
2.2.4 TITRATIONEN 25
2.2.5 FSRBUNGEN FUER DIE DURCHFLUSSZYTOMETRIE 25
2.2.6 IMMUNFLUORESZENZ 25
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INHALTSVERZEICHNIS
2.2.7 STUDIEN AN MAEUSEN 26
2.2.8 LAPAROTOMIE FUER DIE LEBER- ODER MILZINJEKTIONEN 27
2.2.9 RHESUSAFFEN (
MACACA MTILATTA)
UND STUDIENAUFBAU 28
2.2.10 MV-ANTIKSRPER-ELISA 28
2.2.11 WESTERN BLOT 29
2.2.12 MESSUNGEN DER HSMATOLOGIE 30
2.2.13 MESSUNGEN DER KLINISCHEN CHEMIE 30
2.2.14 GERINNUNG 31
2.2.15 ZYTOKINE 31
2.2.16 PATHOLOGIE UND HISTOLOGIE 32
2.2.17 IMMUNHISTOLOGIE 33
2.2.18 RNA-ISOLATION 34
2.2.19 IN-VITRO TRANSKRIPTION 34
2.2.20 MV-N QUANTITATIVE REAL TIME REVERSE TRANSCRIPTASE PCR 35
2.2.21 PC-AUSWERTUNG 37
3 ERGEBNISSE 38
3.1 MV-LNFIZIERBARKEIT PRIMAERER ZELLEN DER TIERMODELLE 38
3.1.1 EXPRESSION VON CD46 UND GFP-REPORTERGEN 39
3.1.2 NACHWEIS MV-KODIERTER PROTEINE INFIZIERTER HEPATOZYTEN DURCH
IMMUNFLUORESZENZ 42
3.1.3 ETABLIERUNG DER QRT-PCR FUER DIE BIODISTRIBUTIONSSTUDIEN 43
3.2 AUFBAU DER
IN VIVO
STUDIEN 47
3.2.1 INTRAHEPATISCHE ODER INTRAPERITONEALE MV-SCD-INJEKTION IN
TRANSGENE MAUSE... 47
3.2.2 MEHRMALIGE IP-INJEKTION VON MV-SCD IN TRANSGENE MAUSE 48
3.2.3 IH-LNJEKTION VON MV-SCD IN RHESUSAFFEN 49
3.3 ERHOBENE DATEN ZUR MV BIODISTRIBUTION SO
3.3.1 MV-SCD BIODISTRIBUTION IN TRANSGENEN MAUSEN NACH EINMALIGER DOSIS
50
3.3.2 MV-GFP BIODISTRIBUTION IN TRANSGENEN MAUSEN 52
333
MV-SCD BIODISTRIBUTION IN RHESUSAFFEN 53
3.4 MV-SCD AUSSCHEIDUNG 54
3.4.1 AUSSCHEIDUNG VON MV-SCD DURCH TRANSGENE MAEUSE 55
3.4.2 AUSSCHEIDUNG VON MV-SCD DURCH RHESUSAFFEN 55
3.5 ANALYSE DER MV-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPER IN SEREN 57
3.5.1 MV-N ANTIKOERPER-KINETIK 57
3.5.2 MV-SCD ANTIKOERPER-INDUKTION 58
INHALTSVERZEICHNIS
3.6 KLINISCHE BEFUNDE NACH
MV-SCD-BEHANDLUNG 60
3.6.1 KLINISCHE BEFUNDE AN TRANSGENEN MAEUSEN NACH EINMALIGER DOSIS 60
3.6.2 KLINISCHE BEFUNDE AN TRANSGENEN MSUSEN NACH MEHRMALIGER DOSIS 60
3.6.3 KLINISCHE BEFUNDE AN RHESUSAFFEN 61
3.7 BLUTANALYSEN: HAEMATOLOGIE, KLINISCHE CHEMIE
UND GERINNUNG 62
3.7.1 HAEMATOLOGIE VON TRANSGENEN MAEUSEN NACH EINMALIGER DOSIS 63
3.7.2 HAEMATOLOGIE VON TRANSGENEN MAEUSEN NACH MEHRMALIGER DOSIS 64
3.7.3 HAEMATOLOGIE VON RHESUSAFFEN 65
3.7.4 KLINISCHE CHEMIE VON TRANSGENEN MAEUSEN 66
3.7.5 KLINISCHE CHEMIE VON RHESUSAFFEN 66
3.7.6 GERINNUNG VON TRANSGENEN MAEUSEN UND RHESUSAFFEN 67
3.8 ZYTOKININDUKTION 68
3.8.1 ZYTOKINE VON TRANSGENEN MAEUSEN 68
3.8.2 ZYTOKINE VON RHESUSAFFEN 69
3.9 PATHOLOGIE UND HISTOLOGIE 71
3.9.1 PATHOLOGIE VON TRANSGENEN MAEUSEN NACH EINMALIGER DOSIS 71
3.9.2 PATHOLOGIE VON TRANSGENEN MAEUSEN NACH MEHRMALIGER DOSIS 72
3.9.3 PATHOLOGIE VON RHESUSAFFEN 74
3.10 FAZIT 75
3.11 EINSATZ VON
SCD ZUR EFFIZIENZSTEIGERUNG
VON MV-CD133
- EIN PILOTEXPERIMENT 76
3.11.1 ERZEUGUNG VON MV-CD133-SCD 76
3.11.2 CD133-SPEZIFITAET UND SCD-FUNKTIONALITAET 77
3.11.3 ORTHOTOPES LEBERTUMORMODELL FUER DIE MV-CD133-SCD-TESTUNG
IN VIVO
79
4 DISKUSSION 83
4.1 TIERMODELLE FUER MV-SICHERHEITSSTUDIEN 83
4.2 VERGLEICHENDE SICHERHEITSSTUDIE IN TRANSGENEN MAEUSEN UND RHESUSAFFEN
85
4.2.1 BIODISTRIBUTION VON M V-SCD 85
4.2.2 AUSSCHEIDUNG VON MV-SCD 87
4.2J MV-IMMUNISIERUNG UND ANTIKSRPERINDUKTION GEGEN DAS
SUIZIDGEN-PRODUKT 88
4.2.4 SICHERE EINMAL-INJEKTION VON MV-SCD IN ZWEI TIERMODELLEN 89
4.2.5 ADVERSE EFFEKTE NACH MULTIPLEN MV-SCD INJEKTIONEN 92
4.3 SUIZIDGENBASIERTE EFFIZIENZVERSTAERKUNG DES MV-CD133-
TUMOR-STAMMZELL-TARGETINGS 93
4.4 AUSBLICK 94
5 ZUSAMMENFASSUNG 97
6 SUMMARY 99
INHALTSVERZEICHNIS
7 REFERENZEN 101
8 ABKUERZUNGEN 107
9 ANHANG 110
10 DANKSAGUNGEN 114
|
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