Synthese und Charakterisierung von multivalenten peptidbasierten Liganden als biomolekulare Erkennungseinheit für Influenzaviren:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2014
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS I
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IV
ABKUERZUNG DER AMINOSAEUREN VI
ABBILDUNGSVERZEICHNIS VII
TABELLENVERZEICHNIS X
1 EINLEITUNG UND ZIELSETZUNG 1
2 GRUNDLAGEN 3
2.1 INFLUENZA A VIREN 3
2.1.1 DAS OBERFLAECHENPROTEIN HAEMAGGLUTININ 4
2.1.2 VIRUSDIAGNOSTIK 6
2.2 PEPTIDE ALS MOLEKULARE ERKENNUNGSEINHEIT 8
2.3 MODELLSYSTEM 9
2.4 LINKER 10
2.4.1 LINEARE LINKER 10
2.4.2 CYCLISCHE PEPTIDE 11
2.4.3 VERZWEIGTE LINKER - DENDRIMERE 11
2.4.4 FESTPHASENPEPTIDSYNTHESE 14
2.4.5 CLICK-CHEMIE 19
2.5 INTERAKTIONSANALYSE DER PEPTID-LINKER-STRUKTUR MITTELS
OBERFLAECHENPLASMON-
RESONANZSPEKTROSKOPIE 21
3 AUFGABENSTELLUNG 27
4 MATERIAL UND METHODEN 29
4.1 VERWENDETE ANTIKOERPER UND VIRENMATERIAL 29
4.2 VERWENDETE CHEMIKALIEN 29
4.3 VERWENDETE MATERIALIEN UND GERAETE 31
4.4 VERWENDETE PUFFER 32
4.5 METHODEN 33
4.5.1 MANUELLE FESTPHASENSYNTHESE ., 33
4.5.1.1 PEPTIDSYNTHESE 33
4.5.1.2 DENDRON-SYNTHESE 34
4.5.1.3 SYNTHESE DER PEPTIDE MIT N-TERMINALER AZID-GRUPPE 35
4.5.1.4 VERBINDUNG VON DENDRON UND PEPTID - 1,3-DIPLOARE CYCLOADDITION -
KONVERGENTE METHODE 36
4.5.1.5 ABSPALTUNG VOM SYNTHESEHARZ UND AUFARBEITUNG 36
HTTP://D-NB.INFO/1053548214
INHALTSVERZEICHNIS II
4.5.2 REINIGUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER PEPTID-LINKER-STRUKTUR 37
4.5.2.1 ANALYSE MITTELS LC-MS/MS 37
4.5.2.2 PRAEPARATIVE AUFREINIGUNG 38
4.5.2.3 RAMAN SPEKTROSKOPIE 38
4.5.3 MICROARRAY - BINDUNGSASSAY MIT MIMOTOPPEPTIDEN UND ANTIKOERPER 39
4.5.4 SPR-METHODE ZUR INTERAKTIONSANALYSE DER PEPTID-LINKER-STRUKTUR 39
4.5.4.1 IMMOBILISIERUNG DES LIGANDEN AUF DEM SPR-CHIP 39
4.5.4.2 REGENERATIONSCOUT MIT DEM PROTEIN HA 41
4.5.4.3 BINDUNGSSTUDIEN AM MODELLSYSTEM 41
4.5.4.4 HEMMTEST MIT FLUORESCEIN 41
4.5.4.5 SPEZIFITAETSTEST DER PEPTID-DENDRON-BINDUNG 42
4.5.4.6 BINDUNGSSTUDIEN MIT VIRENMATERIAL 42
4.5.4.7 HEMMTEST MIT SIALYLLACTOSE 42
4.5.5 SPR-BINDUNGSSTUDIEN MIT PEPTIDAMPHIPHILEN 43
4.5.5.1 BIOFUNKTIONALISIERUNG DER SPR-CHIP-OBERFLAECHE MIT HA 43
4.5.5.2 VERIFIZIERUNG DER FUNKTIONALISIERUNG MITTELS SPEZIFISCHER
ANTIKOERPER 43
4.5.5.3 BINDUNGSTEST FUER MULTIVALENTE BINDUNGSPARTNER 43
4.5.5.4 HEMMTEST MIT PEPTIDEN 44
4.5.6 CHARAKTERISIERUNG DER MIZELLEN 44
4.5.6.1 OBERFLAECHENSPANNUNGSMESSUNGEN ZUR BESTIMMUNG DER KRITISCHEN
MIZELLBILDUNGSKONZENTRATION (CMC) 44
4.5.6.2 DYNAMISCHE LICHTSTREUUNG (DLS) 45
5 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 46
5.1 MANUELLE FESTPHASENPEPTIDSYNTHESE 46
5.2 DENDRON-SYNTHESE 48
5.3 SYNTHESE DER AZIDO-PEPTIDE 53
5.4 VERKNUEPFUNG DES DENDRONS MIT DEN PEPTIDEN - 1,3-DIPLOARE
CYCLOADDITION 54
5.4.1 SYNTHESE DES PEPTID-DENDRONS DER ERSTEN GENERATION 54
5.4.2 SYNTHESE DES PEPTID-DENDRONS DER ZWEITEN GENERATION 60
5.4.3 DARSTELLUNG EINES BIFUNKTIONALEN PEPTID-DENDRONS 62
5.5 MICROARRAY ALS SCREENINGMETHODE FUER POTENTIELLE LINKER-ELEMENTE 66
5.6 KINETISCHE BINDUNGSSTUDIEN 70
5.6.1 SPR-BINDUNGSSTUDIEN AM MODELLSYSTEM 70
5.6.1.1 IMMOBILISIERUNG VON PEPTID-DENDREN AUF EINEM CM5-SENSOR-CHIP 70
5.6.1.2 BINDUNGSVERHALTEN DES ANTIKOERPERS AN DAS PEPTID-DENDRON 72
5.6.1.3 HEMMUNG DER ANTIKOERPERBINDUNG DURCH FLUORESCEIN 76
5.6.1.4 BINDUNGSVERHALTEN DES PEPTID-DENDRONS GEGENUEBER ANDEREN
PROTEINEN 78
INHALTSVERZEICHNIS III
5.6.1.5 STABILITAET DER MODIFIZIERTEN SENSORCHIPS 79
5.6.1.6 KONTROLLEXPERIMENT ZUR CHARAKTERISIERUNG DER
PEPTID-DENDRON-BINDUNG 79
5.6.2 SPR-BINDUNGSSTUDIEN AM INFLUENZAVIRUS 81
5.6.2.1 BINDUNGSVERHALTEN VON HA AN DAS PEPTID-DENDRON 81
5.6.2.2 BINDUNGSSTUDIEN MIT INTAKTEM VIRENMATERIAL 84
5.6.2.3 HEMMUNG DER HA-BINDUNG DURCH SIALYLLACTOSE 86
5.6.3 SPR-BINDUNGSSTUDIEN ZUR UEBERPRUEFUNG EINES BIFUNKTIONALEN
PEPTID-DENDRON ALS
REZEPTOREINHEIT FUER ZWEI VERSCHIEDENE ANALYTEN 88
5.7 PEPTIDAMPHIPHILE ALS MULTIVALENTE BINDUNGSPARTNER IN LOESUNG 89
5.7.1 SPR-BINDUNGSSTUDIE MIT PEPTIDAMPHIPHILEN 91
5.7.1.1 MODIFIZIERUNG UND VERIFIZIERUNG DER SENSORCHIP-OBERFLAECHE 91
5.7.1.2 SPR-METHODE MIT HAEMAGGLUTININ-BINDENDEN PEPTIDAMPHIPHILEN ALS
MULTIVALENTE
BINDUNGSPARTNER 92
5.7.1.3 HEMMTEST 95
5.7.2 CHARAKTERISIERUNG DER PEPTIDAMPHIPHILEN 96
5.7.2.1 OBERFLAECHENSPANNUNGSMESSUNGEN ZUR BESTIMMUNG DER CMC 96
5.7.2.2 DYNAMISCHE LICHTSTREUUNG ZUR PARTIKELGROESSENBESTIMMUNG 99
6 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 101
7 ANHANG 104
A1 BERECHNUNGSGRUNDLAGEN 104
A2 ZUSAMMENFASSUNG DER ANALYSENERGEBNISSE 104
A3 PRAEPARATIVE AUFREINIGUNG DER PEPTID-DENDREN 119
A4 RAMAN-ANALYSEN 120
A5 MICROARRAY-UNTERSUCHUNGEN 122
A6 KURVENANPASSUNG DER SPR-BINDUNGSKURVEN VON H5 AN DAS PEPTID CS1,
PEPTID-DENDRON
(12) UND (15) 123
A7 SPR-BINDUNGSSTUDIEN MIT PEPTIDAMPHIPHILEN ALS MULTIVALENTE
BINDUNGSPARTNER FUER H1
UND H3 124
8 LITERATURVERZEICHNIS 125
VEROEFFENTLICHUNGEN ZUM THEMA DER DISSERTATION 137
DANKSAGUNG 138
EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 139
|
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