Untersuchungen über den Einfluss des Tyrosinkinaseinhibitors Dasatinib auf die Funktion von T-Zellen und aus Monozyten generierten Dendritischen Zellen:
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2014
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|---|---|
| adam_text | UNTERSUCHUNGEN UEBER
DEN EINFLUSS
DES
TYROSINKINASEINHIBITORS
DASATINIB AUF DIE FUNKTION
VON T-ZELLEN
UND AUS
MONOZYTEN
GENERIERTEN DENDRITISCHEN ZELLEN
STUDIES ON THE EFFECT OF THE TYROSINE-KINASE INHIBITOR DASATINIB ON
FUNCTION OF T CELLS AND MONOCYTE-DERIVED DENDRITIC CELLS
DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES
NATURWISSENSCHAFTLICHEN DOKTORGRADES
DER GRADUATE SCHOOL
OF LIFE SCIENCES,
JULIUS-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET WUERZBURG,
KLASSE INFECTION AND
IMMUNITY
VORGELEGT VON
THOMAS NERRETER
AUS
SCHWEINFURT
WUERZBURG, 2014
HTTP://D-NB.INFO/1054708169
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 6
SUMMARY 8
1. EINLEITUNG 10
1.1.
TYROSINKINASEN 10
1.1.1. KINASEN DER
SRC-FAMILIE (SFKS) 10
1.2.
GESCHICHTE DER TYROSINKINASEINHIBITOREN 12
1.3. DASATINIB 13
1.3.1.
STRUKTUR UND ENTWICKLUNG 13
1.3.2. KLINISCHE EINSATZGEBIETE 13
1.3.3. WIRKUNG AUF IMMUNZELLEN 14
1.4. DAS GLUCOCORTICOID
DEXAMETHASON 15
1.5. T-ZELLEN 16
1.5.1. DEFINITION 16
1.5.2. SUBSETS UND
FUNKTIONEN 17
1.5.3. SRC-KINASEN
IN T-ZELLEN 18
1.6. DENDRITISCHE ZELLEN 19
1.6.1. DEFINITION 19
1.6.2. ARTEN VON DENDRITISCHEN ZELLEN 20
1.6.3. SRC-KINASEN
IN DENDRITISCHEN ZELLEN 22
1.6.4. CCR7-ABHAENGIGE
MIGRATION VON DENDRITISCHEN ZELLEN 23
1.7. ZIELSETZUNG
DER ARBEIT 24
2. MATERIAL UND METHODEN 26
2.1. MATERIAL 26
2.1.1. GERAETE
UND ZUBEHOER 26
2.1.2. VERBRAUCHSMATERIAL 27
2.1.3. COMPUTERPROGRAMME 29
2.1.4. ALLGEMEINE CHEMIKALIEN 29
2.1.5. MEDIKAMENTE 30
2.1.6. ZELLKULTURMEDIEN UND ZUSAETZE 30
2.1.7. REAKTIONSSETS
(KITS) 31
2.1.8. ANTIKOERPER UND ISOTYPEN FUER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 31
INHALTSVERZEICHNIS
2.1.9. ANTIKOERPER FUER WESTERN BLOT 33
2.1.10. SONSTIGE ANTIKOERPER UND ISOTYPEN 33
2.1.11. REAGENZIEN UND
PUFFER FUER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 33
2.1.12. REAGENZIEN UND
PUFFER FUER WESTERNBLOT 35
2.2. METHODEN 37
2.2.1. ZELLKULTUR 37
2.2.1.1. KRYO-KONSERVIERUNG
VON ZELLEN 37
2.2.1.2. ZELLZAHLBESTIMMUNG 37
2.2.1.3.
ISOLIERUNG MONONUKLEAERER ZELLEN DURCH
FICOLL-DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION 37
2.2.1.4. GEWINNUNG
UND KULTIVIERUNG PRIMAERER T-ZELLEN 38
2.2.1.5. GEWINNUNG
UND KULTIVIERUNG PRIMAERER MONOZYTEN UND GENERIERUNG VON REIFEN MODCS. 39
2.2.1.6. CO-KULTIVIERUNG
VON MODCS UND
T-ZELLEN 39
2.2.1.7. APPLIKATION VON PHARMAKOLOGISCHEN INHIBITOREN UND ANDEREN
SUBSTANZEN 40
2.2.2. DURCHFLUSSZYTOMETRIE 41
2.2.2.1. FAERBUNG
VON OBERFLAECHENMARKERN 41
2.2.2.2. FAERBUNG
INTRAZELLULAERER ZYTOKINE UND OBERFLAECHENMARKER IN VIRUSSPEZIFISCHEN
T-ZELLEN
.. 42
2.2.2.3. FAERBUNG
INTRAZELLULAERER ZYTOKINE UND OBERFLAECHENMARKER IN DER CO-KULTUR 42
2.2.2.4. APOPTOSEMESSUNG
MITTELS ANNEXIN V 7-AAD-FAERBUNG 43
2.2.2.5. MESSUNG
DER PROLIFERATION MITTELS CFSE-FAERBUNG 43
2.2.2.6. MESSUNG
DER PHAGOZYTOSEAKTIVITAET DURCH AUFNAHME VON FITC-DEXTRAN-BEADS 43
2.2.2.7. ANALYSE DES
MIGRATIONSVERHALTENS IM TRANSWELL-ASSAY 44
2.2.3. WESTERN BLOT-ANALYSE 44
2.2.3.1. PROTEINEXTRAKTION UND KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 44
2.2.3.2. ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON PROTEINEN DURCH SDS-PAGE 45
2.2.3.3. PROTEINTRANSFER AUF NITROZELLULOSEMEMBRAN 45
2.2.3.4. ANTIGEN-DETEKTION MITTELS HRP-GEKOPPELTER ANTIKOERPER 46
2.2.4. PHOSPHO-IMMUNORECEPTOR ARRAY 46
2.2.5. MESSUNG
DER ZYTOKINSEKRETION DURCH ELISA 47
2.2.6. STATISTISCHE
AUSWERTUNG 48
3. ERGEBNISSE 49
3.A. UNTERSUCHUNG SYNERGISTISCHER EFFEKTE
VON DASATINIB
UND DEXAMETHASON
AUF T-ZELLEN 49
3.A.I. EFFEKTE DER MEDIKAMENTENKOMBINATION AUF DIE T-ZELL-AKTIVIERUNG 49
3.A.2. AUSWIRKUNGEN AUF
DIE FRUEHE SIGNALTRANSDUKTION 52
3.A.3. DEXAMETHASON UND
DASATINIB STOEREN ADDITIV DIE T-ZELL-PROLIFERATION 53
INHALTSVERZEICHNIS
3.A.4. WEDER DEXAMETHASON NOCH DASATINIB FUEHREN ZU ERHOEHTEN
APOPTOSERATEN 55
3.A.5. NAIVE
T-ZELLEN REAGIEREN
SENSITIVER ALS GEDAECHTNIS-T-ZELLEN
AUF DIE
MEDIKAMENTENKOMBINATION 56
3.A.6. EINE
KOMBINATION AUS DEXAMETHASON UND
DASATINIB VERRINGERT DIE PROLIFERATION VON VIRUS
SPEZIFISCHEN CD8
+
T-ZELLEN 58
3.A.7. KEINE KOMBINATORISCHE WIRKUNG AUF ZYTOKIN-PRODUKTION UND
DEGRANULATION VON VIRUS
SPEZIFISCHEN CD8
+
T-ZELLEN 60
3.B. UEBER DEN
EINFLUSS VON DASATINIB
AUF DENDRITISCHE
ZELLEN 63
3.B.I. EINFLUSS VON DASATINIB AUF DIE REIFUNG
VON MODCS 63
3.B.2. DASATINIB HAT
KEINEN EINFLUSS AUF
DIE APOPTOSE- ODER NEKROSERATEN VON MODCS 65
3.B.3. DASATINIB
HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE AUFNAHME VON FITC-DEXTRAN-BEADS 66
3.B.4. DER EINFLUSS VON
DASATINIB AUF DIE ZYTOKINSEKRETION 68
3.B.5. EINE VORBEHANDLUNG
MIT DASATINIB HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE
FAEHIGKEIT, CMV-SPEZIFISCHE
ANTWORTEN IN CD8
+
T-ZELLEN ZU INDUZIEREN 69
3.B.6. DASATINIB VERSTAERKT DIE MIGRATION VON MODCS
IN VITRO
70
3.B.7. DASATINIB
HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE EXPRESSION VON
CCR7 71
3.B.8. DIE MIGRATIONSSTEIGERUNG DURCH DASATINIB ERFOLGT DURCH HEMMUNG
VON SFKS 72
3.B.9. DASATINIB BEHINDERT DIE PHOSPHORYLIERUNG DER INHIBITORISCHEN
IMMUNREZEPTOREN SIGLEC-3 UND
SIGLEC-9 73
3.B.10. BLOCKIERUNG
VON SIGLEC-9
ODER SIGLEC-3 FUEHRT ZU EINER STEIGERUNG DER MIGRATION VON MODCS
74
3.B.11. BLOCKIERUNG
VON SIGLEC-9
MIT EINEM SPEZIFISCHEN BLOCKIERENDEN ANTIKOERPER FUEHRT ZU EINER
DEPHOSPHORYLIERUNG VON SIGLEC-9, SIGLEC-3
UND SHP-2 76
4. DISKUSSION 78
4.A. SYNERGISTISCHE EFFEKTE
VON DASATINIB
UND
DEXAMETHASON IN T-ZELLEN 78
4.B. DER EINFLUSS VON
DASATINIB AUF
DENDRITISCHE ZELLEN 83
5. LITERATURVERZEICHNIS 92
6. ANHANG 114
6.1. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 114
6.2. EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNG/AFFIDAVIT 119
6.3. DANKSAGUNG 120
6.4. PUBLIKATIONSLISTE 121
6.5. CURRICULUM
VITAE 122
|
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| spelling | Nerreter, Thomas 1986- Verfasser (DE-588)1053849206 aut Untersuchungen über den Einfluss des Tyrosinkinaseinhibitors Dasatinib auf die Funktion von T-Zellen und aus Monozyten generierten Dendritischen Zellen von Thomas Nerreter Studies on the effect of the tyrosine-kinase inhibitor dasatinib on function of T cells and monocyte-derived dendritc cells 2014 122 Bl. graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Zsfassung in dt. und engl. Sprache Würzburg, Univ., Diss., 2014 Dendritische Zelle (DE-588)4313846-9 gnd rswk-swf T-Lymphozyt (DE-588)4127387-4 gnd rswk-swf Dexamethason (DE-588)4149424-6 gnd rswk-swf Protein-Tyrosin-Kinasen (DE-588)4409305-6 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Dendritische Zelle (DE-588)4313846-9 s Dexamethason (DE-588)4149424-6 s Protein-Tyrosin-Kinasen (DE-588)4409305-6 s T-Lymphozyt (DE-588)4127387-4 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:20-opus-99477 https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:20-opus-99477 Resolving-System kostenfrei Volltext DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=027425271&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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