Angiogene Wirkmechanismen von rekombinantem aktiviertem Protein C - Am Beispiel von Vascular Endothelial Growth Factor-C, Leptin und Angiopoietin-2:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen
VVB Laufersweiler Verlag
2013
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| Schlagworte: | |
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| Beschreibung: | VII, 153 S. Ill., graph. Darst. |
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Datensatz im Suchindex
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
KAPITEL 1: EINLEITUNG
1.1 ANGIOGENESE 14
1.1.1 UNTERSCHIEDE ZWISCHEN VASKULOGENESE, ANGIOGENESE UND ARTERIOGENESE
14
1.1.2 ANGIOGENESEFAKTOREN 16
1.1.3 ENDOGENE HEMMSTOFFE DER ANGIOGENESE 17
1.1.4 ANGIOGENESE-ASSOZIIERTE KRANKHEITEN UND THERAPIEANSAETZE 18
1.2 AKTIVIERTES PROTEIN C (APC) 20
1.2.1 ANTIKOAGULATORISCHE WIRKUNG VON A P C 20
1.2.2 PROFIBRINOLYTISCHE WIRKUNG VON A P C 22
1.2.3 INDIREKTE UND DIREKTE ANTI-INFLAMMATORISCHE WIRKUNG VON A P C 2 3
1.2.4 ANTI-APOPTOTISCHE UND PROLIFERATIONSSTEIGERNDE WIRKUNGEN VON A P C
24
1.2.5 REZEPTOREN FUER APC 25
1.2.6 A P C IN DER SEPSISBEHANDLUNG UND WEITERE POTENTIELLE INDIKATIONEN
26
1.3 ENDOTHELIALE PROGENITORZELLEN (EPCS) 28
1.3.1 ABSTAMMUNG DER EPCS 28
1.3.2 ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER EPCS 28
1.3.3 MEDIZINISCHE BEDEUTUNG DER EPCS 30
1.4 VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR C (VEGF-C) 31
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS II
1.5 LEPTIN 3 2
1.6 ANGIOPOIETIN-2 (ANG-2) 3 4
1.7 THROMBOSPONDIN-2 (TSP-2) 3 6
1.8 PLATELET FACTOR-4 (PF-4) 3 7
1.9 INTERFERON -Y ( I F N Y ) 3 8
1.10 FRAGESTELLUNG DER WISSENSCHAFTLICHEN ARBEIT 4 0
KAPITEL 2: MATERIAL UND METHODEN
2.1 ZELLKULTUR 41
2.1.1 ENDOTHELIALE PROGENITORZELLEN (EPCS) 4 1
2.1.1.1 ISOLIERUNG VON EPCS AUS BUFFY COATS 41
2.1.1.2 KULTIVIERUNG VON EPCS 4 3
2.1.1.3 DURCHFUEHRUNG DER EPC-EXPERIMENTE : 4 3
2.1.2 HUMAN UMBILICAL VEIN ENDOTHELIAL CELLS (HUVECS) 4 4
2.1.2.1 ZELLISOLIERUNG UND ERSTELLUNG EINER HUVEC-PRIMAERKULTUR 4 4
2.1.2.2 KULTIVIEREN UND PASSAGIEREN VON HUVECS 4 5
2.1.2.3 DURCHFUHRUNG DER HUVEC-EXPERIMENTE 4 6
2.2 UNTERSUCHUNG DER ZELLKULTUREN A U F MYKOPLASMEN 4 7
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS III
2.3 UNTERSUCHUNG DER EPCS MIT DEM FLUORESZENZ-MIKROSKOP 4 8
2.4 FACS-ANALYSE (FLUORESCENCE-ACTIVATED CELL SORTING) VON EPCS UND
HUVECS 50
2.5 ZELLZAEHLUNGEN 52
2.5.1 ZELLZAEHLUNG DER KULTIVIERTEN EPCS 52
2.5.2 ZELLZAEHLUNG DER KULTIVIERTEN HUVECS 53
2.6 REVERSE-TRANSKRIPTASE POLYMERASE KETTENREAKTION (RT-PCR) 54
2.6.1 PRINZIP DER RT-PCR 54
2.6.2 STIMULATIONSBEDINGUNGEN BEI DEN RT-PCR-VERSUCHEN 56
2.6.3 RNA-EXTRAKTION UND MESSUNG DER RNA-KONZENTRATION 56
2.6.4 REVERSE TRANSKRIPTION 58
2.6.5 POLYMERASE KETTENREAKTION 58
2.6.6 GELELEKTROPHORESE 61
2.6.7 DENSITOMETRIE 62
2.7 QUANTITATIVE PCR (QPCR) IN VITRO KULTIVIERTER EPCS 6 2
2.7.1 PRINZIP DER Q P C R UND UNTERSCHIEDE ZUR TRADITIONELLEN PCR 62
2.7.2 DIE AA C(- METHODE 6 4
2.7.3 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG UND EFFIZIENZ DER QUANTITATIVEN PCR 65
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS IV
2.8 SUPER ARRAYS ANGIOGENESIS UND STEM CELLS 6 7
2.8.1 PRINZIP DES SUPER ARRAYS 6 7
2.8.2 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG DER SUPER ARRAYS 6 8
2.9 ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAYS (ELISAS) AUS EPC- UND
HUVECUEBERSTAENDEN 6 9
2.9.1 VEGF-C IMMUNOASSAY 70
2.9.2 TSP-2 IMMUNOASSAY 71
2.9.3 PF-4 IMMUNOASSAY 72
2.9.4 IFN-GAMMA IMMUNOASSAY 72
2.10 MATERIAL 74
2.10.1 KULTURMEDIEN UND ZUSAETZE 74
2.10.2 REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN 75
2.10.3 ANTIKOERPER 77
2.10.4 GENSPEZIFISCHE PRIMER 78
2.10.5 SUPER ARRAYS 79
2.10.6 KOMMERZIELL ERHAELTLICHE REAKTIONSKITS 79
2.10.7 VERBRAUCHSMATERIALIEN 80
2.10.8 GERAETE 81
2.10.9 COMPUTERPROGRAMME 82
2.10.10 STATISTIK 82
IMAGE 5
INHALTSVERZEICHNIS
V
KAPITEL 3: ERGEBNISSE
3.1 MORPHOLOGIE UND EIGENSCHAFTEN DER ISOLIERTEN ZELLKULTUREN 8 3
3.1.1 ZELLMORPHOLOGIE VON HUVECS 83
3.1.2 ZELLMORPHOLOGIE VON EPCS 84
3.1.3 NACHWEIS DER MYKOPLASMENFREIHEIT 84
3.1.4 LIPOPROTEIN-AUFNAHME UND LEKTIN-BINDUNG DER FICOLL-ISOLIERTEN
ZELLEN 85
3.1.5 CHARAKTERISIERUNG VON EPCS UND HUVECS MITTELS FACS-ANALYSE 87
3.2 WIRKUNG VON REKOMBINANTEM HUMANEM APC (RHAPC) A U F DIE
ZELLPROLIFERATION VON EPCS UND HUVECS 91
3.2.1 WIRKUNG VON RHAPC A U F DIE ZELLPROLIFERATION VON EPCS 91
3.2.2 WIRKUNG VON UEBERSTAENDEN RHAPC-STIMULIERTER EPCS A U F DIE
ZELLPROLIFERATION
VON HUVECS 95
3.3 WIRKUNG VON RHAPC A U F DIE EXPRESSIONSRATEN VON STAMMZELL- UND
ANGIOGENESE-RELEVANTEN GENEN IN EPCS (SUPER ARRAY
SCREENINGUNTERSUCHUNGEN) 97
3.4 WIRKUNG VON RHAPC A U F DIE VEGF-C-MRNA-EXPRESSION IN HUVECS. 100
3.5 WIRKUNG VON RHAPC A U F DIE ENDOTHELIALE VEGF-C-FREISETZUNG 102
3.5.1 DOSISABHAENGIGKEIT 102
3.5.2 ZEITABHAENGIGKEIT 104
3.6 WIRKUNG VON RHAPC A U F DIE LEPTIN-MRNA-EXPRESSION IN EPCS 105
IMAGE 6
INHALTSVERZEICHNIS VI
3.7 WIRKUNG VON RHAPC A U F DIE ANGIOPOIETIN-2-MRNA- EXPRESSION IN EPCS
108
3.8 WIRKUNG VON RHAPC A U F DIE TSP-2-, PF-4- & IFNY- FREISETZUNG AUS
EPCS 112
3.9 WIRKUNG VON RHAPC A U F DIE TSP-2-, PF-4- & IFNY-MRNAEXPRESSION IN
EPCS 112
3.10 KONTINUIERLICHE KONTROLLE VON SPEZIFITAET UND EFFIZIENZ
DER QUANTITATIVEN PCR 113
KAPITEL 4: DISKUSSION
4.1 IDENTIFIZIERUNG VON EPCS I I S
4.2 A P C UND PROLIFERATION ENDOTHELIALER PROGENITORZELLEN 117
4.3 SUPER ARRAY SCREENING-UNTERSUCHUNGEN 118
4.4 VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR-C 120
4.5 LEPTIN 122
4.6 ANGIOPOIETIN-2 123
IMAGE 7
INHALTSVERZEICHNIS 1 1
4.7 UEBERTRAGBARKEIT DER BEOBACHTETEN RHAPC-EFFEKTE IM HINBLICK A U F DIE
EINGESETZTE DOSIS (IN VITRO VERSUS IN VIVO) 124
KAPITEL 5: ZUSAMMENFASSUNG
5 ZUSAMMENFASSUNG 126
KAPITEL 6: SUMMARV
6 SUMMARY 128
KAPITEL 7: LITERATURVERZEICHNIS
7 LITERATURVERZEICHNIS 130
KAPITEL 8: ANHANG
8.1 DANKSAGUNG 152
8.2 EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 153
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