Durchflusszytometrischer Nachweis von Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis-spezifischen Antikörpern im Blut von Rindern:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen
VVB Laufersweiler Verlag
2012
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| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | XIV, 184 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS IV
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VIII
VEROEFFENTLICHUNGEN XII
I EINLEITUNG 1
II SCHRIFTTUM 3
1 DIE PARATUBERKULOSE DES RINDES 3
1.1 TAXONOMIE UND CHARAKTERISIERUNG DES ERREGERS 3
1.2 WIRTSSPEKTRUM 5
1.3 UEBERTRAGUNG UND ANFAELLIGKEIT 6
1.4 STADIEN DER MAP-INFEKTION 7
2 DIE MAP-SPEZIFISCHE HUMORALE IMMUNANTWORT DES RINDES 8
2.1 VERLAUF DER MAP-SPEZIFISCHEN HUMORALEN IMMUNANTWORT 9
2.2 T H 1 - UND TH2-ASSOZIIERTE ANTIKOERPERSUBTYPEN 11
2.3 ANTIGENE VON MAP UND DEREN VERWENDUNG ZUM NACHWEIS MAPSPEZIFISCHER
ANTIKOERPER 13
2.3.1 ANTIGENGEMISCHE 13
2.3.2 LIPIDHALTIGE ANTIGENE 15
2.3.3 PROTEINANTIGENE 16
2.3.3.1 NACHWEISLICH IN VITRO EXPRIMIERTE PROTEINE MIT BEKANNTER
FUNKTION ODER LOKALISATION 19
2.3.3.2 REKOMBINANT HERGESTELLTE PROTEINE OHNE NACHWEISLICHE EXPRESSION
IN VITRO 23
3 SEROLOGISCHE NACHWEISVERFAHREN FUER MAP-INFEKTIONEN BEIM RIND 25
3.1 KOMPLEMENTBINDUNGSREAKTION 25
3.2 AGARGELIMMUNODIFFUSIONSTEST 26
3.3 ENZYME-LINKED-IMMUNOSORBENT ASSAY 26
3.4 DURCHFLUSSZYTOMETRIE-BASIERTER ANTIKOERPERNACHWEIS 33
III MATERIAL UND METHODEN 34
1 BAKTERIENSTAEMME 34
2 BETRIEBE 35
2.1 MAP-UNVERDAECHTIGE RINDERBETRIEBE 35
2.2 MAP-PROBLEMBETRIEBE 36
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS V
3 RINDER 38
3.1 KUEHE 38
3.2 KAELBER DER EXPERIMENTELLEN INFEKTIONSSTUDIE 39
3.3 KAELBER DER FELDSTUDIEN 41
3.3.1 KOHORTENSTUDIE 1 41
3.3.2 KOHORTENSTUDIE 2 41
4 EXPERIMENTELLE INFEKTIONSSTUDIE 44
5 SERUMPROBEN 46
6 KOTPROBEN 46
7 VERBRAUCHSMATERIALIEN UND LOESUNGEN 46
8 BAKTERIOLOGISCHE METHODEN 46
8.1 ANZUCHT DER BAKTERIENSTAEMME 46
8.2 KEIMZAHLBESTIMMUNG 49
8.2.1 LIVE/DEAD BACLIGHT* BACTERIAT VIABILITY AND COUNTING KIT 49
8.2.2 KBE-BESTIMMUNG UND OD 66O -MESSUNG 52
8.3 HERSTELLUNG DER TEST- UND PRAEADSORPTIONSANTIGENE 52
8.4 HERSTELLUNG DER INOKULA UND SCHEININOKULA 53
9 SEROLOGISCHE METHODEN 56
9.1 ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) 56
9.1.1 SVANOVIR-ELISA 57
9.1.2 POURQUIER-ELISA 58
9.1.3 CATTLETYPE-ELISA 59
9.2 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE ANTIKOERPER-TESTS (DFZM-AK-TESTS) 60
9.2.1 ETABLIERUNG UND OPTIMIERUNG DER DFZM-AK-TESTS 60
9.2.2 TEST- UND PRAEADSORPTIONSANTIGENE 61
9.2.3 DURCHFUEHRUNG DER DFZM-AK-TESTS 61
9.2.4 GATING-STRATEGIE UND AUSWERTUNG DER DFZM-AK-TESTS 63
10 STATISTISCHE AUSWERTUNG 65
IV ERGEBNISSE 66
1 IDENTIFIZIERUNG VON MAP-UNVERDAECHTIGEN BETRIEBEN 66
2 ETABLIERUNG UND EVALUIERUNG DER DFZM-AK-TESTS AN ADULTEN RINDERN 69
2.1 SERUM- UND SEKUNDAERANTIKOERPERKONZENTRATIONEN 69
2.2 MAP-WACHSTUMSPHASE 69
2.3 KONZENTRATION DER PRAEADSORPTIONS- UND TESTANTIGENE 71
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS VI
2.4 TITERBERECHNUNG 74
2.5 ART DES PRAEADSORPTIONSANTIGENS 75
2.6 VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNG DER TESTQUALITAET VON DFZM-AKTESTVARIANTEN
UND KOMMERZIELLEN ELISAS 78
3 ETABLIERUNG DES LIVE/DEAD BACLIGHT*-KITS 82
3.1 GATING-STRATEGIE BEI DER LIVE/DEAD BACLIGHT*-ANALYSE 82
3.2 KORRELATION DER VERSCHIEDENEN KEIMZAEHLMETHODEN 84
4 ERGEBNISSE DER EXPERIMENTELLEN INFEKTIONSSTUDIE 87
4.1 ERGEBNIS DER INOKULATIONSDOSIS-UEBERPRUEFUNG 87
4.2 MAP-STATUS DER MUTTERTIERE 88
4.3 ERGEBNIS DER KLINISCHEN UEBERWACHUNG DER KAELBER 90
4.4 DYNAMIK MAP-SPEZIFISCHER ANTIKOERPER IN DER KONTROLL- UND IN DER
INFEKTIONSGRUPPE 91
4.5 DYNAMIK DER MAP-SPEZIFISCHEN DFZM-AK-TITER BEIM EINZELNEN KALB 96
4.6 ANTIKOERPERTITER IM POURQUIER-ELISA 102
4.7 ERGEBNISSE DER KULTURELL-BAKTERIOLOGISCHEN UND MOLEKULARBIOLOGISCHEN
UNTERSUCHUNGEN 105
5 ERGEBNISSE DER FELDSTUDIEN 107
5.1 NACHWEIS MAP-SPEZIFISCHER MATERNALER ANTIKOERPER BEI KAELBERN UND
JUNGRINDERN (KOHORTENSTUDIE 1) 107
5.2 NACHWEIS DER MAP-SPEZIFISCHEN SEROKONVERSION BEI JUNGRINDERN
(KOHORTENSTUDIE 2) 113
V DISKUSSION 119
VI ZUSAMMENFASSUNG 145
VII SUMMARY 147
VIII LITERATURVERZEICHNIS 149
IX ANHANG 173
1 REAGENZIEN UND MATERIALIEN 173
2 PUFFER, MEDIEN UND LOESUNGEN 176
3 GERAETE 178
TABELLENVERZEICHNIS 179
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 181
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS VII
DANKSAGUNG 183
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