Verfügbarkeit: Differenzierungspotential von adulten humanen mesenchymalen Stammzellen unter GMP-konformen Isolations- und Expansionsbedingungen

Differenzierungspotential von adulten humanen mesenchymalen Stammzellen unter GMP-konformen Isolations- und Expansionsbedingungen:

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Behrends, Katharina (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	2014
Schlagworte:	Hochschulschrift
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Beschreibung:	IV, 97 S. Ill., graph. Darst.

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adam_text	AUS DEM INSTITUT FUER KLINISCHE UND EXPERIMENTELLE TRANSFUSIONSMEDIZIN (IKET) DER UNIVERSITAET TUEBINGEN AERZTLICHER DIREKTOR: PROFESSOR DR. H. NORTHOFF DIFFERENZIERUNGSPOTENTIAL VON ADULTEN HUMANEN MESENCHYMALEN STAMMZELLEN UNTER GMP-KONFORMEN ISOLATIONS- UND EXPANSIONSBEDINGUNGEN INAUGURAL-DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER ZAHNHEILKUNDE DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET DER EBERHARD KARLS UNIVERSITAET ZU TUEBINGEN VORGELEGT VON KATHARINA BEHRENDS AUS HILDESHEIM 2014 HTTP://D-NB.INFO/1052423507 INHALTSVERZEICHNIS 1. EINLEITUNG -1 * 1.1 DEFINITION STAMMZELLE -1 - 1.2 DIE MESENCHYMELE STAMMZELLE (MSC) - 3 - 1.2.1 GESCHICHTE UND DEFINITION DER MESENCHYMALEN STAMMZELLE - 3 - 1.2.2 VORKOMMEN UND GEWINNUNG VON HUMANEN MSCS - 6 - 1.2.3 EINSATZ UND KLINISCHE ANWENDUNGEN VON MSCS - 8 - 1.2.3.1 TISSUE ENGINEERING - 9 - 1.2.3.2 PARAKRINE EIGENSCHAFTEN -10 - 1.2.3.3 IMMUNMODULATORISCHE EIGENSCHAFTEN DER MSCS -10 - 1.2.3.4 WEITERE BEISPIELE FUER DIE KLINISCHE ANWENDUNG VON MSCS -10- 1.3 GMP-KONFORME BEDINGUNGEN UND KULTURMEDIEN FUER DIE AUFZUCHT UND DIFFERENZIERUNG VON HUMANEN MSCS -11 - 1.4 SICHERHEIT HUMANER BLUTPRODUKTE -14 - 1.5 FRAGESTELLUNG DER VORLIEGENDEN ARBEIT -15 - 2. MATERIAL -17- 2.1 GERAETE -17- 2.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN -18 - 2.3 ZELLKULTUNNEDIEN/ WASCHLOESUNGEN/ FARBEREAGENZIEN/ DIFFERENZIERUNGSMEDIEN -19 - 2.4 KITS - 20 - 2.5 SONSTIGES - 21 - 2.6 SOFTWARE - 21 - 3. METHODEN - 22 . I 3.1 ISOLATION DER MSCS MITTELS OICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION * 22 - 3.2 KULTIVIERUNG DER MSC - 23 - 3.2.1 AUSSAAT - 23 - 3.2.2 PASSAGIEREN - 24 - 3.2.3 ZELLZAHLBESTIMMUNG MIT DER NEUBAUER-ZAEHLKAMMER - 25 - 3.2.4 ELEKTRONISCHE ZELLZAHLBESTIMMUNG MIT CASY - 26 - 3.2.5 AUSSAAT DER ZELLEN - 26 - 3.2.6 KRYOKONSERVIERUNG - 30 - 3.3 DIFFERENZIERUNG UND FAERBUNG - 31 - 3.3.1 ADIPOGENE DIFFERENZIERUNG - 31 - 3.3.1.1 ZUSAMMENSETZUNG DER DIFFERENZIENINGSMEDIEN - 31 - 4.3.1.2 OELROTFAERBUNG ZUM NACHWEIS DER ADIPOGENEN DIFFERENZIERUNG DER MSCS - 32 - 3.3.2 OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG - 34 - 3.3.2.1 ZUSAMMENSETZUNG DES DIFFERENZIERUNGSMEDIUMS - 34 - 4.3.2.2 FAERBUNG ZUM NACHWEIS DER OSTEOGENEN DIFFERENZIERUNG DER MSCS - 34 - 3.3.3 CHONDROGENE DIFFERENZIERUNG - 36 - 4.3.3.1 ZUSAMMENSETZUNG DES DIFFERENZIERUNGSMEDIUMS - 36 - 4.3.3.2 FAERBUNG DES MICROMASS-PELLETS ZUM NACHWEIS DER CHONDROGENEN DIFFERENZIERUNG -37- 3.3.4 KOLONIEBILDUNG UND CFU-FAERBUNG - 38 - 4.3.4.1 AUSSAAT DER MSCS IN 6-WELLS -38- 4.3.4.2 FAERBUNG DER WELLS MIT KRISTALLVIOLETT ZUM NACHWEIS DER KOLONIEBILDUNG - 39 - 3.4 RNARLSOLIERUNG MIT DNASE-VERDAU - 39 - 3.5 CDNA-SYNTHESE - 42 - 3.6 QUANTITATIVE REAL-TIME-PCR 43 - 3.6.1 END-POINT-ANALYSEN -43- 3.6.2 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR - 43 - 4.6.2.1 DIE PCR (POLYMERASE KETTENREAKTION) - 44 - 4.6.2.2 QUANTIFIZIERUNG DER TRANSKRIPTE MIT SYBR GREEN I - 44 - 4.6.2.3 DER CROSSING POINT - 45 - 4.6.2.4 PRINZIP DER QUANTIFIZIERUNG: - 45 - 4.7 PCR-AUSWERTUNG - 46 - 4.7.1 SCHMELZKURVEN-ANALYSE -46- 4.7.2 ZIELGENE DIESER ARBEIT - 47 - II 4.8 DER LIGHTCYCLER - 48 - 4.8.1 AUFBAU DES LIGHTCYDERS -48 - 4.8.2 DURCHFUEHRUNG DER QRT-PCRS - 49 - 4.8.2.1 PIPETTIERVORGAENGE - 49 - 4.8.2.2 PHASEN DES PCR-LAUFS - 50 - 4.9 AUSWERTUNG DER DATEN - 52 - 4.10 GELELEKTROPHORESE - 52 - 4. ERGEBNISSE - 54 - 4.1 NATIVBILDER * 54 - 4.2 KOLONIEBILDUNG - 55 - 4.2.1 MITTELWERTE DER GEZAHLTEN KOLONIEN AUS DEN 6-WELL-PLATTEN FOR H121 - 55 - 4.2.2 MITTELWERTE DER GEZAEHLTEN KOLONIEN AUS DEN 6-WELL-PLATTEN FUER H122 - 56 - 4.2.3 MITTELWERTE DER GEZAEHLTEN KOLONIEN AUS DEN 6-WELL-PLATTEN FUER H123 - 56 - 4.3 FAERBUNG DER ZELLEN - 58 - 4.3.1 ADIPOGENE DIFFERENZIERUNG - 58 - 4.3.2 OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG - 59 - 4.3.3 CHONDROGENE DIFFERENZIERUNG - 60 - 4.4 DIFFERENZIERUNG UND EXPRESSION VON ZIELGENEN - 60 - 4.4.1 ADIPOGENE DIFFERENZIERUNG - 61 - 4.4.2 OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG - 63 - 4.4.3 CHONDROGENE DIFFERENZIERUNG - 66 - 4.5 GELELEKTROPHORESE . - 68 - 5. DISKUSSION - 73 - 5.1 DISKUSSION DER DEFINITION MESENCHYMALER STAMMZELLEN - 73 - 5.2 DISKUSSION DES PATIENTENGUTS - 73 - 5.3 DISKUSSION DER PASSAGENANZAHL - 74 - 5.4 DISKUSSION DER KULTURSUPPLEMENTE - 74 - III 5.5 DISKUSSION DER DIFFERENZIERUNG UNTER DEN VERSCHIEDENEN MEDIENBEDINGUNGEN - 75 - 5.5.1 ADIPOGENE DIFFERENZIERUNG ; - 76 - 5.5.2 OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG - 77 - 5.5.3 CHONDROGENE DIFFERENZIERUNG - 80 - 5.6 DISKUSSION DER MEDIEN - 82 - 5.7 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK - 83 - 6. LITERATURVERZEICHNIS - 85 - 7. ANHANG - 92 - 7.1 ABBILDUNGSVERZEICHNIS - 92 - 7.2 TABELLENVEIZEICHNIS - 93 - 7.3 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS - 94 - 8. DANKSAGUNG - 97 - IV
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