Neue Einblicke in die Oozysten-Hüllbildung von Eimeria nieschulzi (Apicomplexa, Coccidia):
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2014
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| Beschreibung: | VII, 161 S. Ill., graph. Darst. |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
I. EINLEITUNG 1
1.1 DER STAMM APICOMPLEXA 2
1.1.1 DER APIKAIKOMPLEX 2
1.1.2 DER APIKOPIAST 3
1.2 COCCIDIA (COCCIDIASINA (
LEUCKART
1879)) 4
1.3 DIE GATTUNG EIMERIA UND DER MODELLORGANISMUS EIMERIA NIESCHULZI 4
1.3.1 EIMERIA NIESCHULZI 5
1.3.2 SYSTEMATIK VON EIMERIA NIESCHULZI (L
EVINE
ETAL. 1980; A
DL
ETAT. 2005) 5
1.3.3 ENTWICKLUNGSZYKLUS VON EIMERIA NIESCHULZI. 6
1.4 DIE EIGENSCHAFTEN UND BESTANDTEILE DER COCCIDIENOOZYSTE 10
1.4.1 LIPIDE UND FETTSAEUREN DER OOZYSTENHUELLE 11
1.4.2 GAMOGONIE-PROTEINE 11
1.5 TRANSFEKTION VON COCCIDIEN DER GATTUNG EIMERIA 13
1.6 ZIELSTELLUNG 13
II. , TIERE, MATERIAL UND METHODEN 15
11.1 PARASITENGEWINNUNG UND REINIGUNG VON EIMERIA NIESCHULZI 15
11.1.1 OOZYSTENGEWINNUNG 15
11.1.2 OOZYSTENREINIGUNG 15
11.1.3 SPOROZOITENGEWINNUNG UND REINIGUNG 16
11.2 PARASITENGEWINNUNG UND REINIGUNG VON EIMERIA TENELLA 17
11.2.1 OOZYSTENGEWINNUNG 17
11.2.2 OOZYSTENREINIGUNG 18
11.2.3 SPOROZOITENGEWINNUNG UND REINIGUNG 18
11.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 19
11.3.1 GEWINNUNG GENOMISCHER DNS AUS EIMERIA NIESCHULZI & EIMERIA
TENELLA 19
11.3.2 PCR (ENGL. POLYMERASE CHAIN REACTION;(SALKL ETAL. 1985),
MODIFIZIERT) 20
11.3.3 GRADIENTEN-PCR 21
11.3.4 TOUCH-DOWN-PCR (DON ETAL. 1991), MODIFIZIERT 21
11.3.5 MEGAPRIMER-PCR (SARKAR ETAL. 1990; BARIK 2002), MODIFIZIERT 22
11.3.6 DNS-AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 23
11.3.7 EXTRAKTION UND REINIGUNG VON DNS-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGELEN 23
HTTP://D-NB.INFO/1048754626
INHALTSVERZEICHNIS
DISSERTATION
SACHA HANIG
11.3.8 PRAEPARATIVE DNS-RESLRIKTION VON PCR-AMPLIFIKATEN UND PLASMIDEN
MITTELS
ENDONUKLEASEN 23
11.3.9 ANALYTISCHE DNS-RESTRIKTION MITTELS ENDONUKLEASEN
(KONTROLLVERDAU) 24
11.3.10 DNS-RESTRIKTION FUER TRANSFEKTION VON EIMERIA NIESCHULZI 25
11.3.11 DEPHOSPHORYLIERUNG VON LINEARISIERTEN PLASMIDEN 25
11.3.12 LIGATION VON DNS-FRAGMENTEN (MUELHARDT 2009) 25
11.3.13 HERSTELLEN CHEMISCH KOMPETENTER
ESCHERICHIA COLI
(MUELHARDT 2009) 26
11.3.14 TRANSFORMATION VON ESCHERICHIA CO// (MUELHARDT 2009) 26
11.3.15 PLASMID-PRAEPARATIONEN 27
11.3.16 DNS-SEQUENZIERUNG 27
11.3.17 TRANSFEKTION VON EIMERIA NIESCHULZI (KURTH ET AL. 2009) 27
11.4 HERSTELLUNG DER PLASMIDE FUER REPORTER GEN VERSUCHE 29
11.4.1 PG56YY 29
11.4.2 PDLY-T
1 29
11.4.3 PDLY-T1FETG56 29
11.4.4 PDLY-T4 30
11.4.5 PDLY-T4FETGAM22 30
11.4.6 PDLY-MC 30
11.4.7 FUSIONSPLASMIDE PDLY-ETG56-N UND PDLY-ETG56-C, PDLY-ETG56-YS 30
11.4.8 FUSIONSPLASMIDE PDLY-ETG56-SIG, PDLY-ETG56-NSIG, PDLY-ETG56-NDEL
31
11.4.9 ETGAM59 REPORFERGENPLASMIDE 33
11.4.10 FUSIONSPLASMIDE PDLY-ETG59-N, PDLY-ETG59-C UND PDLY-ETG59-YSM 33
11.5 IMMUNHISTOCHEMIE 34
11.5.1 INDIREKTER-FLUORESZENZ-ANTIKOERPER-TEST (IFAT) 34
11.5.2 IMMUNDETEKTION AUF PARAFFINSCHNITTEN 35
11.6 BIOCHEMISCHE ANALYSEN 37
11.6.1 HERSTELLUNG VON PROTEIN EXTRAKTEN AUS MAKROGAMONTEN 37
11.6.2 TRICIN-SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 38
11.6.3 COOMASSIE-FAERBUNG DER PROTEINGELE 39
11.6.4 WESTERN BLOT (TANK-BLOT-VERFAHREN) 39
11.7 MIKROSKOPIE
UND
FOTOGRAFIE 40
11.8 VERWENDETE DATENBANKEN UND SOFTWARE 40
II
INHALTSVERZEICHNIS
DISSERTATION
SACHA HANIG
11.8.1 BILDAUFNAHME- UND BILDBEARBEITUNG-SOFTWARE 40
11.8.2 SEQUENZANALYSE 40
III. ERGEBNISSE 42
111.1 AUSWAHL DER GENE FUER DIE REPORTERGEN-STUDIEN 42
111.2 REPORTERGEN-PLASMIDE DER GENE ETGAM56 UND ETGAMZ2 42
111.2.1 STADIENSPEZIFISCHE EXPRESSION DES ETGAM56-GENS 42
111.2.2 ERSTMALIGE REPORTERGEN-EXPRESSION VON ETGAM56 IN EIMERIA
NIESCHULZI 46
111.2.3 STADIENSPEZIFISCHE EXPRESSION DURCH DEN 5 -FLANKIERENDEN BEREICH
DES ETGAM22-GENS
50
111.2.4 PDLY-T4FETG22 50
111.2.5 REPORTERPLASMIDE MIT FUSIONSPROTEINEN AUS ETGAM56 UND MCHERRY 51
111.2.6 REPORTERPLASMIDE FUER DIE EINGRENZUNG DER TRANSPORTSEQUENZ VON
ETGAM56 IN DIE
WFBS II 69
111.3 REPORTERPLASMIDE ZUR UNTERSUCHUNG DES PROTEINS ETGAM59 76
111.3.1 PDLY-T5FEIG59 76
111.3.2 CHIMAERE REPORTERPROTEINE AUS ETGAM59 UND MCHERRY 79
111.4 PHYLOGENETISCHER VERGLEICH DER GARN-PROTEINE 91
111.5 VERGLEICH DER AUTOFLUORESZENZ DER OOZYSTEN EINIGER EIMERIA-ARTEN
93
IV. DISKUSSION 95
IV.1 STADIENSPEZIFISCHE EXPRESSION VON TDTOMATO WAEHREND DER GAMOGONIE IN
EIMERIA NIESCHULZI
95
IV.2 REPORTERGENSTUDIEN ZU ETGAM22 97
IV.3 DIE STADIENSPEZIFISCHE EXPRESSION VON FUSIONSPROTEINEN AUS ETGAM56
UND FLUOROCHROMEN
WAEHREND DER GAMOGONIE UND OOZYSTEN-HUELLBILDUNG 99
IV.3.1 ERSTER TEST VON ETGAM56 ALS REPORTERPROTEIN IN EIMERIA NIESCHULZI
99
IV.3.2 DIE REPORTERGENPLASMIDE PDLY-ETG56-N, PDLY-ETG56-C UND
PDLY-ETG56-YS
100
IV.3.3 DIE REPORTERGENPLASMIDE PDLY-ETG56-SIG, PDLY-ETG56-NSIG UND
PDLY-ETG56-NDEL
108
IV.4 DIE STADIENSPEZIFISCHE EXPRESSION VON FUSIONSPROTEINEN AUS ETGAM59
UND FLUOROCHROMEN
WAEHREND DER GAMOGONIE, OOZYSTEN-HUELLBILDUNG UND SPOROGONIE 114
IV.5 PHYLOGENETISCHER VERGLEICH MEHRERER FUER GAM-PROTEINE KODIERENDER
SEQUENZEN 118
IV.6 AUTOFLUORESZENZ UND EIGENSCHAFTEN DER OOZYSTENHUELLE 120
III
INHALTSVERZEICHNIS
DISSERTATION
SACHA HANIG
IV.6.1 DITYROSIN-STRUKTUREN, *TANNING-PROZESSE UND KONVERGENZEN 121
IV.7 ABSCHLIESSENDE BETRACHTUNGEN 123
V. LITERATUR 126
VI. ZUSAMMENFASSUNG 145
VII. ANHANG 147
VII.1 REZEPTE 147
VII.1.1 EXZYSTATIONSMEDIEN 147
VLL.1.2 TRANSFEKTION VON EIMERIA NIESCHULZI 147
VII.1.3 ZELLKULTUR R 148
VII.
1.4 KULTIVIERUNG VON ESCHERICHIA COLI (E.COLI) 148
VII.1.5 DNS-AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 148
VII.1.6 TRANSFORMATION VON ESCHERICHIA COLI. 149
VII.1.7 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 149
VII.1.8 WESTERN BLOT 151
VII.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE ARBEITEN 152
VLL.2.1 PRIMER-TABELLE 152
VII.2.2 PLASMIDKARTEN DER VERWENDETEN BZW. HERGESTELLTEN PLASMIDE 154
VLL.2.3 SEQUENZVERGLEICHE (ALIGNMENTS) 157
VII.3 GERAETE UND GEBRAUCHSMATERIAL 158
VII.4 CHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSLOESUNGEN 160
VII.5 GENTECHNISCHE ARBEITEN 160
VII.6 TIERVERSUCHE 160
VII.7 ERKLAERUNG ENTSPRECHEND §5.5 DER PROMOTIONSORDNUNG 161
IV
|
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