Untersuchung zur Bedeutung des Transkriptionsfaktors FoxM1 beim humanen Medulloblastom:
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2013
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ZUSAMMENFASSUNG IX
SUMMARY XI
1 EINLEITUNG 12
1.1 DAS MEDULLOBLASTOM 12
1.1.1 URSPRUNG UND KLASSIFIKATION 13
1.1.2 SYMPTOME. DIAGNOSTIK UND THERAPIE 16
1.1.3 WICHTIGE SIGNALWEGE BEIM MEDULLOBLASTOM 17
1.1.4 MAUSMODELLE DES MEDULLOBLASTOMS 20
1.2 DIE FAMILIE DER FORKHEAD-BOX-PROTEINE 22
1.2.1 DER TRANSKRIPTIONSFAKTOR FOXML 22
1.2.2 PHYSIOLOGISCHE BEDEUTUNG VON
FOXML 23
1.2.3 ONKOLOGISCHE BEDEUTUNG VON FOXML 24
1.3 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 25
2 MATERIAL UND METHODEN 26
2.1 PRIMERSEQUENZEN 26
2.2 HUMANE PROBEN 27
2.2.1 EIGENE KOHORTE 27
2.2.2 MICROARRAYDATEN HUMANER MEDULLOBLASTOME 27
2.3 ARBEITEN MIT EUKARYOTISCHEN ZELLEN 27
2.3.1 HUMANE MEDULLOBLASTOMZELLLINIEN 27
2.3.2 TRANSFEKTION 28
2.3.3 PRODUKTION LENTIVIRALER PARTIKEL 28
2.3.4 INFEKTION MIT LENTIVIREN 28
* 2.3.5 BESTIMMUNG DER ZELLVIABILITAET 28
2.3.6 ANALYSE DES SPINDELAPPARATS 28
2.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 29
2.4.1 ISOLATION VON MRNA 29
2.4.2 GENERIERUNG VON CDNA 29
2.4.3 RELATIVE QUANTIFIZIERUNG MITTELS QRT-PCR 29
2.4.4 ISOLATION VON GESAMTPROTEIN AUS ZELLPELLETS 30
HTTP://D-NB.INFO/1050019199
INHALTSVERZEICHNIS V
2.4.5 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 30
2.4.6 SDS-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 30
2.4.7 SPEZIFISCHER
NACHWEIS VON PROTEIN
DURCH WESTERN BLOT 31
2.5 HISTOLOGISCHE METHODEN 32
2.5.1 IMMUNOHISTOCHEMIE 32
2.5.2 IMMUNOFLUORESZENZFAERBUNG 32
2.6 TIEREXPERIMENTELLE ARBEITEN 32
2.6.1 GENOTYPISIERUNG DER VERWENDETEN MAUSLINIEN 33
2.6.1.1 ISOLATION GENOMISCHER DNA
AUS MAUSSCHWANZBIOPSIEN
... 33
2.6.1.2 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) ZUM NACHWEIS DES GENO-,
TYPS 33
2.6.2 PRIMAERZELLKULTUR 34
2.6.3 INJEKTION VON LENTIVIRALEN PARTIKELN 34
2.6.4 SUBKUTANE INJEKTION VON TUMORZELLEN 34
2.7 STATISTISCHE ANALYSEN 35
3 ERGEBNISSE 36
3.1 EXPRESSIONSPROFIL VON FAXML IM HUMANEN MEDULLOBLASTOM 36
3.2 FAXML ALS PROGNOSTISCHER MARKER 37
3.2.1 FOXML ALS HISTOLOGISCHER PROGNOSTISCHER MARKER 37
3.2.2 MULTIVARIATENANALYSE VON MICROARRAYDATEN 39
3.3 ZELLULAERE FUNKTION VON
FAXML 41
3.3.1 EXPRESSIONSLEVEL VON FOXML
UND ZUSAMMENHANG MIT DER ZELLVIABILITAET 41
3.3.2 FOXML UND KLINISCH RELEVANTE
MEDIKAMENTE 42
3.3.3 AUSWIRKUNG DES KNOCK-DOWNS
VON FOXML AUF DIE AUSBILDUNG DES
SPINDELAPPARATS 44
3.3.4 INHIBIERUNG VON FAXML MIT SIOMYCIN
A 46
3.3.5 SIOMYCIN A BEWIRKT EINE FEHLBILDUNG DES SPINDELAPPARATS 48
3.3.6 FOXML ALS MOEGLICHES
BINDEGLIED ZWISCHEN
SHH- UND WNT-SIGNALWEG 50
3.4 IN VIVO-EXPERIMENTE 54
3.4.1 EINFLUSS VON FOXML AUF DAS UEBERLEBEN 54
3.4.2 AKUTER KNOCK-OUT VON FOXML IN PRIMAEREN MEDULLOBLASTOMKULTUREN 56
3.4.3 INJEKTION LENTIVIRALER PARTIKEL 58
3.4.4 EFFEKT VON
SIOMYCIN A BEI XENOGRAFTMODELLEN 60
3.4.5 INTERAKTION VON FOXML UND WNT 60
4 DISKUSSION 64
4.1 BEDEUTUNG VON FOXML ALS PROGNOSTISCHER MARKER 64
4.2 ZELLULAERE FUNKTION VON
FAXML 66
4.3 BEDEUTUNG VON FAXML FUER DAS MEDULLOBLASTOM IN VIVO 67
4.4 AUSBLICK 70 *
A KLINISCHE DETAILS DER UNTERSUCHTEN TUMOREN 72
INHALTSVERZEICHNIS VI
B EXPRESSION VON FOXML IN BEZUG ZUR HISTOLOGIE UND ALTER 74
AUTORENINDEX 75
LITERATURVERZEICHNIS 79
DANKSAGUNG 103
EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 107
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