Studien zur Expression von Megalencephalic leukoencephalopathy with subcortical cysts 1 (MLC1/Mlc1) in humanen und murinen Geweben:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2013
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|---|---|
| adam_text | 1. EINLEITUNG .. 1
1.1. DIE SCHIZOPHRENIE 1
1.1.1. GESCHICHTE DER ERKRANKUNG 1
1.1.2. AKTUELLE KLASSIFIKATIONSSYSTEME 3
1.1.3. HYPOTHESEN ZU DEN URSACHEN DER SCHIZOPHRENIE 5
1.1.4. MUTATIONEN DES GENS MEGALENCEPHALTC LEUKOENCEPHALOPATHY WITH
SUBCORFICAL CYSTS I
ALS MOEGLICHE URSACHE DER PERIDISCHEN KATATONIE NACH LEONHARD 6
1.2. DIE MEGAIENZEPHAIE LEUKENZEPHALOPATHIE MIT SUBKORTIKALEN ZYSTEN 9
1.2.1. ERSTBESCHREIBUNG, SYMPTOMATIK UND PATHOGENESE 9
1.2.2. MIC I-MUTATIONEN ALS URSACHE DER MEGALENZEPHALEN
LEUKENZEPHALOPATHIE MIT
SUBKORTIKALEN ZYSTEN 10
1.3. DAS MIC I-GEN 12
1.3.1. STRUKTUR DES GENLOKUS UND BIOCHEMISCHE EIGENSCHAFTEN DES PROTEINS
12
1.3.2. EXPRESSIONSSTUDIEN 13
2. FRAGESTELLUNG, ZIELE UND EXPERIMENTELLE STRATEGIE
15
3. MATERIAL UND METHODEN 18
3.1. MATERIALIEN 18
3.1.1. GEWEBEPROBEN 18
3.1.2. C DNA-PLASMIDE 18
3.1.3. MOLEKULARBIOLOGISCHE KITS UND VORGEFERTIGTE REAGENZIEN 19
3.1.4. ZELLKULTUR 19
3.1.5. DNA/RNA-ANALYTIK 19
3.1.6. PROTEINANALYTIK 22
3.1.7. LABORGERAETE 23
3.2. METHODEN 25
3.2.1. ALLGEMEINE METHODEN: NUKLEINSAEUREN 25
3.2.1.1. PHOTOMELRISCHE BESTIMMUNG DER
NUKLEINSAEURE-KONZENTRATION IN
WAESSRIGEN LOESUNGEN.
25
3.2.1.2. DNA-GELELEKTROPHORESE MIT AGAROSE-GELEN 25
3.2.1.3. DNA-EXTRAKTION AUS PCR-ANSAETZEN 26
3.2.1.4. DNA-EXTRAKTION AUS AGAROSE-GELEN 27
3.2.1.5. DNA/RNA-AUFREINIGUNG DURCH
PHENOL-CHLOROFORM-ISOAMYLALKOHOL-PHASENTRENNUNG... 27
3.2.1
.6.
DNA/RNA-KONZENTRIERUNG DURCH
ISOPROPANOL/ETHANOL-PRAEZIPITATION 28
3.2.1.7. DNA-SEQUENZIERUNG NACH
SANGER 29
INHALTSVERZEICHNIS L
HTTP://D-NB.INFO/1050272226
3.2.2. ALLGEMEINE METHODEN: BAKTERIENKULTUR 30
3.2.2.1. HERSTELLUNG CHEMOKOMPETENTER ER2566-ZELLEN 30
3.2.2.2. TRANSFORMATION CHEMOKOMPETENTER ER2566-ZELLEN
MIT PLASMIDEN 30
3.2.2.3. AUFREINIGUNG VON PLASMID-DNA (MINIPREP) 31
3.2.2.4. AUFREINIGUNG VON PLASMID-DNA (MAXIPREP) 32
3.2.3. IN SITU-HYBRIDISIERUNG HUMANER UND MURINER GEHIRNSCHNITTE 33
3.2.4. GEWINNUNG VON CDNA AUS HUMANEN GEWEBEN 37
3.2.5. BESTIMMUNG DER GEWEBESPEZIFISCHEN MIC 1-EXPRESSION MITTELS
QRT-PCR 39
3.2.6. HERSTELLUNG EINES MLC1
-VAKZINIERUNGSPROTEINS 48
3.2.6.1. HERSTELLUNG DES VAKZINIERUNGSPLASMIDS 48
3.2.6.2. TRANSFORMATION DES E.COLI-STRAIN ER2566 MIT
DEM LIGIERTEN VAKZINIERUNGSVEKTOR
UND
NACHWEIS DER
REKOMBINANTEN DNA-SEQUENZ 52
3.2.6.3. EXPRESSION DES FUSIONSPROTEINS 53
3.2.6.4. FREISETZUNG DER ZELLPROTEINE 54
3.2.6.5. ISOLIEIUNG DES VAKZINIERUNGSPROTEINS DURCH
CHITINSAEULENCHROMATOGRAPHIE UND DTT-
INDUZIERTE SELBST-SPLEISSUNG DER
INTEIN-DOMAENE 55
3.2.6.6. NACHWEIS DES VAKZINIERUNGSPROTEINS 56
3.2.7. SOFTWARE 59
4. ERGEBNISSE 60
4.1. VERGLEICH DER ZEREBRALEN MICI
/MIEL
-EXPRESSION BEI MENSCH UND MAUS
MITTELS
IN
SIFU-HYBRIDISIERUNG 60
4.1.1. HERSTELLUNG DER CRNA-SONDEN ZUR IN SFTU-HYBRIDISIERUNG 60
4.1.2. IN SIFU-HYBRIDISIERUNG HUMANER UND MURINER GEHIRNSCHNITTE 60
4.2. BESTIMMUNG DER RELATIVEN
MICI-EXPRESSION IN VERSCHIEDENEN HUMANEN
GEWEBEN DURCH QRT-PCR 64
4.2.1. ERHEBUNG DER PRIMAERDATEN 64
4.2.2. ERGEBNISSE DER QRT-PCR DER HOUSEKEEPING-GENE 66
4.2.3. ERGEBNISSE DER QRT-PCR VON MLCI 68
4.3. HERSTELLUNG EINES MLC1
-VAKZINIERUNGSPROTEINS ZUR GEWINNUNG EINES ANTI-
MLC1-ANTISERUMS 70
4.3.1. DESIGN DES
MLC1
-VAKZINIERUNGSPROTEINS 70
4.3.2. KLONIERUNG DES
MLC
1 -VAKZINIERUNGSVEKTORS UND TRANSFORMATION VON ER2566-ZEILEN 72
4.3.3. EXPRESSION DES
MLC1
-VAKZINIERUNGSPROTEINS. AUFREINIGUNG UND NACHWEISTESTS 75
II
INHALTSVERZEICHNIS
5. DISKUSSION 82
5.1. DIFFERENTIELLE
M LC
I
/MIC
/ - EXPRESSION BEI
MENSCH UND MAUS 82
5.2. FUNKTIONELLE BEDEUTUNG VON MLC1 85
5.3. AUSBLICK 93
6. ZUSAMMENFASSUNG 94
7.
A
NHANG 96
7.1. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 96
7.2. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 98
7.3. TABELLENVERZEICHNIS 100
7.4. LITERATUR- UND QUELLENVERZEICHNIS 101
DANKSAGUNG
LEBENSLAUF
INHALTSVERZEICHNIS III
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